本發(fā)明涉及硒多糖提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種遏藍(lán)菜硒多糖、富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法以及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
遏藍(lán)菜，是一種一年生或多年生的草本植物，屬于十字花科，原產(chǎn)于歐洲中部、西部和南部。圓葉遏藍(lán)菜主要分布在我國(guó)湖北恩施自治州一帶，是該地區(qū)的一種地緣性植物資源，主要分布在恩施雙河橋半徑150公里(宣恩,鶴峰,建始)范圍的"硒"礦床之上，當(dāng)?shù)厝艘卜Q之為野油菜或虎耳菜。圓葉遏藍(lán)菜具有很強(qiáng)的硒元素吸附能力，富硒圓葉遏藍(lán)菜目前已成為當(dāng)?shù)乩习傩詹妥郎险写叭蔽钡貐^(qū)考察客商的一道美味佳肴。經(jīng)研究和檢測(cè)發(fā)現(xiàn)富硒圓葉遏藍(lán)菜含“硒”最高可達(dá)1427mg/kg，葉片含“硒”可達(dá)500mg/kg，由此可見，對(duì)于富硒圓葉遏藍(lán)菜中“硒”的提取具有重要的意義。
硒是人體生命活動(dòng)的必需的微量元素之一，在人類防癌抗癌、延緩衰老、提高機(jī)體免疫力、清除體內(nèi)自由基、預(yù)防和治療心血管疾病和克山病等方面都發(fā)揮著重要作用。硒的存在形式有無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒兩種，無(wú)機(jī)硒吸收效果差且毒性較大，相對(duì)而言有機(jī)硒毒性低、副作用小，能夠更好地發(fā)揮硒的生理活性。有機(jī)硒主要包括硒多糖、硒氨基酸、硒蛋白和硒核酸等，其中硒多糖具有多種生理活性，其不但具有無(wú)機(jī)硒的多種活性，還具有多糖的各種生理功能，并且已有研究證明硒多糖的活性普遍高于硒和多糖，更利于被機(jī)體吸收利用。
目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于硒多糖的研究尚處于起步階段，一般是理論研究，很難進(jìn)行實(shí)際應(yīng)用和工廠化生產(chǎn)。并且，現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取的技術(shù)方案資源更是缺乏，發(fā)明人通過大量的文獻(xiàn)均未發(fā)現(xiàn)有專門針對(duì)富硒遏藍(lán)菜中的硒多糖的提取方法的記載。
有鑒于此，發(fā)明人通過大量的實(shí)踐和研究，提出了本發(fā)明。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，能夠有效提取原料的有效活性成分，提取效率高，并且操作簡(jiǎn)單易行，運(yùn)行成本低。
本發(fā)明的第二目的在于提供一種遏藍(lán)菜硒多糖，以富硒遏藍(lán)菜為原料生產(chǎn)獲得的一種遏藍(lán)菜硒多糖，具有較高的抗氧化活性，能提高人體的免疫力，保健效果好，應(yīng)用價(jià)值高。
本發(fā)明的第三目的在于提供一種遏藍(lán)菜硒多糖在制備增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能和免疫調(diào)節(jié)功能的保健藥品或食品添加劑中的應(yīng)用，既可以作為抗氧化性的功能食品，又可以作為人體補(bǔ)硒食品，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，所述方法包括以下步驟：原料預(yù)處理、浸提、離心、濃縮、除雜、醇沉和干燥；
其中，所述浸提步驟中，浸提溫度為40～65℃，浸提次數(shù)為1～3次，每次浸提的時(shí)間為15～30min，并且采用超聲波輔助和/或酶處理進(jìn)行浸提。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述浸提步驟中，浸提溫度為55～60℃，浸提次數(shù)為2次，每次浸提的時(shí)間為18～22min，第一次在功率為35～45w的超聲波輔助下浸提，第二次在ph值為6.5～7.5條件下用酶浸提；
優(yōu)選地，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至7，然后用復(fù)合酶進(jìn)行浸提；
優(yōu)選地，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，所述復(fù)合酶包括纖維素酶0.8～1.5份、果膠酶1～2份和木瓜蛋白酶2～3份；
優(yōu)選地，所述浸提步驟中，將預(yù)處理后的遏藍(lán)菜和水按照1：15～25的料水比加入至提取裝置中進(jìn)行浸提。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述原料預(yù)處理包括清洗、干燥和粉碎；
