背景技術(shù):
1、重組腺相關(guān)病毒(raav)為基因療法的體內(nèi)遞送提供了領(lǐng)先的平臺(tái)。目前的臨床試驗(yàn)采用有限數(shù)量的aav衣殼,主要來(lái)自天然存在的人或靈長(zhǎng)類動(dòng)物血清型,諸如aav1、aav2、aav5、aav6、aav8、aav9、aavrh.10、aav4rh.74和aavhu.67。由于所關(guān)注組織的低感染性以及競(jìng)爭(zhēng)性肝向性,這些衣殼通常提供對(duì)所關(guān)注組織的次優(yōu)靶向。增加劑量以確保所需組織的感染可導(dǎo)致劑量依賴性肝臟毒性。此外,使用天然存在的衣殼會(huì)帶來(lái)免疫記憶方面的挑戰(zhàn)–免疫前患者群體被排除在治療之外,并且在先前免疫的未治療患者中重復(fù)給藥通常是不可能的。因此,需要用于基因療法的額外的aav衣殼,特別是賦予raav對(duì)特定組織諸如眼組織的高感染性的衣殼。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本文描述了一種用于高通量工程化對(duì)各種組織具有改變的向性的功能性aav衣殼的系統(tǒng),并且使用該系統(tǒng),已經(jīng)鑒定了對(duì)靶組織諸如眼組織具有增加的向性的衣殼變體。
2、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含seq?id?no:5014的序列并且還包含相對(duì)于seq?id?no:9的至少一個(gè)取代;并且其中所述581至589區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)堿性氨基酸殘基。
3、在一些方面,所述581至589區(qū)包含比酸性氨基酸殘基更多的堿性氨基酸殘基。在一些方面,所述酸性氨基酸殘基選自由d和e組成的組。在一些方面,所述堿性氨基酸殘基選自由k、r和h組成的組。
4、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述vp衣殼多肽的581-589區(qū)包含seq?id?no:5014的序列,其中seq?id?no:5014的x1、x2、x3、x4、x5或x6或它們的任何組合是k或r。
5、在一些方面,seq?id?no:5014的x1是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:1726、374、1442、933、1748、4142、1434、1358、1191、3732、4110、4039、4411、4506、4270、4156、3780、4036、4030、4016、1550、3899、1247、1855、1181、3919、1639、3664、1244、4140、3930、4117、4189、4001、3799、3643、3619、1240、1686、1479、1307、1575、4296、1665、3871、4135、1605、4408、3604、1274、4149、1313、3741、1938、3709、1727、3893、1280、3622、1784、3834、1752、1983、1743、3979、4461、4113、3817、4232、1340、1489、4214、3902、1857、2510、2316、1904、1219、1486、1512、1481、1516、3820、3789、4252、4047、4330、4082、4094、1574、1248、4078、1872、1426、3785、3687、4318、4243、3866、3704、4172、1621、4315、1192、1513、1856、2476、3324、2769、2678、1561、3296、375、2343、2348、376、377、1395、1584、4093、4453、3940、3778、4374、4210、4009、4264、4339、4368、1738、378、1610、4194、4474、4013、4266、1771、1759、1922、3860、3832、1349、1381、3663、1642、1185、4356、3932、1233、4212、3858、1198、4192、3611、1919、1819、3790、3712、1969、4095、1887、4468、1720、4247、934、1790、2002、1657、1663、1336、3894、1554、1494、1405、3576、4314、3695、1851、1850、4362、1815、3845、4511、3656、3638、1406、1596、4454、1443、1661、935、4504、1359、1734、3650、1910、1305、1648、3831、4435、1208、1988、4451、1993、1986、3849、1718、4068、1835、1425、1428、1282、4380、1658、1452、1687、4024、379、4072、3791、4491、4323、4014、1304、1440、1511、1981、1676、1547、4422、1283、3861、1383、3644、3691、4259、1749、1418、1176、4216、1924、1421、1387、3992、4423、4253、1618、1871、1256、3748、4119、1297、1586、1251、1299、1954、4450、3990、4029、4097、3890、3796、1389、3711、4344、1578、1476、4343、1202、4413、4384、3808、1647、1475、3892、3674、1739、3926、3595、1943、3756、4405、3973、4109、4159、3744、4387、1960、4275、3781、1535、1210、4492、4365、4118、3655、3886、4278、4383、4485、1392、3751、3931、3986、3678、1249、4353、4208、3710、4238、4213、3969、4436、3175、4128、2970、1228、3534、3437、3406、3641、3639、3954、4335、3995、3582、4475、3784、4470、4010、3802、3941、4427、4396、4348、3587、3818、3864、3956、3863、3731、3814、4067、4354、4350、4334、3821、1932、3929、4171、1258、3824、3631、4465、4494、1320、1398、3828、1204、1223、1284、1685、3773、4209、3014、4462、4246、4190、4312、4023、3760、3753、1178、3884、2783、4038、3545、2916、3112、2834、3880、3673、4102、4399、4048、3752、4207、1235、3943、4355、4087、4100、4327、4037、4163、3918、4486、1243、3933、4178、1662、1643、4152、3634、3617、4445、4303、1370、3838、4199、4284、1213、4382、1399、1187、3714、1828、4487、3615、1842、1501、3746、4018、4420、3606、4121、3724、3935、1941、4419、4282、1955、1949、4310、4488、1577、4127、1288、1171、3670、4052、3627、3777、936、1371、3685、1325、1940、380、4482、4258、3812、1581、1860、4124、4508、4500、3652、3972、1309、1630、1528、3717、1217、3692、4430、3764、4316、4285、3645、3971、4421、1172、4026、2740、3125、3546、1725、1206、3842、4404、3690、3962、4513、4340、4329、4410、3703、4136、1763、1487、3589、3907、4153、2707、3730、4426、4180、4041、3923、4444、3851、4429、4361、1441、4394、4302、3758、4510、3742、1868、4077、1710、1939、1335、1666、1407、4187、1193、1188、1196、1724、1717、1200、1646、1997、1975、1701、4280、1613、4006、1984、1351、3653、3833、1593、2561、4442、3900、4298、1761、4388、1820、1597、4317、4249、1341、1203、1680、4441、3628、3725、1945、937、4206、1588、1439、3794、4447、1838、3776、3658、4064、1377、4011、4272、4503、1324、1367、3594、3680、1300、1750、938、3913、3774、1877、1987、1862、3998、1380、4185、3686、3696、4463、1350、4008、4230、3853、4244、4083、381、1909、3897、1546、382、3613、3273、3452、3525、1229、4105、3835、383、1263、1234、3970、1492、3856、3586、1175、4321、4020、4144、1224、1199、3667、2778、4412、4407、1812、1810、3823、1416、1427、1507、1878、4333、3146、4281、4211、1179、3843、1669、1677、1524、1525、1974、384、1979、1456、1239、4167、3740、1876、1388、1967、1474、385、1342、1471、4176、1232、1989、4125、1741、1508、1580、4060、4378、1576、1212、1893、3921、3585、1174、1396、4061、4015、1207、3698、3825、3922、4021、4181、1598、1916、1429、4502、4231、1321、4390、3693、3734、1382、3684、1747、3806、3896、3635、1768、4025、3976、3840、3963、4286、1502、3836、4161、3659、3743、4130、3605、1385、1783、4392、4328、1316、4173、4265、1246、1985、1629、1829、1737、3826、1473、1992、1883、1656、1837、1914、1839、1834、3984、4495、3910、4160、3671、4184、4132、4250、1503、1237、1523、1417、4063、1562、3977、1971、1707、1847、1792、3769、4074、1534、4239、4003、3915、1689、1776、1599、1265、1410、1823、1498、1329、939、386、940、387、1655、3874、4261、3626、1791、3579、1644、3936、4054、4260、4359、4131、4297、4357、4022、3770、4046、1222、1996、3788、4169、1925、3953、4228、4226、4277、4101、1889、1369、3797、4088、4019、3771、3632、1402、388、1520、1767、1466、1194、4137、1908、1927、1758、3772、3661、4186、4174、1170、3850、1315、1611、1530、1859、2209、4183、1408、1403、941、4033、3623、3596、1461、1848、1173、1928、1459、1765、1826、3719、1931、3584、4004、3591、3967、4168、3957、3878、4165、4191、3980、4058、4200、4336、3958、1260、4051、3798、4032、1774、4322、3991、4106、1641、1570、3978、3965、4464、3813、4154、1365、4257、3846、4345、4379、3603、1693、3937、3801、1787、1214、4483、4201、1898、1845、1226、1220、4245、1347、3867、1900、3640、3916、4089、1209、3745、3988、3975、4236、4075、4146、4256、4308、4000、4148、3588、3868、4403、3883、4326、4393、3895、4237、3955、3727、4005、4092、4372、4283、1553、3805、4151、1281、1681、4489、3982、4437、3597、4342、3872、3987、4490、3876、3668、4300、1679、1242、3598、3583、3647、389、4304、3793、3779、1937、1907、4042、3648、3996、3800、4367、4099、1807、3887、4428、1625、1390、1884、1682、4364、4306、3869、1278、1672、942、1505、1542、1709、1915、3600、3914、1968、3948、1670、3811、1865、1362、943、1716、3961、1506、4221、1376、944、1683、4276、1445、1721、1632、3607、1328、1455、1913、1497、1317、1951、1778、1379、376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6、在一些方面,seq?id?no:5014的x2是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:752、2144、1653、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、754、1467、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