本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其是涉及一種耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)、檢測方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：遺傳性耳聾是指由于基因和染色體異常所致的耳聾。這種疾病是由父母的遺傳物質(zhì)(包括染色體及位于其中的基因)發(fā)生了改變傳給后代而引起的耳聾，并且在子孫后代中以一定數(shù)量出現(xiàn)。據(jù)統(tǒng)計，在每1000個新生兒中就有一位患有先天性耳聾，其中60％以上是由遺傳因素引起的。在所有耳聾病人中，遺傳性耳聾約占50％。遺傳性耳聾分為綜合征性遺傳性耳聾及非綜合征性遺傳性耳聾兩大類。前者指除了耳聾以外，同時存在眼、骨、腎、皮膚等部位的病變，這類耳聾占遺傳性聾的30％；后者只出現(xiàn)耳聾的癥狀，在遺傳性聾中占70％。單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms，snp)是指在基因組上單個核苷酸的變異，包括轉(zhuǎn)換、顛換、缺失和插入，形成的遺傳標(biāo)記，其數(shù)量很多，多態(tài)性豐富。從理論上來看每一個snp位點都可以有4種不同的變異形式，但實際上發(fā)生的只有兩種，即轉(zhuǎn)換和顛換，二者之比約為2:1。snp在cg序列上出現(xiàn)最為頻繁，而且多是c轉(zhuǎn)換為t，原因是cg中的胞嘧啶常被甲基化，而后自發(fā)地脫氨成為胸腺嘧啶。一般而言，snp是指變異頻率大于1％的單核苷酸變異。在人類基因組中大概每1000個堿基就有一個snp。人類基因組上的snp總量大概是3×106個。因此，snp成為第三代遺傳標(biāo)志，人體許多表型差異、對藥物或疾病的易感性等都可能與snp有關(guān)。研究表明，遺傳性耳聾與其相關(guān)基因的snp息息相關(guān)，因此，開展對遺傳性耳聾相關(guān)基因snp的檢測對耳聾的分子流行病學(xué)研究和聾兒的提前篩查具有重要的意義。技術(shù)實現(xiàn)要素：基于此，有必要提供一種耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)、檢測方法和應(yīng)用。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下。一種耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)，包括下表中組別為1～17的17組引物組合中的至少一組：其中，每組引物組合包括pcr擴(kuò)增引物對及與該pcr擴(kuò)增引物對對應(yīng)的測序引物。在其中一個實施例中，所述pcr擴(kuò)增引物對的每條引物的5’端還連接有保護(hù)片段。在其中一個實施例中，所述保護(hù)片段的序列如seqidno:61所示。在其中一個實施例中，所述耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)包括組別為1～17的共17組引物組合。一種耳聾檢測方法，使用上述任一實施例所述的耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)，所述耳聾檢測方法包括如下步驟：使用所述pcr擴(kuò)增引物對對基因組dna進(jìn)行pcr擴(kuò)增；使用所述測序引物對pcr擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行單堿基延伸；將單堿基延伸的產(chǎn)物與靶片的基質(zhì)共結(jié)晶，并將得到的晶體置于質(zhì)譜儀中，進(jìn)行質(zhì)譜檢測。在其中一個實施例中，所述耳聾檢測方法還包括在進(jìn)行所述單堿基延伸之前對pcr擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行純化，和/或在共結(jié)晶之前對所述單堿基延伸的產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽處理的步驟。上述耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)可應(yīng)用在制備用于檢測耳聾的試劑中，如：一種耳聾檢測試劑盒，含有上述任一實施例所述的耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)。在其中一個實施例中，所述耳聾檢測試劑盒還包括dna提取試劑、pcr擴(kuò)增試劑、pcr產(chǎn)物純化試劑、單堿基延伸試劑和延伸產(chǎn)物純化試劑中的至少一種。在其中一個實施例中，所述耳聾檢測試劑盒還包括陽性對照試劑和陰性對照試劑。本發(fā)明的耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)、試劑盒等可用于massarraysnp檢測系統(tǒng)，利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(maldi—tofms)技術(shù)進(jìn)行基因snp的檢測。上述引物系統(tǒng)可以各組引物分開使用以檢測單一snp位點的突變情況，也可以組合使用以同時檢測多個snp位點的突變情況，并且上述引物系統(tǒng)在組合使用時，各組之間不存在相互干擾，可以一次性同時檢測多個snp位點，檢測通量高、速度快。