優(yōu)選地，所述清洗步驟包括兩道鼓泡清洗，一道將遏藍(lán)菜用自來(lái)水或軟化水清洗，二道用純凈水清洗；
優(yōu)選地，所述干燥步驟中，將清洗后的遏藍(lán)菜干燥至其水分含量為0％～5％時(shí)，取出；
優(yōu)選地，所述粉碎步驟中，粉碎的粒度為70～90目。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述離心步驟中，在3000～5000r/min的條件下離心10～20min，收集上清液。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述濃縮步驟中，采用減壓濃縮，將所述上清液濃縮至原體積的1/3～1/5，得到濃縮液。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述除雜步驟中，包括采用sevage法進(jìn)行脫蛋白，以及采用電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除；
優(yōu)選地，脫蛋白處理的操作參數(shù)為，sevage試劑添加量為濃縮得到的濃縮液體積的1/3～1/4，氯仿與正丁醇的體積比為3～5：1，振搖時(shí)間為20～40min，脫蛋白的次數(shù)為1～3次，之后進(jìn)行離心8～15min，得到上清料液；
優(yōu)選地，將所述上清料液通過電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除，得到清液，電透析的操作參數(shù)為：電流密度為5～15ma/cm2，循環(huán)流量為10～20l/h，溫度為15～35℃，時(shí)間為150～300min。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述醇沉步驟中，在除雜后得到的所述清液中加入3～5倍體積量的濃度為85％～98％的乙醇進(jìn)行醇沉，靜置12～24小時(shí)，得到硒多糖沉淀物，將所述硒多糖沉淀物用80％～90％濃度的乙醇進(jìn)行洗滌2～4次，得到粗品硒多糖。
作為進(jìn)一步優(yōu)選技術(shù)方案，所述干燥步驟中，將醇沉得到的所述粗品硒多糖進(jìn)行真空冷凍干燥，即得到遏藍(lán)菜硒多糖；
優(yōu)選地，干燥的溫度為-30～-20℃，真空度為20～90pa，時(shí)間為2～4小時(shí)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種遏藍(lán)菜硒多糖，所述遏藍(lán)菜硒多糖由上述的富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法制得。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種上述的遏藍(lán)菜硒多糖在制備增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能和免疫調(diào)節(jié)功能的保健藥品或食品添加劑中的應(yīng)用。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：
1、本發(fā)明提供的富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，經(jīng)科學(xué)的原料預(yù)處理、浸提、離心、濃縮、除雜、醇沉和干燥的操作方式，能夠有效提取原料的有效活性成分，產(chǎn)品的有效活性成分流失少，操作簡(jiǎn)單易行，效果好、效率高，成本低廉，具有顯著的綜合經(jīng)濟(jì)效益，有利于實(shí)現(xiàn)工廠化的規(guī)模生產(chǎn)。
尤為突出的是，本發(fā)明在浸提步驟中，采用超聲波輔助和/或酶處理進(jìn)行浸提，一方面極大的提高了提取效率，縮短了提取時(shí)間，另一方面降低了提取溫度，避免了高溫對(duì)于有效成分的破壞，對(duì)于原料中遇熱不穩(wěn)定等有效成分起到了保護(hù)作用，還節(jié)省了能耗；同時(shí)還有助于提高硒多糖的純度，保證保健品的質(zhì)量。
2、通過本發(fā)明提供的富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法制得的遏藍(lán)菜硒多糖，可應(yīng)用在制備具有增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能和免疫調(diào)節(jié)功能的保健藥品或食品添加劑中，不僅保健療效明顯，有助于提高人體免疫力、防癌、抗腫瘤等，而且產(chǎn)品穩(wěn)定性好，便于攜帶和服用。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合實(shí)施方式和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施方式和實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