、1308、1230、3960、1378、2994、3080、2589、3681、51、1413、775、776、78、1560、4289、3757、79、3593、4043、1806、3908、4397、1615、4415、3723、2006、3754、1470、4360、80、3945、2854、3523、3669、1356、777、778、87、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、120、4791、2158、121、803、804、1463、805、122、2139、2290、1760、2465、123、130、131、132、4933、808、2336、2026、2204、809、810、2166、208、209、210、835、836、1334、837、3901、3312、2649、1301、211、212、1450、4386、3028、213、1446、214、2206、215、1896、1522、3490、838、216、234、4962、2269、843、235、844、236、237、4930、845、846、238、847、1295、3601、3877、1930、1420、1678、1460、285、1626、299、3809、4271、3844、1436、300、1515、1617、3646、4059、1431、1331、310、3804、1363、1934、1602、1404、4188、1330、4349、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、1345、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、4166、4196、3206、3328、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、3524、2869、2610、3298、2775、3108、2603、3614、2612、2860、3187、3238、3786、4385、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、1853、3216、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3092、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、4098、4449、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、3381、2584、2712、3213、3451、2634、3150、2810、3303、2573、3460、2615、3394、2828、3329、4377、4499、3555、2974、3782、3629、3578、3885、2817、3248、2954、3334、3571、3345、3551、3384、3422、1357、1844、2530、2973、4418、4081、3951、1764、1671、1852、334、1843、3449、3185、3399、2786、3055、3472、3397、2601、3564、3277、4373、3548、3179、3407、3841、3347、3142、4255、4431、3241、3077、2700、3147、2648、3283、2829、3278、2581、2536、4363、2848、3410、2797、2523、2520、2721、3496、2571、3198、3219、3030、2673、2921、3837、3301、3322、2705、3239、2949、3369、3396、2892、2897、2766、3174、3297、2550、2889、2933、2793、2627、2677、3119、2596、3226、3172、3089、2868、2839、3942、3120、3286、2843、3465、1564、3946、4222、1504、3999、2682、1875、2865、3539、3168、2864、3308、3557、2940、3109、3503、2625、3455、3114、2595、3331、2978、2518、2521、4079、3024、3573、2952、2653、1769、3180、2813、2652、2600、2816、3201、3188、3270、2997、2992、3009、3520、2936、3275、3165、3447、3131、3305、2809、2792、2729、2814、2619、3266、2825、3066、2857、2998、3064、2681、3035、3279、2764、3480、3127、2912、3010、2607、3211、3111、3041、1573、3909、4269、3487、3489、3019、335、1266、1415、2980、3428、1355、3454、2851、2881、3232、3458、3326、3353、2927、3212、2950、3376、3208、3062、3612、3195、3385、2686、2602、3569、3123、2727、1622、2821、2636、2750、2850、3050、2925、3336、3540、2689、3139、2526、3361、3022、3427、3107、3140、3371、3276、2831、3501、2924、3366、3199、3101、3321、3499、2917、2683、2800、2812、3340、3227、3148、3657、4446、1746、1464、1886、2666、3246、3130、3560、3236、2730、3572、1607、3689、2968、1457、1500、909、337、1184、3450、2577、2567、2532、3415、2934、2984、2568、4147、4498、1518、3728、3637、3570、3429、4091、2870、2995、4338、3205、2880、3261、1994、3968、4291、4204、4071、4034、1742、2037、352、2820、3912、3287、1218、1190、1959、1840、3736、1283、3861、1383、3644、3691、4259、1749、1418、1176、4216、1924、1421、1387、3992、4423、4253、1618、1871、1256、3748、4119、1297、1586、1251、1299、1954、4450、3990、4029、4097、3890、3796、1389、3711、4344、1578、1476、4343、1202、4413、4384、3808、1647、1475、3892、3674、1739、3926、3595、1943、3756、4405、3973、4109、4159、3744、4387、1960、4275、3781、1535、1210、4492、4365、4118、3655、3886、4278、4383、4485、1392、3751、3931、3986、3678、1249、4353、4208、3710、4238、4213、3969、4436、3175、4128、2970、1228、3534、3437、3406、3641、3639、3954、4335、3995、3582、4475、3784、4470、4010、3802、3941、4427、43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7、在一些方面,seq?id?no:5014的x3是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:4177、1289、740、741、18、745、3477、1548、3051、2982、2877、3036、3426、3073、3169、747、3362、2784、21、3192、23、1638、748、1703、1836、3660、29、750、1640、33、34、35、36、37、38、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、41、42、43、755、45、756、46、48、1952、758、49、3122、2551、3718、3484、3577、759、1230、3960、1378、2994、3080、2589、3681、760、53、3925、55、3654、56、61、4086、1740、1660、765、766、62、1966、63、64、768、771、65、66、67、68、3816、2599、2706、74、3865、1549、1361、3882、3713、1942、1312、4501、76、77、1560、4289、3757、79、3593、4043、1806、3908、4397、1615、4415、3723、2006、3754、1470、4360、3945、2854、3523、3669、82、4065、83、1294、1484、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、1490、1885、1926、89、90、91、779、1180、92、785、786、94、95、1831、1867、4458、97、1970、1936、1590、100、789、790、1298、101、1688、791、792、2007、103、794、795、104、105、106、1849、108、1579、110、1906、113、1444、1344、116、802、117、118、121、803、804、1463、805、122、124、125、127、807、132、809、810、133、1978、812、135、136、137、138、813、140、815、1326、141、142、143、144、145、1634、1302、817、146、818、147、148、149、151、152、153、154、155、819、820、157、159、160、163、164、165、166、822、167、168、169、170、171、823、824、1651、173、1483、174、175、825、176、177、826、827、181、828、182、829、184、185、186、187、188、189、830、191、192、193、194、195、196、1391、197、200、201、202、203、204、205、832、833、206、834、836、1334、837、3901、3312、2649、1301、211、212、1450、4386、3028、213、1446、214、215、1896、1522、3490、838、217、218、219、1612、220、221、222、839、223、840、224、226、227、230、231、842、232、233、844、236、237、851、852、853、1536、240、854、242、243、244、245、246、247、249、250、251、252、253、254、255、857、256、257、258、259、858、859、260、261、860、861、862、262、264、1241、265、266、866、1477、267、867、869、870、271、871、872、272、1252、273、1591、275、1980、276、876、877、277、278、279、1892、1539、880、1295、3601、3877、1930、1420、1678、1460、282、1799、283、1626、1374、287、1620、1290、1354、888、291、1956、889、292、4324、293、4138、891、3903、297、3829、3809、4271、3844、1436、1515、1617、1961、304、306、1589、4370、308、309、894、3646、4059、1431、1331、312、895、1779、313、314、315、316、896、1558、1552、898、321、322、899、1958、901、325、902、326、1491、329、330、905、4484、1756、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2823、3063、3335、3000、3181、3011、3138、3389、2805、3074、2894、3149、2560、3417、3265、3378、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2702、2709、3549、3538、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、3343、2918、2555、2794、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3093、2996、3141、3544、3102、2856、2957、3466、3461、2788、2660、3344、3204、2720、3379、2826、1789、2785、3249、3527、4460、3352、2569、4457、2011、4319、3906、1533、1755、1888、4248、1557、1404、4188、1330、4349、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、1345、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、4166、4196、3206、3328、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、3524、2869、2610、3298、2775、3108、2603、3614、2612、2860、3187、3238、3786、4385、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、1853、3216、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3092、