利用本發(fā)明的耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)、試劑盒及檢測方法可廣泛用于遺傳性耳聾的基因突變情況的檢測分析過程中，尤其是中國遺傳性非綜合征型耳聾人群，速度快并且節(jié)約時間，有助于及早發(fā)現(xiàn)攜帶耳聾基因突變的患兒(包括遲發(fā)性聽力缺陷患兒)，為后期的診斷及治療提供科學(xué)依據(jù)，有助于及時采取干預(yù)措施預(yù)防言語障礙的發(fā)生，有效地降低聾啞發(fā)病率。附圖說明圖1-圖26為陰性對照組的各位點的質(zhì)譜圖；圖27-圖31為部分實驗組的相應(yīng)位點的質(zhì)譜圖。具體實施方式為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。附圖中給出了本發(fā)明的較佳實施例。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來實現(xiàn)，并不限于本文所描述的實施例。相反地，提供這些實施例的目的是使對本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更加透徹全面。除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語與屬于本發(fā)明的
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說明書中所使用的術(shù)語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語“和/或”包括一個或多個相關(guān)的所列項目的任意的和所有的組合。一實施方式的耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)，包括下表1中組別為1～17的17組引物組合中的至少一組，每組引物組合包括pcr擴(kuò)增引物對及與該pcr擴(kuò)增引物對對應(yīng)的測序引物(unextensionprimer，uep，又稱未延伸引物)。表1優(yōu)選的，該pcr擴(kuò)增引物對的每條引物的5’端還連接有保護(hù)片段。該保護(hù)片段可含有5～25個堿基，通過增大pcr引物的分子量，可以防止引物二聚體的產(chǎn)生，以便于后續(xù)的擴(kuò)增。該保護(hù)片段的序列可以是但不限于如seqidno:61所示(5’-acgttggatg-3’)。進(jìn)一步，在一優(yōu)選的實施方式中，該耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)包括組別為1～17的共17組引物組合，其中，17對pcr引物對可以等摩爾量混合在一起構(gòu)成多重pcr擴(kuò)增引物系統(tǒng)，17組uep也可以等摩爾量混合在一起構(gòu)成uepmix。一實施方式的耳聾檢測方法，其使用上述耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)，該耳聾檢測方法包括如下步驟：步驟一：使用上述pcr擴(kuò)增引物對對基因組dna進(jìn)行pcr擴(kuò)增；步驟二：使用上述測序引物對pcr擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行單堿基延伸，在snp位點上延伸1個堿基；步驟三：將單堿基延伸的產(chǎn)物與靶片的基質(zhì)共結(jié)晶，并將得到的晶體置于質(zhì)譜儀中，進(jìn)行質(zhì)譜檢測。進(jìn)一步，該耳聾檢測方法還包括在步驟二之前對pcr擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行純化，和/或在步驟三之前對該單堿基延伸的產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽處理的步驟。在將共結(jié)晶的晶體放入質(zhì)譜儀的真空管中進(jìn)行質(zhì)譜檢測時，可以使用瞬時納秒(10-9s)強(qiáng)激光激發(fā)，由于基質(zhì)分子經(jīng)輻射所吸收的能量，導(dǎo)致能量蓄積并迅速產(chǎn)熱，從而使基質(zhì)晶體升華，核酸分子就會解吸附并轉(zhuǎn)變?yōu)閬喎€(wěn)態(tài)離子，產(chǎn)生的離子多為單電荷離子，這些單電荷離子在加速電場中獲得相同的動能，進(jìn)而在一非電場漂移區(qū)內(nèi)按照其質(zhì)荷比率加以分離，在真空管中飛行到達(dá)檢測器，maldi產(chǎn)生的離子常用飛行時間檢測器來檢測，離子質(zhì)量越小，就越快到達(dá)，理論上講，只要飛行管長度足夠，飛行時間檢測器可檢測分子的質(zhì)量數(shù)是沒有上限的，如本實施方式使用的massarraysnp檢測的質(zhì)譜范圍就可以達(dá)到5000到8500dalton。上述耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)可應(yīng)用在制備用于檢測耳聾的試劑中，如：一種耳聾檢測試劑盒，其含有上述耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)。在其中一個實施方式中，該耳聾檢測試劑盒還包括dna提取試劑、pcr擴(kuò)增試劑、pcr產(chǎn)物純化試劑、單堿基延伸試劑和延伸產(chǎn)物純化試劑中的至少一種。