本實用新型涉及一種微生物培養(yǎng)裝置，尤其是涉及一種針對海綿未培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)裝置，屬于微生物培養(yǎng)領域。

背景技術：

近幾十年來，隨著對微生物的不斷研究，科學家發(fā)現(xiàn)了“大平板技術異?！爆F(xiàn)象，即通過顯微鏡觀察到的細胞數目遠遠大于用各種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的細胞數目，這些可培養(yǎng)的微生物僅占微生物總數的1％，隨著對1％可培養(yǎng)微生物的重復培養(yǎng)和篩選，從中分離得到具有優(yōu)良生物活性的化合物越來越困難。未培養(yǎng)微生物(uncultured microorganisms)是指迄今為止在實驗室中還無法純培養(yǎng)的微生物。為了解決微生物培養(yǎng)問題，科學家研究建立了適合未培養(yǎng)微生物的原位培養(yǎng)方法。原位培養(yǎng)解決了傳統(tǒng)培養(yǎng)中培養(yǎng)基成分單一且營養(yǎng)濃度過高和微生物之間缺乏交流等問題，將通過常規(guī)培養(yǎng)方法無法培養(yǎng)的微生物進行純培養(yǎng)。

海綿是海洋天然產物研究最多的一種動物，是由最原始的多細胞多孔動物門，它們固定地附著在海底生活，利用內側壁上的鞭毛運動，產生水流，水流由其表面的水孔進入完成攝食與排泄。海綿利用布滿全身的腔狀管道結構過濾海水中的微生物，其中共生微生物占海綿濕重35%以上，目前在傳統(tǒng)方法下只能培養(yǎng)出1%的海綿共附生微生物，而99%的共附生微生物卻因為生長因子匱乏，微生物種類之間交流少等因素，無法在傳統(tǒng)方法下進行純培養(yǎng)。

技術實現(xiàn)要素：

本實用新型所要解決的技術問題是提供一種有利于微生物之間進行信息交流，將難培養(yǎng)微生物轉化為可培養(yǎng)微生物的針對海綿未培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)裝置。

本實用新型解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種針對海綿未培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)裝置，包括呈倒圓錐形的培養(yǎng)吸管，所述的培養(yǎng)吸管的上端開口處設置有孔徑為0.03mm的封口膜，所述的培養(yǎng)吸管內從上到下依次填充有瓊脂培養(yǎng)基層和酸洗玻璃微珠層，所述的培養(yǎng)吸管的底部設置有直徑大小為0.5mm的孔，所述的培養(yǎng)吸管的下部外壁設置有倒刺。

所述的封口膜為聚碳酸酯膜?？梢宰柚勾蠓肿游镔|進入，但能夠讓氧氣進入，使培養(yǎng)裝置內外壓強相等，海綿組織中共附生微生物能夠進入到培養(yǎng)裝置內部。

所述的培養(yǎng)吸管的體積大小為200μL，開口口徑為8mm；所述的瓊脂培養(yǎng)基層的體積為培養(yǎng)吸管體積的1/3，所述的瓊脂培養(yǎng)基層的培養(yǎng)基配方為可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，KNO₃ 1g，K₂HPO₄·3H₂O 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01g，瓊脂 20g和水1000mL，pH 7.4-7.6。

所述的酸洗玻璃微珠層包括直徑為60-100μm和直徑為150-212μm兩種不同規(guī)格的酸洗玻璃微珠。

所述的倒刺的長度為10mm。倒刺防止裝置從海綿組織掉落，起固著作用。

與現(xiàn)有技術相比，本實用新型的優(yōu)點在于：本實用新型首次公開了一種海綿未培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)裝置，并對外部條件進行優(yōu)化。其優(yōu)點如下：

（1）通過在裝置主體吸管廣開口處包裹聚碳酸酯封口膜，既能阻礙培養(yǎng)裝置中的微生物細胞流出，外部環(huán)境中的大分子物質進入，又能使O₂進入，使培養(yǎng)裝置內外壓強相等，環(huán)境微生物進入裝置內部。