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、4098、4449、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、3381、2584、2712、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8、在一些方面,seq?id?no:5014的x4是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:739、4177、1289、15、743、3477、3051、2982、2877、746、3036、3426、3073、3169、3362、2784、3192、1638、25、1703、1836、3660、30、32、752、1653、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、1467、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、2633、757、1952、3122、2551、3718、2216、3484、3577、1308、1230、3960、2994、3080、2589、3681、51、761、3925、3654、763、764、57、4086、1740、767、772、2599、2706、70、3865、1549、1361、3882、1942、1312、4501、1413、3593、4043、1806、3908、4397、1615、2006、3945、2854、3523、3669、1356、777、4065、84、1484、778、87、3891、4456、4040、4496、2001、1478、1189、1490、1885、2270、1180、786、4458、1970、1590、98、1298、101、1688、794、107、1849、797、1579、111、112、113、1444、801、114、115、119、120、122、1760、123、124、806、125、126、127、128、129、130、134、811、814、139、1326、144、816、1302、150、152、821、160、161、162、1651、1483、179、180、183、185、187、1391、198、199、831、204、833、207、3901、3312、2649、1301、4386、3028、1896、1522、3490、216、218、1612、225、228、229、234、239、849、850、1536、241、246、248、855、249、252、253、261、4966、864、263、4749、2296、1241、866、268、868、269、270、873、874、1252、273、1591、274、1980、878、1539、3601、3877、1930、1420、1678、1460、1799、1374、1290、1354、290、2391、4324、294、4138、3903、892、3829、298、3844、1436、300、1515、1617、1961、303、1589、893、4370、3646、4059、1331、1558、1552、320、1958、1491、1635、332、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2823、3063、3335、3000、3181、3011、3138、3389、2805、3074、2894、3149、2560、3417、3265、3378、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2702、2709、3549、3538、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、3343、2918、2555、2794、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3414、3093、2996、3141、3544、3102、2856、2957、3466、3461、2788、2660、3344、3204、2720、3379、2826、2785、3249、3527、3352、2569、4457、2011、3906、1533、1755、1888、4248、1557、3804、1363、1934、1602、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、1345、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、4166、4196、3206、3328、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、3524、2869、2610、3298、2775、3108、2603、3614、2612、2860、3187、3238、3786、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、1853、3216、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3092、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、4098、4449、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、3381、2584、2712、3213、3451、2634、3150、2810、3303、2573、3460、2615、3394、2828、3329、4377、4499、3555、2974、3782、3629、3578、3885、2817、3248、2954、3334、3571、3345、3551、3384、3422、1357、1844、2530、1852、3449、3185、3399、2786、3055、3472、3397、2601、3564、3277、4373、3548、3179、3407、3841、3347、3142、4255、4431、3241、3077、2700、3147、2648、3283、2829、3278、2581、2536、4363、2848、3410、2797、2523、2520、2721、3496、2571、3198、3219、3030、2673、2921、3837、3301、3322、2705、3239、2949、3369、3396、2892、2897、2766、3174、3297、2550、2889、2933、2793、2627、2677、3119、2596、3226、3172、3089、2868、2839、3942、3120、3286、2843、3465、1564、3946、4222、1504、3999、2682、1875、3539、3168、2864、3308、3557、2940、3109、3503、2625、3455、3114、2595、3331、2978、2518、2521、4079、3024、3573、2952、2653、1769、3180、2813、2652、2600、2816、3201、3188、3270、2997、2992、3009、3520、2936、3275、3165、3447、3131、3305、2809、2792、2729、2814、2619、3266、2825、3066、2857、2998、3064、2681、3035、3279、2764、3480、3127、2912、3010、2607、3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9、在一些方面,seq?id?no:5014的x5是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:2498、4177、742、16、17、18、745、3477、1548、2982、3426、3073、3169、747、3362、4942、23、28、2038、3660、750、31、32、1640、34、37、4925、1205、4288、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3688、4320、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、1225、3178、3006、3252、2991、2642、2519、3363、2633、42、755、44、756、46、1952、758、2410、2551、3718、1308、1230、3960、1378、2589、3681、760、53、4951、4591、762、3925、55、3654、763、60、61、4086、1740、766、1966、63、2041、64、769、770、2384、771、65、772、2197、68、3816、69、2599、70、3865、1549、3882、75、4501、76、774、1413、776、3757、3593、4043、4397、4415、3754、1470、4360、3945、2854、3523、3669、1356、81、82、4065、83、84、1294、87、3891、4456、4040、1189、1490、90、92、782、94、1831、1867、4458、1936、100、792、2007、4556、795、104、106、1849、2509、110、1906、798、2359、2461、4864、1344、116、120、121、803、1463、805、1760、123、124、806、127、2085、130、132、809、1978、134、813、139、815、1326、141、142、145、4816、1302、817、146、818、148、149、4546、150、153、156、157、163、164、166、169、823、824、1483、175、177、178、179、826、827、182、183、829、184、185、190、191、192、2361、195、1391、197、2223、201、202、4775、1334、837、3901、3312、212、4386、3028、213、1446、214、215、1896、3490、217、219、223、225、2088、4542、226、227、230、843、844、237、845、239、849、852、1536、854、244、245、248、855、251、253、255、257、858、860、262、863、4535、865、264、1241、265、1477、267、867、1252、273、275、1980、277、281、1892、879、1539、881、1295、282、285、1626、2082、1374、1620、4564、289、887、888、889、4324、293、4138、296、3903、892、3829、298、301、302、1589、4370、2342、309、4059、310、1779、1558、1552、317、320、898、321、2016、2134、324、325、327、1635、4484、1756、4609、332、4635、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3214、3163、2541、3090、3097、3462、3037、3419、2780、2931、1276、2789、3228、2657、3189、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3102、3466、3461、2788、2660、3344、2720、3379、2826、3249、3527、4460、3352、4319、3906、4248、3804、1363、1404、4349、4166、4196、3206、3328、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、3092、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、4098、4449、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、3782、3629、3578、3885、4081、1764、1852、4431、3241、3077、2700、3147、2648、3283、2829、3278、2581、2536、4363、2848、3410、2797、2523、2520、2721、3496、2571、3198、3219、3030、2673、2921、3837、3301、3322、2705、3239、2949、3369、3396、2892、2897、2766、3174、3297、2550、2889、2933、2793、2627、2677、3119、2596、3226、3172、3089、2868、2839、3942、4222、1504、3180、2813、2652、2600、2816、3201、3188、3270、2997、2992、3009、3520、2936、3275、3165、3447、3131、3305、2809、2792、2729、2814、2619、3266、2825、3066、2857、2998、3064、2681、3035、3279、2764、3480、3127、2912、3010、2607、3211、3111、3909、4269、3019、1415、3020、2748、2646、2787、2760、3158、3170、2703、3494、3404、2675、2749、3341、3355、2594、3495、2884、3516、3042、2737、2923、3563、2855、3476、2611、2937、3383、2875、3223、2878、1808、2951、3519、2579、2853、3387、3401、3007、3568、3152、3367、3358、336、3290、3550、3309、2613、2765、1355、2881、3232、3458、3326、3353、2927、3212、2950、3376、3208、3062、3612、3195、3385、2686、1622、3361、3022、