其中，dna提取試劑可以是通用的外周血或骨髓基因組dna提取試劑，如應(yīng)用qiaampdnaminikit和/或tianampblooddnakit從外周血及骨髓血等中提取dna，并結(jié)合thermo公司nanodrop超微量分光光度計，檢測所提取的dna的純度和濃度。pcr擴(kuò)增試劑含有mg2+、dntps、dna聚合酶及擴(kuò)增緩沖液等。pcr產(chǎn)物純化試劑如sap(人血清淀粉樣蛋白p)混合液，包含有sapbuffer和sap酶(蝦堿酶，一種堿性磷酸酶)等。單堿基延伸試劑含有延伸反應(yīng)緩沖液、ddntps以及單堿基延伸酶等。延伸產(chǎn)物純化試劑可以是但不限于使用潔凈樹脂(resin)，以對相應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行脫鹽處理。進(jìn)一步，該耳聾檢測試劑盒還包括陽性對照試劑和陰性對照試劑。其中，陽性對照試劑中含有已知突變情況的dna片段，陰性對照試劑為不含有突變的已知dna片段。利用本發(fā)明的耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)、試劑盒及檢測方法可廣泛用于遺傳性耳聾的基因突變情況的檢測分析過程中，尤其是中國遺傳性非綜合征型耳聾人群，速度快并且節(jié)約時間，有助于及早發(fā)現(xiàn)攜帶耳聾基因突變的患兒(包括遲發(fā)性聽力缺陷患兒)，為后期的診斷及治療提供科學(xué)依據(jù)，有助于及時采取干預(yù)措施預(yù)防言語障礙的發(fā)生，有效地降低聾啞發(fā)病率。上述引物系統(tǒng)可以各組引物分開使用以檢測單一snp位點的突變情況，也可以組合使用以同時檢測多個snp位點的突變情況，并且上述引物系統(tǒng)在組合使用時，各組之間不存在相互干擾，可以一次性同時檢測多個snp位點，檢測通量高、速度快。以下為具體實施例部分一、樣本、試劑和儀器等1.樣本類型本檢測適用樣本為雙鏈dna。dna濃度在10ng/μl左右。2.試劑2.1引物pcr擴(kuò)增引物具有保護(hù)片段和核心片段(用于與基因組dna匹配的片段)，其中核心片段的序列如上表1所示，保護(hù)片段的序列如seqidno:61所示。uep的序列同上表1所示。2.2pcr擴(kuò)增試劑pcraccessoryset試劑盒，生產(chǎn)商：agena，商品型號為：0000023751，儲存條件：-20℃。2.3單堿基延伸試劑iplexproreagentkit，生產(chǎn)商：agena，商品型號為：0000023982，儲存條件：-20℃。2.4無水乙醇生產(chǎn)商：廣東光華化學(xué)廠有限公司，級別：分析純(ar)2.550％乙醇由無水乙醇配制和水按1:1的體積比例配制而成，即配即用。2.60.1mnaoh生產(chǎn)商：life，由10mnaoh和水按1:99的體積比例配制而成。2.7dna提取試劑qiaampdnaminikit或tianampblooddnakit。其他試劑參見具體的檢測流程。3.儀器，見下表2表24.質(zhì)控品空白對照(notemplatecontrol，ntp)：即無模板對照，與樣本dna平行操作，每批次檢測1個；陰性對照(neg)：為實驗室自備標(biāo)本，與樣本dna平行實驗，每批次檢測1個。陽性對照(pos)：為實驗室自備標(biāo)本，與樣本dna平行實驗，每批次檢測1個。表3質(zhì)控結(jié)果判斷表4常見失控的情形及處理方法二、操作步驟1.dna提取使用dna提取試劑提取外周血dna，并計算其濃度，當(dāng)濃度超過10ng/μl，稀釋至10ng/μl。2.pcr擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備從試劑盒中取出dna聚合酶、pcr擴(kuò)增引物組合(primermix，含有17對pcr擴(kuò)增引物對)、ddh2o等，室溫融化后，短暫離心；準(zhǔn)備好合適數(shù)量的pcr反應(yīng)管。反應(yīng)體系配制如下表5。表5試劑體積(μl)h2o0.810×buffer0.5mgcl20.4dntps0.1primermix1.0dna聚合酶0.2總體積3.0震蕩混勻，短暫離心后，分裝3.0μl至標(biāo)記好的pcr反應(yīng)管。3.加樣若樣品及質(zhì)控品保存在-20℃，使用前置室溫解凍，并短暫離心。將樣本dna稀釋至10.0ng/μl后，向分裝好的pcr反應(yīng)管中加入2.0μl稀釋后的樣本dna作為模板。蓋好管蓋后，震蕩混勻，短暫離心，以備pcr擴(kuò)增。4.pcr擴(kuò)增將pcr管置于pcr儀上，pcr反應(yīng)程序設(shè)置如下：95℃、2min->(95℃、30s->56℃、30s->72℃、60s)，共44個循環(huán)->72℃、5min，20℃靜置存放。5.pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的純化sap混合液，配方見下表6。表7試劑體積(μl)h2o1.53sapbuffer0.17sapenzyme0.30總體積2.0將配制好的sap混合液按每管2.0μl的體積加入到上一步pcr擴(kuò)增產(chǎn)物中，蓋好管蓋后，震蕩混勻，短暫離心，將pcr管置于pcr儀上，pcr反應(yīng)程序設(shè)置如下：37℃、40min->85℃、5s，4℃下靜置存放。6.單堿基延伸反應(yīng)a).單堿基延伸混合液配制，見下表7。表7b).將配制好的單堿基延伸混合液按每管2.0μl的體積加入到上一步純化的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物中。