（2）培養(yǎng)裝置底部設有的小孔可以讓海綿組織中的微生物及微生物生長所需的信號分子擴散到培養(yǎng)基中，滿足微生物對生長因子的需求，從而使部分難培養(yǎng)的微生物獲得純培養(yǎng)。

（3）針對海水環(huán)境中，水流對培養(yǎng)裝置的作用，裝置外部壁有倒刺，倒刺可以加強培養(yǎng)裝置在海綿組織中的固著，防止培養(yǎng)裝置從海綿組織中掉落。

（4）裝置構造簡單，使用操作方便。

綜上所述，本實用新型一種海綿共附生微生物培養(yǎng)及分離裝置，利用裝置底部與海綿組織直接接觸的孔以及倒刺作用，能夠讓海綿組織中的共附生微生物擴散到瓊脂培養(yǎng)基中，同時微生物生長所需要的生長因子也可擴散進入，滿足微生物間的信息交流，將難培養(yǎng)微生物轉化為可培養(yǎng)微生物，最終實現(xiàn)海綿體內共附生未培養(yǎng)微生物的分離培養(yǎng)。

附圖說明

圖1為本實用新型的培養(yǎng)裝置結構示意圖。

具體實施方式

以下結合附圖實施例對本實用新型作進一步詳細描述。

具體實施例

一種針對海綿未培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)裝置，如圖1所示，包括呈倒圓錐形的培養(yǎng)吸管1，培養(yǎng)吸管1的上端開口處設置有孔徑為0.03mm的封口膜2，培養(yǎng)吸管1內從上到下依次填充有瓊脂培養(yǎng)基層3和酸洗玻璃微珠層4，培養(yǎng)吸管1的底部設置有直徑大小為0.5mm的孔5，培養(yǎng)吸管1的下部外壁設置有倒刺6。

在此具體實施例中，封口膜2為聚碳酸酯膜。培養(yǎng)吸管1的體積大小為200μL，開口口徑為為8mm，瓊脂培養(yǎng)基層3的體積為培養(yǎng)吸管體積的1/3，瓊脂培養(yǎng)基層3的培養(yǎng)基配方為可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，KNO₃ 1g，K₂HPO₄·3H₂O 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.01g，瓊脂 20g和水1000mL，pH 7.4-7.6。酸洗玻璃微珠層4包括直徑為60-100μm和直徑為150-212μm兩種不同規(guī)格的酸洗玻璃微珠。倒刺6的長度為10mm。

使用時，將培養(yǎng)裝置先進行滅菌處理，然后將兩種不同規(guī)格的酸洗玻璃微珠填充到培養(yǎng)裝置內，不同規(guī)格酸洗玻璃微珠可以對不同種類的微生物進行選擇。接下來在酸洗玻璃微珠層4上部填充70μL 0.7%（w/v)的瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為微生物的生長提供必要的營養(yǎng)。0.03mm的聚碳酸酯封口膜2，阻礙外部大分子物質進入，但能夠讓氧氣進入，使培養(yǎng)裝置內外壓強相等。最后將裝置以0.5cm的深度插入海綿的不同組織，海綿體內的微生物擴散到瓊脂培養(yǎng)基層3中，同時海綿組織中的信號分子也擴散到瓊脂培養(yǎng)基層3中，滿足微生物生長所需要的生長因子，微生物之間能夠進行信息交流，進而對未培養(yǎng)微生物進行純培養(yǎng)，培養(yǎng)完成后，用無菌刀片切除掉培養(yǎng)基的兩側，用無菌接種環(huán)將瓊脂培養(yǎng)基輕輕刮下，PBS緩沖液稀釋后涂布平板，所得的微生物繼續(xù)培養(yǎng)后進行菌種鑒定。

該培養(yǎng)裝置構造簡單，操作方便。針對傳統(tǒng)培養(yǎng)方法微生物缺乏生長因子以及信息交流困難的問題，該培養(yǎng)裝置能夠讓環(huán)境中的信號分子擴散到培養(yǎng)基中，滿足微生物生長條件，解決了海綿共附生未培養(yǎng)微生物難培養(yǎng)的問題。

上述實施例是對本實用新型的進一步說明，但本實用新型的保護范圍以權利要求書為準。