3427、3107、3140、3371、3276、2831、3501、2924、3366、3199、3101、3321、3499、2917、2683、1464、3560、3236、2730、3572、1607、909、2577、2567、2532、3415、2934、2984、2568、3002、2338、4472、1472、1529、4507、1583、340、912、2013、913、2277、1594、4440、917、343、344、345、346、350、351、4498、3637、3570、3429、4091、4338、3205、2880、3261、3968、4291、4204、4034、2820、3912、3287、1218、1190、4145、354、3610、4224、1840、3736、1770、4155、932、363、1279、2156、1722、368、1566、370、4967、372、1211、2494、1726、1748、1191、4039、4411、4506、4270、4156、3780、1550、3899、1181、3919、1639、3664、4189、4001、3799、1240、1686、1479、1307、1575、4296、1665、3871、1605、4408、4149、3741、3893、1280、1983、3979、3817、1489、4214、3902、1857、1904、3820、3789、4252、4330、4082、3785、3687、4243、3704、4172、4315、1192、2769、2678、3296、2343、4093、4453、3940、3778、4374、4339、4368、4194、4474、4013、1771、1759、3860、3832、1381、4356、1233、4212、3858、1198、3611、1919、1819、3790、1969、4247、1790、3894、1554、3576、4314、1851、1850、4511、3656、3638、1406、1443、1661、4504、3831、4435、1208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10、在一些方面,seq?id?no:5014的x6是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:738、4177、1289、740、14、743、744、17、3477、1548、3051、2982、2877、746、19、3036、3426、3073、3169、747、3362、2784、21、3192、22、1638、748、24、749、27、1703、1836、28、3660、29、750、1640、33、35、36、1653、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、1467、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、44、45、756、47、48、1952、3122、2551、3718、3484、3577、1308、3960、1378、2994、3080、2589、3681、51、760、762、3925、3654、763、59、60、4086、1740、1660、62、1966、63、2438、768、66、67、68、3816、2599、2706、72、73、74、3865、1549、1361、3882、773、3713、1942、1312、4501、76、1413、775、1560、4289、3757、3593、3908、4397、4415、3723、3754、4360、3945、2854、3523、3669、1356、4065、1294、1484、85、86、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、1490、1885、1926、89、780、1180、92、781、782、783、786、94、95、788、1831、1867、96、4458、97、1970、1936、1590、98、99、789、790、1298、1688、791、792、2007、102、103、104、105、107、108、1579、1906、111、798、112、799、800、1444、801、114、115、1344、116、802、117、118、119、121、803、1463、1760、806、126、128、807、129、131、808、133、1978、811、812、135、136、137、138、814、140、1326、141、142、143、2344、816、1634、1302、817、818、147、148、149、150、151、154、155、819、820、156、157、158、161、162、165、822、168、169、170、823、172、1651、173、1483、174、825、176、178、180、827、181、828、4911、184、186、188、189、830、192、193、194、196、1391、198、199、200、201、202、203、205、832、206、834、207、208、209、210、835、836、1334、3901、3312、2649、1450、4386、3028、1446、1522、3490、217、219、1612、220、221、222、839、223、840、224、225、228、229、230、231、842、232、233、234、238、847、239、850、851、853、1536、240、241、242、243、244、245、247、250、251、254、255、857、256、258、259、859、260、861、862、864、263、2318、865、2326、264、1241、266、1477、867、268、868、269、270、869、870、271、871、872、272、873、1252、1591、875、274、275、276、876、877、277、278、280、1892、1539、881、3601、3877、1460、282、1799、284、1626、286、1374、1620、1290、1354、887、1956、889、292、4324、4138、891、296、3903、297、3829、3809、4271、3844、1436、300、1617、1961、302、304、305、2147、1589、4370、307、3646、4059、1431、1331、312、1779、313、896、1558、1552、318、319、322、1958、323、324、901、1491、328、329、4484、907、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2823、3063、3335、3000、3181、3011、3138、3389、2805、3074、2894、3149、2560、3417、3265、3378、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2702、2709、3549、3538、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、3343、2918、2555、2794、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3414、3093、2996、3141、3544、3102、2856、2957、3466、3461、2788、2660、3344、3204、2720、3379、2826、1789、2785、3249、3527、4460、3352、2569、4457、2011、4319、3906、1533、1755、4248、1557、3804、1602、4188、1330、4349、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、2869、2610、3298、2775、3108、2603、2612、2860、3187、3238、3786、4385、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、2584、2712、3213、3451、2634、3150、2810、3303、2573、3460、2615、3394、2828、3329、4377、4499、3555、2974、3629、3578、3885、2817、3248、2954、3334、3571、3345、3551、3384、3422、2530、2973、4418、4081、3951、1764、1671、184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11、在一些方面,seq?id?no:5014的x7是r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:740、15、742、743、17、22、24、1836、32、36、2450、39、752、753、1998、3059、2519、757、48、1952、50、52、760、2389、54、2346、58、4086、1660、1966、768、2402、772、71、72、2453、3882、775、1806、3669、1356、2132、81、84、85、87、4040、88、1885、782、783、784、785、94、788、2173、98、2007、102、113、799、4848、1444、4821、2329、115、119、2290、123、806、128、134、812、145、817、154、2149、821、167、171、4596、183、830、191、194、2071、195、4920、831、2223、207、3901、211、212、213、215、224、4782、845、846、849、850、854、247、248、2245、255、261、264、265、1477、270、874、876、279、882、1930、285、286、886、2119、2468、887、888、4138、297、3844、302、893、307、308、2155、1431、2312、900、1635、906、2799、2128、2918、1363、4251、2622、3333、3474、3614、2732、3166、3151、3088、2883、3318、2645、2733、3213、3782、1844、2523、2520、2997、2681、3035、3279、2764、3480、2787、1808、3101、3689、4147、1762、1976、340、1594、2439、348、4498、1518、1782、926、357、359、932、363、369、1873、3780、4140、4001、3709、3834、1752、4113、3817、4232、1340、1489、4214、3902、3820、4330、1872、3687、4318、375、4210、3860、4212、3695、1851、4504、1910、1428、4323、4422、4259、1176、3711、4365、4383、3969、4128、3802、3863、3821、4171、3824、4462、3760、3753、2783、3880、3943、4163、4178、4199、3724、3670、4482、3692、4430、4316、3645、3690、3589、3730、4426、3851、4429、1335、1717、1997、1975、4280、4006、3900、4298、4388、1341、1350、1909、4412、4407、4281、4167、1893、3585、4015、1747、4286、3826、1473、1914、3984、4495、4184、3977、1707、4074、4003、3915、1410、1498、940、4131、4357、1925、1466、1611、1530、4168、4245、4075、3987、1679、4306、3869、3768、393、2265、3618、4433、947、399、401、402、4139、1352、406、415、418、420、4919、431、4044、976、433、434、435、442、3873、3411、3985、987、1485、2262、457、458、4425、466、467、468、1468、474、1008、1012、1016、4518、1697、490、3616、2247、2302、499、500、501、509、2110、512、1797、520、525、3966、1038、537、1041、3683、2165、542、4331、3129、1044、4351、3453、1047、1323、4301、557、3738、559、1270、3857、1056、2186、1057、1059、565、566、3981、567、3620、4002、3666、3939、1221、1397、1437、4337、4268、3938、4292、4215、3750、3633、4070、3592、1827、3839、4395、3855、3665、1624、2395、1818、586、587、1903、1080、1081、1082、589、1084、1085、594、596、4439、3997、1962、1087、4777、606、607、610、1094、4389、1603、1095、616、618、622、1104、4536、3706、2481、3100、3200、3621、4179、1432、4381、643、1115、644、2307、2477、652、657、658、3994、4467、661、663、665、4600、1137、1933、4840、1140、678、680、683、686、692、693、696、2081、2280、698、1400、4197、1532、1854、706、711、712、4570、714、1841、1314、4096、2249、726、1846、2385、1318、733、3651、1165、4839、4968、4684或1454。