蓋好管蓋后，震蕩混勻，短暫離心，將pcr管置于pcr儀上，pcr反應(yīng)程序設(shè)置如下：95℃、30s->(95℃、5s->(52℃、5s->80℃、5s)，共4個循環(huán)->72℃、3min)，共39個循環(huán)，4℃靜置存放。7.脫鹽處理把潔凈樹脂(resin)鋪平在384孔/6mgdimpleplate上，風(fēng)干最少10分鐘。在樣本板的每一個有樣本的孔里加入16μl水，用膜把板封好，渦旋震蕩和離心。加入6mg潔凈樹脂(resin)：輕輕將樣本板凌空反轉(zhuǎn)，放在已放樹脂的dimpleplate上，然后將dimpleplate連樣本板一起反轉(zhuǎn)(過程中兩塊板不可水平移動)，讓樹脂掉到孔里。用膜把板封好，放在旋轉(zhuǎn)器上顛倒搖勻1h。以3200g(標(biāo)準(zhǔn)板離心機(jī)的2000rpm)將板離心5分鐘。8.點樣用點樣儀進(jìn)行體積檢查(volumecheck)以找出合適的點樣速度(dispensingspeed)。注意，點3點標(biāo)準(zhǔn)品(3pt-calibrant)的點樣速度最少要達(dá)到90mm/sec。以板上的真正樣本進(jìn)行體積檢查k，然后用massarraytmnanodispenserrs1000/fusio(rs1000/fusio點樣儀)或自備點樣儀將樣本自動點樣到芯片(spectrochip)上。9.maldi-tofms基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時間質(zhì)譜將芯片放到massarraytyperworkstationma4或compact里打質(zhì)譜，flexcontrol和spectroacquire的參數(shù)要設(shè)定為iplexgold(iplex.par)。注：使用typer4plateeditor編板時樣本檔要以縱向?qū)耄以诰幇迩皩⒃瓟?shù)據(jù)應(yīng)用在樣本上。三、結(jié)果圖1-圖26為測得的26個陰性對照組的各位點的質(zhì)譜圖，圖27-圖31為實驗組測得的部分陽性質(zhì)譜圖，從質(zhì)譜圖可以很清楚的看出有突變的snp位點的突變情況，如對于1555位點(對比圖15和圖29)，說明有a向g的純合突變發(fā)生。以上所述實施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實施例中的各個技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。sequencelisting<110>廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗中心有限公司<120>耳聾相關(guān)基因snp檢測用的引物系統(tǒng)、檢測方法和應(yīng)用<160>61<170>patentinversion3.3<210>1<211>22<212>dna<213>人工序列<400>1tgctggtggagtgtttgttctg22<210>2<211>19<212>dna<213>人工序列<400>2tcttttccagagcaaaccg19<210>3<211>21<212>dna<213>人工序列<400>3caatgctggtggagtgtttga21<210>4<211>20<212>dna<213>人工序列<400>4attcctgtgttgtgtgcatt20<210>5<211>20<212>dna<213>人工序列<400>5ctcttcatttttcgcattat20<210>6<211>21<212>dna<213>人工序列<400>6tggcgtggacacgaagatcag21<210>7<211>22<212>dna<213>人工序列<400>7atgtcatgtacgacggcttcag22<210>8<211>19<212>dna<213>人工序列<400>8aagcagtccacagtgttgg19<210>9<211>21<212>dna<213>人工序列<400>9agccctacaaagaccctcacc21<210>10<211>19<212>dna<213>人工序列<400>10actccgacttctcctccta19<210>11<211>21<212>dna<213>人工序列<400>11ctctggcatggcttcaatatc21<210>12<211>19<212>dna<213>人工序列<400>12caccatgaagtaggtgaag19<210>13<211>21<212>dna<213>人工序列<400>13agtggccatgcacgtggccta21<210>14<211>18<212>dna<213>人工序列<400>14tcccccttgatgaacttc18<210>15<211>19<212>dna<213>人工序列<400>15agtgtaagttgggtgcttt19<210>16<211>17<212>dna<213>人工序列<400>16tgaacagggccctgaag17<210>17<211>21<212>dna<213>人工序列<400>17cgacaacattagaaaggacac21<210>18<211>18<212>dna<213>人工序列<400>18tcttgagatttcacttgg18<210>19<211>21<212>dna<213>人工序列<400>19aggaattcattgcctttgggt21<210>20<211>18<212>dna<213>人工序列<400>20taaggctgttgttcctac