第一方面，本實(shí)施方式提供一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，所述方法包括以下步驟：原料預(yù)處理、浸提、離心、濃縮、除雜、醇沉和干燥；
其中，所述浸提步驟中，浸提溫度為40～65℃，浸提次數(shù)為1～3次，每次浸提的時(shí)間為15～30min，并且采用超聲波輔助和/或酶處理進(jìn)行浸提。
有鑒于富硒圓葉遏藍(lán)菜中“硒”元素含量較高，具有較高的應(yīng)用價(jià)值，而現(xiàn)有技術(shù)中還未有針對(duì)富硒圓葉遏藍(lán)菜中“硒”的提取方案，本實(shí)施方式提供了一種行之有效的富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，達(dá)到了方法操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)適用，成本低，提取效率高的效果，能夠充分發(fā)揮遏藍(lán)菜中硒多糖的獨(dú)特保健價(jià)值，填補(bǔ)了富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取的空白。
本實(shí)施方式經(jīng)過科學(xué)的原料預(yù)處理、浸提、離心、濃縮、除雜、醇沉和干燥的操作方式，提取得到遏藍(lán)菜硒多糖。其中，在浸提步驟中，采用超聲波輔助和/或酶處理進(jìn)行浸提，一方面極大的提高了提取效率，超聲波獨(dú)有的物理特性能夠促使植物細(xì)胞組織破壁或變形，能夠使得原料中的有效成分提取的更充分，與傳統(tǒng)的浸提方式相比可提高提取率50％-500％；并且縮短了提取時(shí)間，與傳統(tǒng)的浸提方式相比可縮短提取時(shí)間2/3以上；同時(shí)提取液中雜質(zhì)少，有助于提高硒多糖的純度，確保保健品的質(zhì)量。另一方面，降低了提取溫度，避免了高溫對(duì)于有效成分的破壞，對(duì)于原料中遇熱不穩(wěn)定、易水解或氧化等有效成分起到了保護(hù)作用，還節(jié)省了能耗，降低了運(yùn)行成本。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，浸提溫度為40℃、42℃、45℃、48℃、50℃、52℃、55℃、58℃、60℃、62℃或65℃；浸提次數(shù)為1次、2次或3次；每次浸提的時(shí)間為15min、16min、17min、18min、19min、20min、21min、22min、23min、24min、25min、26min、28min、29min或30min。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述浸提步驟中，浸提溫度為55～60℃，浸提次數(shù)為2次，每次浸提的時(shí)間為18～22min，第一次在功率為35～45w的超聲波輔助下浸提，第二次在ph值為6.5～7.5條件下用酶浸提；
優(yōu)選地，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至7，然后用復(fù)合酶進(jìn)行浸提；
優(yōu)選地，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，所述復(fù)合酶包括纖維素酶0.8～1.5份、果膠酶1～2份和木瓜蛋白酶2～3份；
優(yōu)選地，所述浸提步驟中，將預(yù)處理后的遏藍(lán)菜和水按照1：15～25的料水比加入至提取裝置中進(jìn)行浸提。
本實(shí)施方式中，優(yōu)選為2次浸提，第一次用超聲波輔助，第二次用酶處理，但并不限于此，還可以進(jìn)行1次浸提，浸提過程中用超聲波輔助或者酶處理；或者進(jìn)行3次浸提，第一次用超聲波輔助，第二次用酶處理，第三次不做任何處理。每次浸提的溫度和時(shí)間均可相同。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，第一次在功率為35w、36w、37w、37.5w、38w、38.5w、39w、40w、41w、42w、43w、44w或45w的超聲波輔助下浸提。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4或7.5，然后用復(fù)合酶處理進(jìn)行浸提。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，所述復(fù)合酶包括纖維素酶1份、果膠酶1.5份和木瓜蛋白酶2.5份；或者包括纖維素酶0.8份、果膠酶1份和木瓜蛋白酶2份；或者包括纖維素酶1.5份、果膠酶2份和木瓜蛋白酶3份；
本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)選擇纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶的來(lái)源，本發(fā)明不做具體限定。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，遏藍(lán)菜和水的比例即料水比(g/ml)可以為1：15、1：16、1：17、1：18、1：19、1：20、1：21、1：22、1：23、1：24或1：25。