12、在一些方面,(a)seq?id?no:5014的x3是堿性氨基酸殘基,(b)seq?id?no:5014的x6是堿性氨基酸殘基或(c)seq?id?no:5014的x3是堿性氨基酸殘基并且seq?id?no:5014的x6是堿性氨基酸殘基。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:739、4177、1289、740、741、18、745、3477、1548、3051、2982、2877、3036、3426、3073、3169、747、3362、2784、21、3192、23、1638、748、1703、1836、3660、29、750、1640、33、34、35、36、37、38、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、41、42、43、755、45、756、46、48、1952、758、49、3122、2551、3718、3484、3577、759、1230、3960、1378、2994、3080、2589、3681、52、760、53、762、4659、54、3925、55、3654、56、60、61、4086、1740、1660、765、766、62、1966、63、64、768、771、65、66、67、68、3816、2599、2706、2399、74、3865、1549、1361、2453、3882、3713、1942、75、1312、4501、76、77、78、1560、4289、3757、79、3593、4043、1806、3908、4397、1615、4415、3723、2006、3754、1470、4360、3945、2854、3523、3669、82、4065、83、1294、1484、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、88、1490、1885、1926、89、90、91、779、1180、92、785、786、94、95、1831、1867、4458、97、1970、1936、1590、99、100、789、790、1298、101、1688、791、792、2007、103、794、795、104、105、106、1849、108、4736、1579、110、1906、113、1444、1344、116、802、117、118、2158、121、803、804、1463、805、122、2058、124、125、127、4994、807、132、809、810、133、1978、812、135、136、137、138、813、4673、140、815、1326、141、142、143、144、145、4816、1634、1302、817、146、818、147、148、149、151、152、153、154、155、819、820、157、821、159、160、163、164、165、166、822、167、168、169、170、171、823、824、1651、173、1483、174、175、825、176、177、180、826、827、181、828、182、183、4641、829、184、185、186、187、188、189、830、191、192、193、194、195、196、1391、197、2223、200、201、202、203、204、205、832、833、206、834、835、836、1334、837、3901、3312、2649、1301、211、212、1450、4386、3028、213、1446、214、215、1896、1522、3490、838、2241、217、218、219、1612、220、221、222、839、223、840、224、226、227、230、231、842、232、233、235、844、236、237、2150、851、852、853、1536、240、854、242、243、244、245、246、247、855、4634、249、250、251、252、253、254、255、857、256、257、258、259、858、859、260、261、860、861、862、262、2326、264、1241、265、266、866、1477、267、867、869、870、271、871、872、272、874、1252、273、1591、275、1980、276、876、877、277、278、279、1892、879、1539、880、1295、3601、3877、1930、1420、1678、1460、2306、282、1799、283、1626、1374、287、1620、1290、1354、888、291、1956、889、292、4324、293、4138、891、2224、3903、297、3829、3809、4271、3844、1436、1515、1617、1961、304、306、1589、4370、308、309、894、3646、4059、1431、1331、4948、312、895、1779、313、314、315、316、896、1558、1552、897、898、321、322、899、1958、2134、324、901、325、902、326、1491、329、330、905、4484、1756、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2823、3063、3335、3000、3181、3011、3138、3389、2805、3074、2894、3149、2560、3417、3265、3378、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2702、2709、3549、3538、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、3343、2918、2555、2794、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3093、2996、3141、3544、3102、2856、2957、3466、3461、2788、2660、3344、3204、2720、3379、2826、1789、2785、3249、3527、4460、3352、2569、4457、2011、4319、3906、1533、1755、1888、4248、1557、1363、1934、1602、1404、4188、1330、4349、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、1345、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、4166、4196、3206、3328、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、3524、2869、2610、3298、2775、3108、2603、3614、2612、2860、3187、3238、3786、4385、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、1853、3216、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3092、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、4098、4449、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、294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13、在一些方面,堿性殘基選自由k、r和h組成的組。
14、在一些方面,seq?id?no:5014的x3是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:4177、1289、740、741、18、745、3477、1548、3051、2982、2877、3036、3426、3073、3169、747、3362、2784、21、3192、23、1638、748、1703、1836、3660、29、750、1640、33、34、35、36、37、38、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、41、42、43、755、45、756、46、48、1952、758、49、3122、2551、3718、3484、3577、759、1230、3960、1378、2994、3080、2589、3681、760、53、3925、55、3654、56、61、4086、1740、1660、765、766、62、1966、63、64、768、771、65、66、67、68、3816、2599、2706、74、3865、1549、1361、3882、3713、1942、1312、4501、76、77、1560、4289、3757、79、3593、4043、1806、3908、4397、1615、4415、3723、2006、3754、1470、4360、3945、2854、3523、3669、82、4065、83、1294、1484、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、1490、1885、1926、89、90、91、779、1180、92、785、786、94、95、1831、1867、4458、97、1970、1936、1590、100、789、790、1298、101、1688、791、792、2007、103、794、795、104、105、106、1849、108、1579、110、1906、113、1444、1344、116、802、117、118、121、803、804、1463、805、122、124、125、127、807、132、809、810、133、1978、812、135、136、137、138、813、140、815、1326、141、142、143、144、145、1634、1302、817、146、818、147、148、149、151、152、153、154、155、819、820、157、159、160、163、164、165、166、822、167、168、169、170、171、823、824、1651、173、1483、174、175、825、176、177、826、827、181、828、182、829、184、185、186、187、188、189、830、191、192、193、194、195、196、1391、197、200、201、202、203、204、205、832、833、206、834、836、1334、837、3901、3312、2649、1301、211、212、1450、4386、3028、213、1446、214、215、1896、1522、3490、838、217、218、219、1612、220、221、222、839、223、840、224、226、227、230、231、842、232、233、844、236、237、851、852、853、1536、240、854、242、243、244、245、246、247、249、250、251、252、253、254、255、857、256、257、258、259、858、859、260、261、860、861、862、262、264、1241、265、266、866、1477、267、867、869、870、271、871、872、272、1252、273、1591、275、1980、276、876、877、277、278、279、1892、1539、880、1295、3601、3877、1930、1420、1678、1460、282、1799、283、1626、1374、287、1620、1290、1354、888、291、1956、889、292、4324、293、4138、891、3903、297、3829、3809、4271、3844、1436、1515、1617、1961、304、306、1589、4370、308、309、894、3646、4059、1431、1331、312、895、1779、313、314、315、316、896、1558、1552、898、321、322、899、1958、901、325、902、326、1491、329、330、905、4484、1756、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2823、3063、3335、3000、3181、3011、3138、3389、2805、3074、2894、3149、2560、3417、3265、3378、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2702、2709、3549、3538、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、3343、2918、2555、2794、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3093、2996、3141、3544、3102、2856、2957、3466、3461、2788、2660、3344、3204、2720、3379、2826、1789、2785、3249、3527、4460、3352、2569、4457、2011、4319、3906、1533、1755、1888、4248、1557、1404、4188、1330、4349、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、1345、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、4166、4196、3206、3328、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、3524、2869、2610、3298、2775、3108、2603、3614、2612、2860、3187、3238、3786、4385、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、1853、3216、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3092、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、4098、4449、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、3381、2584、2712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15、在一些方面,seq?id?no:5014的x6是k或r。