18<210>21<211>21<212>dna<213>人工序列<400>21gttgacacccccgatgaaagt21<210>22<211>18<212>dna<213>人工序列<400>22cctttgcccacttttgtc18<210>23<211>21<212>dna<213>人工序列<400>23agagaattcctcaagagggct21<210>24<211>18<212>dna<213>人工序列<400>24atgttttaccagaggctt18<210>25<211>21<212>dna<213>人工序列<400>25tccaggttggctccatatgaa21<210>26<211>21<212>dna<213>人工序列<400>26accaatggagtttttaacatc21<210>27<211>22<212>dna<213>人工序列<400>27cttagtgacgtcatttcgggag22<210>28<211>20<212>dna<213>人工序列<400>28ggagaccagaactctcaatc20<210>29<211>20<212>dna<213>人工序列<400>29acttgtaagttcattacctg20<210>30<211>22<212>dna<213>人工序列<400>30gctagagatacagctagagtcc22<210>31<211>19<212>dna<213>人工序列<400>31cagaaaaccagaaccttac19<210>32<211>21<212>dna<213>人工序列<400>32agtgaacgttcccaaagtgcc21<210>33<211>21<212>dna<213>人工序列<400>33atgaagtctcaaaagaggtta21<210>34<211>21<212>dna<213>人工序列<400>34tttctatggcaatgtcgatgg21<210>35<211>15<212>dna<213>人工序列<400>35ttgttcacacccccc15<210>36<211>15<212>dna<213>人工序列<400>36tttgttcacaccccc15<210>37<211>15<212>dna<213>人工序列<400>37ttgtctgcaacaccc15<210>38<211>15<212>dna<213>人工序列<400>38aagatcagctgcagg15<210>39<211>18<212>dna<213>人工序列<400>39ccacctttgcagccacaa18<210>40<211>18<212>dna<213>人工序列<400>40ggaagtagtgatcgtagc18<210>41<211>16<212>dna<213>人工序列<400>41atggtgaagtgcaacg16<210>42<211>17<212>dna<213>人工序列<400>42cctcacgcaccgtcccc17<210>43<211>17<212>dna<213>人工序列<400>43gggactgctacattgcc17<210>44<211>23<212>dna<213>人工序列<400>44gaagtaggtgaagattttcttct23<210>45<211>17<212>dna<213>人工序列<400>45attggcctaccggagac17<210>46<211>19<212>dna<213>人工序列<400>46cttaccatgttacgacttg19<210>47<211>21<212>dna<213>人工序列<400>47ggcggacacaccgcccgtcac21<210>48<211>19<212>dna<213>人工序列<400>48aaggacacattctttttga19<210>49<211>22<212>dna<213>人工序列<400>49ctctagatagagtatagcatca22<210>50<211>20<212>dna<213>人工序列<400>50tcgaaccactgctctttccc20<210>51<211>20<212>dna<213>人工序列<400>51taagaatcctgagaagatgt20<210>52<211>26<212>dna<213>人工序列<400>52aagatccagtgctctcctggacggcc26<210>53<211>21<212>dna<213>人工序列<400>53gaggcgatgaaagtgtgcagc21<210>54<211>22<212>dna<213>人工序列<400>54ttgttaagagggcagccccctg22<210>55<211>24<212>dna<213>人工序列<400>55tgaatggcagtagcaattatcgtc24<210>56<211>25<212>dna<213>人工序列<400>56aggtacgtcatttcgggagttagta25<210>57<211>26<212>dna<213>人工序列<400>57ttgtaagttcattacctgtataattc26<210>58<211>27<212>dna<213>人工序列<400>58cactaaaaccagaaccttaccacccgc27<210>59<211>27<212>dna<213>人工序列<400>59aaggcgatatagctccacagtcaagca27<210>60<211>28<212>dna<213>人工序列<400>60tagaaaacaaatttctagggataaaata28<210>61<211>10<212>dna<213>人工序列<400>61acgttggatg10當(dāng)前第1頁12