這樣，通過上述熱水浸提，并在超聲波和酶輔助的操作方式下，能夠更加有效的提取遏藍(lán)菜中的硒多糖，提取效果好、效率高。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述原料預(yù)處理包括清洗、干燥和粉碎；
優(yōu)選地，所述清洗步驟包括兩道鼓泡清洗，一道將遏藍(lán)菜用自來(lái)水或軟化水清洗，二道用純凈水清洗；
優(yōu)選地，所述干燥步驟中，將清洗后的遏藍(lán)菜干燥至其水分含量為0％～5％時(shí)，取出；
優(yōu)選地，所述粉碎步驟中，粉碎的粒度為70～90目。
本實(shí)施方式中的原料處理方式可以為，先挑選新鮮圓葉遏藍(lán)菜，兩道鼓泡清洗，一道將遏藍(lán)菜用自來(lái)水或軟化水進(jìn)行清洗，二道用純凈水進(jìn)行清洗；然后采用烘干機(jī)將清洗后的遏藍(lán)菜干燥至其水分含量在5％以下，取出；再用粉碎機(jī)將干燥后的遏藍(lán)菜粉碎成70～90目的粗粉。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，干燥后的遏藍(lán)菜的水分含量為0％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，粉碎的粒度為70目、75目、80目、85目或90目。
這樣，通過上述對(duì)于遏藍(lán)菜原料的預(yù)處理方式，更有助于其提取，有助于提高提取效率，以及有效成分的提取率。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述離心步驟中，在3000～5000r/min的條件下離心10～20min，收集上清液。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述濃縮步驟中，采用減壓濃縮，將所述上清液濃縮至原體積的1/3～1/5，得到濃縮液。
本實(shí)施方式將浸提步驟得到的提取液先在常溫下進(jìn)行離心，并收集上清液，再將收集到的濃縮液進(jìn)行減壓濃縮。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，在3000r/min、3500r/min、4000r/min、4500r/min或5000r/min的條件下離心10min、12min、14min、15min、16min、18min或20min。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，將上清液濃縮至原體積的1/3、1/4或1/5。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述除雜步驟中，包括采用sevage法進(jìn)行脫蛋白，以及采用電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除；
優(yōu)選地，脫蛋白處理的操作參數(shù)為，sevage試劑添加量為濃縮得到的濃縮液體積的1/3～1/4，氯仿與正丁醇的體積比為3～5：1，振搖時(shí)間為20～40min，脫蛋白的次數(shù)為1～3次，之后進(jìn)行離心8～15min，得到上清料液；
優(yōu)選地，將所述上清料液通過電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除，得到清液，電透析的操作參數(shù)為：電流密度為5～15ma/cm2，循環(huán)流量為10～20l/h，溫度為15～35℃，時(shí)間為150～300min。
本實(shí)施方式中的除雜包括脫蛋白和小分子雜質(zhì)的去除，其中脫蛋白是多糖分離純化中較為重要的緩解，多糖脫蛋白的方法涉及化學(xué)法、物理法以及生物法，較為常用的有sevage法、離子交換法和酶法等。其中，sevage法除蛋白具有操作簡(jiǎn)單、條件溫和、對(duì)糖鏈破壞小，且所用試劑常規(guī)、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn)。由于多糖的來(lái)源不同，sevage法脫蛋白的工藝參數(shù)也會(huì)略有差別。本實(shí)施方式采用現(xiàn)有的sevage法脫蛋白的操作方式進(jìn)行操作，具體的操作參數(shù)如下：
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，sevage試劑添加量為濃縮得到的濃縮液體積的1/3或1/4，氯仿與正丁醇的體積比為3：1、4：1或5：1，振搖時(shí)間為20min、25min、30min、35min或40min，脫蛋白的次數(shù)為1次、2次或3次，脫蛋白之后進(jìn)行離心8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min或15min，即可得到上清料液。