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:738、4177、1289、740、14、743、744、17、3477、1548、3051、2982、2877、746、19、3036、3426、3073、3169、747、3362、2784、21、3192、22、1638、748、24、749、27、1703、1836、28、3660、29、750、1640、33、35、36、1653、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、1467、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、44、45、756、47、48、1952、3122、2551、3718、3484、3577、1308、3960、1378、2994、3080、2589、3681、51、760、762、3925、3654、763、59、60、4086、1740、1660、62、1966、63、2438、768、66、67、68、3816、2599、2706、72、73、74、3865、1549、1361、3882、773、3713、1942、1312、4501、76、1413、775、1560、4289、3757、3593、3908、4397、4415、3723、3754、4360、3945、2854、3523、3669、1356、4065、1294、1484、85、86、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、1490、1885、1926、89、780、1180、92、781、782、783、786、94、95、788、1831、1867、96、4458、97、1970、1936、1590、98、99、789、790、1298、1688、791、792、2007、102、103、104、105、107、108、1579、1906、111、798、112、799、800、1444、801、114、115、1344、116、802、117、118、119、121、803、1463、1760、806、126、128、807、129、131、808、133、1978、811、812、135、136、137、138、814、140、1326、141、142、143、2344、816、1634、1302、817、818、147、148、149、150、151、154、155、819、820、156、157、158、161、162、165、822、168、169、170、823、172、1651、173、1483、174、825、176、178、180、827、181、828、4911、184、186、188、189、830、192、193、194、196、1391、198、199、200、201、202、203、205、832、206、834、207、208、209、210、835、836、1334、3901、3312、2649、1450、4386、3028、1446、1522、3490、217、219、1612、220、221、222、839、223、840、224、225、228、229、230、231、842、232、233、234、238、847、239、850、851、853、1536、240、241、242、243、244、245、247、250、251、254、255、857、256、258、259、859、260、861、862、864、263、2318、865、2326、264、1241、266、1477、867、268、868、269、270、869、870、271、871、872、272、873、1252、1591、875、274、275、276、876、877、277、278、280、1892、1539、881、3601、3877、1460、282、1799、284、1626、286、1374、1620、1290、1354、887、1956、889、292、4324、4138、891、296、3903、297、3829、3809、4271、3844、1436、300、1617、1961、302、304、305、2147、1589、4370、307、3646、4059、1431、1331、312、1779、313、896、1558、1552、318、319、322、1958、323、324、901、1491、328、329、4484、907、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、2728、2955、3408、3027、3094、3203、2988、2751、2953、2566、2578、2823、3063、3335、3000、3181、3011、3138、3389、2805、3074、2894、3149、2560、3417、3265、3378、2901、2837、2822、2745、3473、3530、3040、2597、3509、3522、3161、2926、3209、3105、3400、2630、2905、2671、2818、2806、2702、2709、3549、3538、2534、2773、2623、3491、3243、3136、2693、3164、3343、2918、2555、2794、2679、3510、3110、2672、3442、2929、3184、3488、3414、3093、2996、3141、3544、3102、2856、2957、3466、3461、2788、2660、3344、3204、2720、3379、2826、1789、2785、3249、3527、4460、3352、2569、4457、2011、4319、3906、1533、1755、4248、1557、3804、1602、4188、1330、4349、3337、3533、2629、3038、2539、3567、3291、3348、3115、3359、2993、3079、3506、2527、2963、2938、2516、3113、2639、3143、3044、2747、3154、3280、3039、2743、2902、3056、2554、2522、3103、3210、3434、2656、4251、2588、3553、2714、3078、3222、3137、3357、2717、2944、3012、3220、3202、2811、3083、3269、3566、2699、2515、3023、2533、3288、3075、3005、2685、3058、2976、2622、3333、3463、2939、3521、3268、3117、2626、2616、3240、2570、3565、2919、3157、2849、3444、2631、3420、2659、3325、3186、2920、3258、3440、3457、3310、2761、3134、2621、3531、2711、2774、2867、2585、3155、2620、3156、2844、3126、3160、2909、3542、3225、2887、3474、3218、2744、2896、3135、3424、3498、3529、2661、2667、2549、2819、2768、2935、3182、2772、3230、3043、2922、3581、2869、2610、3298、2775、3108、2603、2612、2860、3187、3238、3786、4385、3016、3436、2876、2987、3532、3438、3561、3259、2663、2890、3433、3071、3018、2580、2755、3015、2540、3398、2664、2583、2830、2644、2641、3513、2725、2723、3338、3556、2866、2514、2932、2753、2862、2899、2605、2989、3096、3124、2985、2716、3145、3017、2591、2640、3033、3316、3412、2971、3256、3153、3575、3339、2915、2531、3552、3475、3060、3375、2756、3382、2847、2859、3251、3702、3423、2537、2801、3076、2696、3459、3144、3441、2802、3479、2907、3512、3518、3021、2871、3032、2647、2945、3045、2763、3313、3034、3315、3541、2746、2669、2524、3003、2732、3166、3046、3306、2873、3364、3253、3215、3061、2804、2722、2964、2990、2836、3173、2762、3737、2628、3507、2564、3031、2872、3360、2658、2930、2904、3244、3217、3311、3445、2840、3372、2958、3098、3356、3456、3388、2624、3207、2576、2742、2665、2815、3052、3421、2593、3242、2535、2966、2898、2858、2943、2668、2798、3196、2528、2713、3001、2691、2948、2767、2544、3302、2734、2893、2592、2861、3502、2969、2582、3229、2676、2545、3255、3330、2547、3257、2882、3151、3088、2883、3318、2645、2733、2587、3500、3008、2715、2845、3183、2654、3233、3267、2741、2827、2704、3091、2832、2736、3177、3271、2835、2908、3176、2947、3292、3191、2517、3026、3082、3392、2584、2712、3213、3451、2634、3150、2810、3303、2573、3460、2615、3394、2828、3329、4377、4499、3555、2974、3629、3578、3885、2817、3248、2954、3334、3571、3345、3551、3384、3422、2530、2973、4418、4081、3951、1764、1671、184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16、在一些方面,(a)seq?id?no:5014的x3不是d,(b)seq?id?no:5014的x6不是d或(c)seq?id?no:5014的x3不是d并且seq?id?no:5014的x6不是d。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:738、739、4177、1289、740、14、15、741、742、743、16、744、17、18、745、3477、1548、3051、2982、2171、2877、746、19、20、3036、3426、3073、3169、747、2406、3362、2784、2469、4889、21、3192、4942、22、23、1638、748、24、25、749、26、27、1703、1836、28、2038、2301、3660、29、750、30、31、32、2095、1640、33、34、35、36、37、4742、2450、38、4925、39、751、752、2144、1653、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、754、1467、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、41、42、43、755、2511、44、45、756、46、757、47、48、1952、758、2341、2410、49、3122、2551、3718、4806、2216、3484、3577、759、2080、2072、2034、50、1308、1230、3960、1378、2994、3080、2589、3681、51、2167、52、760、53、2389、4755、761、4591、762、4659、54、2146、3925、55、3654、2087、2346、4766、4682、4984、4744、56、763、764、4626、4702、57、58、59、60、61、4086、1740、1660、765、766、62、1966、2032、2499、2332、767、63、2096、2181、4913、2438、2041、64、768、769、770、2384、2402、771、65、66、2111、67、772、2458、2197、68、3816、69、2599、2706、2497、70、2399、71、4769、2366、72、73、74、3865、1549、1361、2453、3882、773、3713、1942、2140、75、1312、4501、76、77、774、1413、775、776、78、1560、4289、3757、79、3593、4043、1806、3908、4397、1615、4415、3723、2006、3754、1470、4360、80、3945、2854、3523、3669、1356、777、2379、81、82、4065、83、84、2030、1294、2413、2064、1484、2299、85、4594、86、778、87、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、88、1490、1885、1926、89、90、91、779、2270、780、2161、1180、92、781、782、783、93、2356、784、785、786、94、95、788、1831、1867、96、4458、97、1970、4656、2173、