進(jìn)一步地，本實(shí)施方式將得到的上清料液進(jìn)行電透析，以去除小分子雜質(zhì)，進(jìn)一步純化硒多糖。通過電透析的方式，除雜效果好，操作簡(jiǎn)便，效率高，能夠進(jìn)一步提高硒多糖的純度，確保產(chǎn)品的質(zhì)量。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，電透析的操作參數(shù)為：電流密度為5ma/cm2、6ma/cm2、7ma/cm2、8ma/cm2、9ma/cm2、10ma/cm2、11ma/cm2、12ma/cm2、13ma/cm2、14ma/cm2或15ma/cm2；循環(huán)流量為10l/h、11l/h、12l/h、13l/h、14l/h、15l/h、16l/h、17l/h、18l/h、19l/h或20l/h；溫度為15℃、16℃、18℃、20℃、22℃、25℃、26℃、28℃、30℃、32℃或35℃；時(shí)間為150min、160min、180min、200min、220min、240min、250min、260min、280min或300min。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述醇沉步驟中，在除雜后得到的所述清液中加入3～5倍體積量的濃度為85％～98％的乙醇進(jìn)行醇沉，靜置12～24小時(shí)，得到硒多糖沉淀物，將所述硒多糖沉淀物用80％～90％濃度的乙醇進(jìn)行洗滌2～4次，得到粗品硒多糖。
本實(shí)施方式將經(jīng)過電透析處理后得到的清液進(jìn)行醇沉，以析出硒多糖，得到沉淀物。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，乙醇的體積濃度為85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97或98％；加入的乙醇的量為清液的3倍、4倍或5倍體積量；靜置的時(shí)間為12小時(shí)、13小時(shí)、14小時(shí)、15小時(shí)、16小時(shí)、17小時(shí)、18小時(shí)、19小時(shí)、20小時(shí)、21小時(shí)、22小時(shí)、23小時(shí)或24小時(shí)；然后將硒多糖沉淀物用80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％或90％濃度的乙醇進(jìn)行洗滌2次、3次或4次。
作為一種可選的實(shí)施方式，所述干燥步驟中，將醇沉得到的所述粗品硒多糖進(jìn)行真空冷凍干燥，即得到遏藍(lán)菜硒多糖；
優(yōu)選地，干燥的溫度為-30～-20℃，真空度為20～90pa，時(shí)間為2～4小時(shí)。
在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可選的，干燥的溫度為-30℃、-29℃、-28℃、-27℃、-26℃、-25℃、-24℃、-23℃、-22℃、-21℃或-20℃；真空度為20pa、30pa、40pa、50pa、60pa、70pa、80pa或90pa；時(shí)間為2小時(shí)、2.5小時(shí)、3小時(shí)、3.5小時(shí)或4小時(shí)。
這樣，通過上述清洗、干燥、粉碎、醇提、離心、濃縮、脫蛋白、電透析、醇沉和冷凍干燥各操作步驟的配合使用，以及各操作步驟中參數(shù)的設(shè)置，精制而成遏藍(lán)菜硒多糖，具有提取效率高，產(chǎn)品純度高，易于操作，運(yùn)行成本低，產(chǎn)品純度好等優(yōu)點(diǎn)，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
第二方面，本實(shí)施方式一種遏藍(lán)菜硒多糖，所述遏藍(lán)菜硒多糖由上述的富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法制得。
第三方面，本實(shí)施方式提供一種上述的遏藍(lán)菜硒多糖在制備增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能和免疫調(diào)節(jié)功能的保健藥品或食品添加劑中的應(yīng)用。
本實(shí)施方式提取制得的遏藍(lán)菜硒多糖既可以作為抗氧劑功能食品，又可以作為人體補(bǔ)硒食品，將其應(yīng)用在保健藥品或食品添加劑中，保健效果明顯，有助于提高人體免疫力、防癌、抗腫瘤等，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
下面結(jié)合具體實(shí)施例和對(duì)比例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)施例1
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，包括以下步驟：
原料預(yù)處理、浸提、離心、濃縮、除雜、醇沉和干燥；
其中，浸提步驟中，料水比(g/ml)為1：20，浸提溫度為55℃，浸提次數(shù)為2次，每次浸提的時(shí)間為20min，第一次在功率為37.5w的超聲波輔助下浸提，第二次在ph值為7的條件下用酶處理進(jìn)行浸提。
實(shí)施例2
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，包括以下步驟：
清洗、干燥、粉碎、浸提、離心、濃縮、脫蛋白、電透析、醇沉和干燥；
其中，浸提步驟中，料水比(g/ml)為1：22，浸提溫度為60℃，浸提次數(shù)為1次，浸提的時(shí)間為25min，在功率為40w的超聲波輔助下進(jìn)行浸提。
實(shí)施例3
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，包括以下步驟：
(1)清洗：挑選新鮮圓葉遏藍(lán)菜，通過兩道鼓泡清洗，一道將遏藍(lán)菜用自來(lái)水或軟化水進(jìn)行清洗，二道用純凈水進(jìn)行清洗；
(2)干燥：采用烘干機(jī)將清洗后的遏藍(lán)菜干燥至其水分含量為3％時(shí)，取出；
(3)粉碎：用粉碎機(jī)將干燥后的遏藍(lán)菜粉碎成80目的粗粉；
(4)浸提：將得到的粗粉和水按照1：20的料水比加入至提取裝置中進(jìn)行浸提，浸提溫度為56℃，浸提次數(shù)為2次，每次浸提的時(shí)間為20min，第一次在功率為38w的超聲波輔助下浸提，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至7，然后復(fù)合酶進(jìn)行浸提；其中，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，復(fù)合酶包括纖維素酶1份、果膠酶1.5份和木瓜蛋白酶2.5份；
(5)離心：在4000r/min的常溫條件下離心15min，收集上清液；
(6)濃縮：采用減壓濃縮，將收集到的上清液濃縮至原體積的1/5，得到濃縮液；
(7)脫蛋白：采用sevage法進(jìn)行脫蛋白，其中sevage試劑添加量為濃縮得到的濃縮液體積的1/4，氯仿與正丁醇的體積比為4：1，振搖時(shí)間為30min，脫蛋白的次數(shù)為1次，之后進(jìn)行離心10min，得到上清料液；
(8)電透析：采用電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除，電流密度為10ma/cm2，循環(huán)流量為15l/h，溫度為25℃，時(shí)間為180min，得到清液；
(9)醇沉：在得到的清液中加入4倍體積量的濃度為95％的乙醇進(jìn)行醇沉，靜置18小時(shí)，得到硒多糖沉淀物，將硒多糖沉淀物用85％濃度的乙醇進(jìn)行洗滌3次，得到粗品硒多糖；
(10)干燥：采用真空冷凍干燥的方式對(duì)粗品硒多糖進(jìn)行干燥，干燥的溫度為-30℃，真空度為40pa，時(shí)間為2小時(shí)，即得到遏藍(lán)菜硒多糖。
實(shí)施例4
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，包括以下步驟：
(1)清洗：挑選新鮮圓葉遏藍(lán)菜，通過兩道鼓泡清洗，一道將遏藍(lán)菜用自來(lái)水或軟化水進(jìn)行清洗，二道用純凈水進(jìn)行清洗；
(2)干燥：采用烘干機(jī)將清洗后的遏藍(lán)菜干燥至其水分含量為4％時(shí)，取出；
(3)粉碎：用粉碎機(jī)將干燥后的遏藍(lán)菜粉碎成70目的粗粉；
(4)浸提：將得到的粗粉和水按照1：25的料水比加入至提取裝置中進(jìn)行浸提，浸提溫度為45℃，浸提次數(shù)為2次，每次浸提的時(shí)間為30min，第一次在功率為35w的超聲波輔助下浸提，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至7.5，然后復(fù)合酶進(jìn)行浸提；其中，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，復(fù)合酶包括纖維素酶1.5份、果膠酶2份和木瓜蛋白酶3份；
(5)離心：在5000r/min的常溫條件下離心10min，收集上清液；
(6)濃縮：采用減壓濃縮，將收集到的上清液濃縮至原體積的1/3，得到濃縮液；
(7)脫蛋白：采用sevage法進(jìn)行脫蛋白，其中sevage試劑添加量為濃縮得到的濃縮液體積的1/3，氯仿與正丁醇的體積比為5：1，振搖時(shí)間為20min，脫蛋白的次數(shù)為2次，之后進(jìn)行離心15min，得到上清料液；
(8)電透析：采用電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除，電流密度為5ma/cm2，循環(huán)流量為10l/h，溫度為35℃，時(shí)間為300min，得到清液；
(9)醇沉：在得到的清液中加入5倍體積量的濃度為88％的乙醇進(jìn)行醇沉，靜置24小時(shí)，得到硒多糖沉淀物，將硒多糖沉淀物用80％濃度的乙醇進(jìn)行洗滌2次，得到粗品硒多糖；