1936、2349、1590、98、99、100、789、790、1298、101、1688、791、792、2007、4556、2070、102、793、4632、103、794、795、104、105、106、2229、796、4980、4691、107、2440、1849、108、2014、797、4736、2509、2018、2227、4787、1579、110、1906、111、2428、798、2075、112、2411、113、2359、799、4848、800、2461、1444、2313、2350、4579、4821、801、114、2329、4864、4834、115、1344、116、802、117、118、119、4929、4677、120、4791、2158、121、803、804、1463、805、122、2139、2290、1760、2465、123、2424、2058、2230、124、4717、806、125、126、2370、127、4521、128、4971、4994、807、2085、4533、129、130、131、132、4933、808、2336、2026、2204、809、810、2281、133、1978、134、811、812、135、136、137、138、813、814、139、4673、140、815、1326、141、142、143、2344、4544、5009、144、145、816、4654、2125、4663、4810、4816、1634、1302、817、146、818、147、148、149、4546、150、151、152、153、154、155、819、820、156、2149、157、2295、821、158、159、160、161、4631、2441、162、163、164、165、166、822、167、168、169、170、171、823、172、4613、824、1651、173、1483、174、175、825、176、177、178、179、4624、2170、4809、4520、180、826、827、181、828、4695、2130、4911、182、4582、4873、2189、183、4641、829、184、185、2244、4647、186、187、188、189、190、2114、830、191、192、193、194、2071、4615、2361、195、4852、2187、4914、4947、196、1391、197、4534、4726、4788、198、199、831、2240、2223、200、201、202、203、2106、2503、4775、204、205、832、833、206、834、2232、2294、207、2166、208、209、210、835、836、1334、837、3901、3312、2649、1301、211、212、1450、4386、3028、213、1446、214、2206、215、1896、1522、3490、838、216、2090、2241、217、218、4653、219、1612、220、221、222、839、223、4974、4790、4915、2464、4567、4774、4964、2360、840、224、4928、4741、225、2088、4751、226、227、4890、4519、4883、228、4786、229、230、231、2393、2448、841、842、232、233、4782、234、2269、843、235、844、236、237、4930、845、846、238、847、239、848、849、2150、850、851、852、853、1536、240、854、241、242、243、244、245、246、247、248、4696、855、4634、856、249、250、251、252、253、254、255、857、2115、4880、2218、256、257、258、259、858、859、260、261、860、861、862、262、4966、863、864、263、4749、4970、2296、2318、4535、865、2326、264、1241、265、266、866、1477、267、867、4977、268、868、269、4668、5002、270、869、870、271、871、872、272、4822、4709、873、4655、4972、2392、2317、874、1252、273、1591、4975、875、274、2025、275、1980、276、876、877、2066、277、278、279、4670、280、2323、2288、2334、4939、4689、281、878、2416、1892、879、1539、2214、2215、880、2327、881、882、4601、883、1295、3601、3877、1930、1420、1678、1460、2306、884、282、1799、283、284、4988、4871、4553、4772、4817、2260、1626、2082、885、286、1374、886、2119、2504、2468、287、1620、1290、2425、2482、4564、4671、2282、288、2354、1354、2033、289、887、290、888、291、1956、2362、2467、889、2357、4547、4765、292、4794、2391、4324、293、890、294、295、4138、891、2297、2254、296、2224、3903、297、892、3829、298、299、3809、4271、3844、1436、300、1515、1617、301、1961、4649、5010、302、2060、303、304、305、2452、2147、4574、4538、306、2293、1589、893、4946、4370、4841、2342、307、308、309、894、2246、2155、3646、4059、1431、1331、310、311、4948、312、895、1779、313、314、315、316、896、1558、1552、317、2312、318、319、897、320、898、321、322、899、1958、2022、2016、900、2454、323、2427、2134、324、901、325、902、326、2373、4803、2459、1491、327、328、903、2463、2264、329、330、904、1635、4820、905、2506、331、4706、4484、1756、906、907、4661、2179、4584、4609、332、4907、4635、4529、4683、4523、4561、333、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2128、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、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17、在一些方面,(a)seq?id?no:5014的x3不是e,(b)seq?id?no:5014的x6不是e或(c)seq?id?no:5014的x3不是e并且seq?id?no:5014的x6不是e。在一些方面,vp衣殼多肽的581至589區(qū)具有以下seq?id?no中任一個(gè)的序列:2498、4884、738、739、4177、1289、740、14、15、741、742、743、16、744、17、18、745、3477、1548、3051、2982、2171、2877、746、19、20、3036、3426、3073、3169、747、2406、3362、2784、4889、21、3192、4942、22、23、1638、748、24、25、749、26、27、1703、1836、28、2038、2301、3660、29、750、30、31、32、2095、1640、33、34、35、36、37、4742、2450、38、4925、39、751、752、1653、1205、3795、753、4288、4219、2770、2962、4241、4107、2718、3317、4391、4053、3263、2553、3947、2710、2608、3467、2796、2961、2529、3320、2674、2635、3446、3053、3250、3688、1182、1998、4320、3351、2655、3514、2779、3194、3319、3224、3281、3708、2807、3562、3274、3374、3013、3416、2981、3065、2777、3469、2977、2638、2972、3059、2574、3380、4262、3167、3368、2781、3547、3386、1225、2960、3485、3370、3443、2824、754、1467、3327、3178、3006、3252、2991、3470、2888、2572、3418、2642、2519、3363、40、2633、41、42、43、755、2511、44、45、756、46、757、47、48、1952、758、2341、2410、49、3122、2551、3718、4806、2216、3484、3577、759、2080、2072、2034、50、1308、1230、3960、1378、2994、3080、2589、3681、51、4694、2257、52、760、53、2389、4934、4951、761、4591、762、4659、54、2146、3925、55、3654、2087、2346、4766、4682、4984、4744、56、763、764、4626、4702、57、58、59、60、61、4086、1740、1660、765、766、62、1966、2032、2499、2332、767、63、2096、2181、4913、64、768、769、770、2384、2402、771、65、66、2111、67、772、2458、2197、68、3816、69、2599、2706、2497、70、2234、2183、2399、71、4769、2366、72、73、74、3865、1549、1361、2453、3882、773、3713、1942、2140、75、1312、4501、76、77、774、1413、775、776、78、1560、4289、3757、79、3593、4043、1806、3908、4397、1615、4415、3723、2006、3754、1470、4360、80、3945、2854、3523、3669、1356、777、2132、2379、81、82、4065、83、84、2030、1294、2413、2064、1484、85、4594、86、778、87、3891、4456、4040、4496、1982、2001、1478、1189、88、1490、1885、1926、89、90、91、779、2270、780、2161、1180、92、781、782、783、93、2356、784、785、786、94、95、787、788、1831、1867、96、4458、97、1970、4656、2173、1936、2349、1590、4585、98、99、100、789、790、1298、101、1688、791、792、2007、4556、2070、102、793、4632、103、794、795、104、105、106、2229、796、4980、4691、107、2440、1849、108、2014、797、4736、2509、2018、2227、4787、109、1579、110、1906、111、2428、798、2075、112、2411、113、2359、799、4848、800、2461、1444、2313、2350、4579、4821、801、114、2329、4834、115、1344、116、802、117、118、119、4929、4677、120、2158、121、803、804、1463、805、122、2139、2290、1760、2465、123、2424、2058、2230、124、4717、806、125、126、2370、127、4521、128、4971、4994、807、2085、4533、129、130、131、132、4933、808、2336、2026、2204、809、810、2281、133、1978、134、811、812、135、136、137、138、813、814、139、4673、140、815、1326、141、142、143、2344、4544、5009、144、145、816、4654、4816、1634、1302、817、146、818、147、148、149、4546、150、151、152、153、154、155、819、820、156、2149、157、2295、821、158、159、160、161、4631、2441、162、163、164、165、166、822、167、168、169、170、171、823、172、4613、824、1651、173、1483、174、175、825、176、177、178、179、4624、2170、4809、4520、180、826、827、181、828、4695、4911、182、4582、4873、4596、2020、183、4641、829、184、185、2244、4647、186、187、188、189、190、2114、830、191、192、193、194、2071、4615、2361、195、4852、2187、4914、4947、196、1391、197、4534、4726、4788、198、199、4920、831、2240、2223、200、201、202、203、2106、2503、4775、204、205、832、833、206、834、2232、2294、207、2166、208、209、210、835、836、1334、837、3901、3312、2649、1301、211、212、1450、4386、3028、213、1446、214、2206、215、1896、1522、3490、838、216、2241、217、218、4653、219、1612、220、221、222、839、223、4953、2360、840、224、4928、4741、225、2088、4751、