(10)干燥：采用真空冷凍干燥的方式對(duì)粗品硒多糖進(jìn)行干燥，干燥的溫度為-20℃，真空度為80pa，時(shí)間為3小時(shí)，即得到遏藍(lán)菜硒多糖。
實(shí)施例5
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是步驟(4)，其余均與實(shí)施例3相同。
(4)浸提：將得到的粗粉和水按照1：15的料水比加入至提取裝置中進(jìn)行浸提，浸提溫度為60℃，浸提次數(shù)為2次，每次浸提的時(shí)間為25min，第一次在功率為36w的超聲波輔助下浸提，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至6.5，然后復(fù)合酶進(jìn)行浸提；其中，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，復(fù)合酶包括纖維素酶0.8份、果膠酶1份和木瓜蛋白酶2份。
實(shí)施例6
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是步驟(4)，其余均與實(shí)施例3相同。
(4)浸提：將得到的粗粉和水按照1：20的料水比加入至提取裝置中進(jìn)行浸提，浸提溫度為55℃，浸提次數(shù)為3次，每次浸提的時(shí)間為18min，第一次在功率為40w的超聲波輔助下浸提，第二次先用碳酸鈉將料液ph值調(diào)至7，然后復(fù)合酶進(jìn)行浸提；其中，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，復(fù)合酶包括纖維素酶1份、果膠酶1.5份和木瓜蛋白酶2.5份；第三次在不做任何輔助處理的條件下進(jìn)行浸提。
實(shí)施例7
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是步驟(7)和(8)，其余均與實(shí)施例3相同。
(7)脫蛋白：采用sevage法進(jìn)行脫蛋白，其中sevage試劑添加量為濃縮得到的濃縮液體積的1/4，氯仿與正丁醇的體積比為3：1，振搖時(shí)間為40min，脫蛋白的次數(shù)為3次，之后進(jìn)行離心8min，得到上清料液；
(8)電透析：采用電透析法進(jìn)行小分子雜質(zhì)的去除，電流密度為15ma/cm2，循環(huán)流量為20l/h，溫度為15℃，時(shí)間為150min，得到清液。
實(shí)施例8
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是步驟(9)和(10)，其余均與實(shí)施例3相同。
(9)醇沉：在得到的清液中加入3倍體積量的濃度為98％的乙醇進(jìn)行醇沉，靜置12小時(shí)，得到硒多糖沉淀物，將硒多糖沉淀物用90％濃度的乙醇進(jìn)行洗滌3次，得到粗品硒多糖；
(10)干燥：采用真空冷凍干燥的方式對(duì)粗品硒多糖進(jìn)行干燥，干燥的溫度為-25℃，真空度為60pa，時(shí)間為4小時(shí)，即得到遏藍(lán)菜硒多糖。
對(duì)比例1
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是步驟(4)，其余均與實(shí)施例3相同。
采用普通的浸提的方式，即不采用超聲波輔助或酶處理的方式進(jìn)行浸提。
對(duì)比例2
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是步驟(4)，其余均與實(shí)施例3相同。
其中，酶采用普通的生物酶，可以為纖維素酶、果膠酶或木瓜蛋白酶中任意一種。
對(duì)比例3
一種富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，與實(shí)施例3不同的是不包括步驟(8)電透析，其余均與實(shí)施例3相同。
采用原子吸收光譜法對(duì)獲得的遏藍(lán)菜硒多糖進(jìn)行硒元素的測(cè)定，測(cè)定結(jié)果為，實(shí)施例3-8中遏藍(lán)菜硒多糖中硒元素的含量分別為7.8ug/g、6.8ug/g、6.7ug/g、8.1ug/g、7.5ug/g和7.2ug/g，而對(duì)比例1-3中遏藍(lán)菜硒多糖中硒元素的含量分別為3.8ug/g、4.2ug/g和3.5ug/g。并計(jì)算得到實(shí)施例3-8中遏藍(lán)菜硒多糖的提取率(即得率)分別為3.6％、2.8％、2.5％、3.8％、3.4％和3.1％，而對(duì)比例1-3中遏藍(lán)菜硒多糖的提取率分別為1.0％、1.2％和0.7％。
由此可以看出，本發(fā)明提供的富硒遏藍(lán)菜中硒多糖的提取方法，能夠有效提取富硒遏藍(lán)菜中的有效成分，不僅提取效率高，而且還提高了提取率和產(chǎn)品的純度，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益，值得推廣應(yīng)用。
最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。