5007、4542、226、227、4890、4519、4883、228、4786、229、230、231、2393、2448、841、842、232、233、4782、234、4962、2269、843、235、844、236、237、4930、845、846、238、847、4704、239、848、849、2150、850、851、852、853、1536、240、854、241、242、243、244、245、246、247、248、4923、2245、4696、855、4634、856、249、250、251、252、253、254、255、857、2115、4880、2218、256、257、258、259、858、859、260、261、860、861、862、262、4966、863、864、263、4749、4970、2296、2318、865、2326、264、1241、265、266、866、1477、267、867、4977、268、868、269、4668、5002、270、869、870、271、871、872、272、4822、4709、873、4655、4972、2392、874、1252、273、1591、4975、875、274、2025、275、1980、276、876、877、2066、277、278、279、4670、280、2323、2288、2334、4939、4689、281、878、1892、879、1539、2214、2215、880、2327、881、882、4601、883、1295、3601、3877、1930、1420、1678、1460、2306、884、282、1799、283、284、4988、4553、4772、4817、2260、285、1626、2082、885、286、1374、886、2119、2468、287、2408、1620、1290、2425、2482、4564、4671、2282、288、2354、1354、2033、289、887、290、888、291、1956、2362、2467、889、2357、4547、4765、292、4794、2391、4324、293、890、294、295、4138、891、2297、2254、296、2224、3903、297、892、3829、298、299、3809、4271、3844、1436、300、1515、1617、4701、2174、301、1961、4649、5010、302、303、304、305、2452、2147、306、2293、1589、893、4370、4841、2342、307、308、309、894、2246、2155、3646、4059、1431、1331、310、311、4836、4948、312、895、1779、313、314、315、316、896、1558、1552、317、2312、318、319、897、320、898、321、322、899、1958、2022、2016、900、2454、323、2427、2134、324、901、325、902、326、2373、4803、2459、1491、327、328、903、2463、2264、329、330、904、1635、4820、905、2506、331、4706、2092、4484、1756、906、907、4661、2179、4584、4609、332、4907、4635、4529、4683、4523、4561、333、2337、3536、2701、2799、3332、3294、3159、3069、2637、3025、2782、3247、3350、2692、2586、3004、3049、2694、2650、3554、2983、3403、3214、3163、2541、3090、3097、3462、1430、2941、3486、2842、3558、3104、3037、3419、2780、2931、1276、2928、2609、3068、3128、2548、2538、2618、2789、3228、2657、3189、2128、2863、3307、3300、2546、3048、3543、2946、2975、3346、3067、272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1051、557、558、1052、1053、3738、1567、559、1054、1270、3857、1055、2151、560、2175、2089、1056、2198、2193、1257、1238、3662、561、2186、1057、4637、562、1058、563、4872、2097、564、1059、565、566、1060、1061、2231、4203、1899、3981、1062、1303、4116、567、1063、568、569、570、2367、1946、3620、1064、1514、4002、3679、3964、3707、3666、1348、4273、1804、4497、571、1401、4438、1895、1264、572、1912、573、3939、4170、4056、1271、1065、1521、1221、1066、1451、1654、1067、3934、4080、4352、574、1700、3739、1565、1419、1811、3950、1690、1397、3716、1569、1465、1437、1674、4337、1285、4268、1183、3726、3881、4134、4347、4012、3938、4066、4198、4416、4164、3630、4229、4292、4193、4325、4375、4371、4432、4215、1753、3944、1409、4195、1729、4223、1540、4455、1068、1069、4512、1723、1070、3750、3633、4070、4104、4162、4235、1863、4346、1881、1814、1572、2418、575、4443、3761、1346、1587、1072、3592、576、1891、4469、2430、1275、577、1950、1963、4129、1073、1296、1360、1551、3733、4111、3993、4108、3949、1287、1713、1556、1736、1995、1435、1424、1830、1705、1861、1197、1254、4120、1545、4417、1469、1292、2279、1785、1236、4293、1827、3839、3983、4395、1957、2222、578、3928、4295、3715、3855、3609、1990、4076、4175、3927、1757、1650、4299、1773、2004、1267、1364、579、1462、1879、4007、3729、3665、3722、1691、1712、1074、1624、1751、1394、3924、3952、580、581、2003、1343、2203、1559、1250、1555、582、2395、4114、1818、1075、583、1076、1077、1704、4448、584、4882、1078、1079、1786、585、3354、1832、586、3432、2891、587、588、4583、2505、1903、2077、4936、4658、4830、2446、1080、2278、1081、1082、4459、1083、589、1563、1084、2255、2113、590、591、1085、592、2308、593、594、2274、595、4931、2407、1858、596、597、598、1453、2559、2590、2738、4478、4069、1809、1327、4150、3260、3481、3672、3625、2008、4439、3852、3997、1411、599、3847、4993、1268、4050、3377、4424、1496、4143、4493、3492、1962、1412、2455、600、2457、1086、601、4017、4477、1794、2483、2291、602、4263、3072、2009、2199、1754、1087、1088、3888、603、604、4777、2324、605、1368、3827、4103、606、607、1089、2220、4549、1090、1571、1091、1438、608、1092、609、610、611、1093、612、1094、3701、4389、613、4897、1603、614、1095、5000、615、616、2263、1332、1715、4369、1652、1096、617、1541、618、1921、1733、1373、1870、619、4218、1798、2387、1097、1098、1099、1100、620、1702、621、622、4801、2398、2239、1101、1667、1384、623、4745、3700、1788、1600、624、2098、625、4550、4721、4960、4878、2473、4792、4675、1102、1423、626、2771、627、1339、3875、628、629、3070、4565、2118、4818、2557、2795、2906、2103、4869、2029、3299、3118、4932、4838、4901、4657、4646、4875、4627、4515、4876、4965、4605、4576、2028、4985、4850、1103、4747、1614、1947、2237、630、631、4618、4479、3766、632、1104、1105、4886、1106、2432、633、1107、4530、634、2371、4651、1108、4536、635、1813、636、2431、4866、4991、4814、4560、4956、637、4555、1109、4941、4577、2213、638、639、3706、1110、640、1111、641、4581、4893、4831、2481、4644、4734、2190、4524、4881、4837、4888、4648、642、4807、4896、4868、2374、1112、4823、2164、1113、3735、3390、1694、3431、2838、3483、3464、3848、2558、3314、3086、3029、2956、3517、2651、2914、2680、2632、3121、3100、3528、3526、3084、4220、3304、2846、1186、3235、2903、3559、2687、3409、3237、2900、2999、3349、3171、2752、3262、3504、3047、4376、3193、3430、2525、2670、2911、3508、2776、2697、3200、2790、3323、2543、2874、2614、3904、3373、3054、2617、4242、3621、2708、4179、4398、3959、4935、1269、3095、1286、3624、4481、1432、3511、2735、4381、3295、1585、2390、1568、1114、1766、3221、2643、2739、643、4735、4760、1115、4918、4688、3920、644、4723、4949、4748、4607、4719、1116、645、646、4611、2353、4645、4998、2307、647、1801、4279、3762、1637、1509、4843、4797、4590、4995、4541、2200、4580、4858、648、649、2502、1117、4780、4800、4551、4674、1118、1119、2965、2369、2695、3293、650、651、4730、4862、4722、4944、1120、652、1121、4983、4784、4877、4643、653、654、4909、1122、3264、655、2076、4849、656、657、2447、658、659、4035、2910、3391、2808、3099、2913、3676、2852、3284、2731、1609、2375、2201、3537、3994、1319、4467、1802、1227、1623、660、4844、2086、4770、2192、1123、661、2364、662、663、664、1124、1125、665、2487、4899、2138、1126、666、667、4569、4554、4917、2322、1127、1128、1129、668、669、1130、670、1131、1527、1132、671、1772、2314、1133、1134、2470、1135、672、2236、4716、673、4600、2196、2456、4606、4910、2123、1136、1137、2358、5005、2208、4952、4945、1933、1731、1793、675、676、3342、1138、677、4597、4870、1140、4990、4954、4916、678、1141、4737、4527、2253、4531、679、1142、1143、680、4771、1144、4638、681、4705、4525、4522、4898、2325、2415、5004、1145、682、683、1146、684、685、2445、686、687、4861、2157、688、3822、689、690、4743、691、1147、1601、692、1148、693、4537、4825、4625、4621、3905、694、695、1414、1149、696、2027、2159、4756、4793、4575、2160、4828、4731、4718、4802、4750、1150、2081、2258、697、1795、1372、1695、1866、1151、4115、1719、2280、4662、698、2176、2194、2217、1920、699、700、701、4999、1544、4739、702、703、4031、4305、1636、1393、2010、3810、4452、3677、4227、1277、1400、4402、4157、4197、1337、1253、1532、4028、3989、2449、4715、704、2050、1493、1854、1902、1510、1152、4824、705、2340、4182、706、2442、2484、707、708、709、4667、1153、2412、4476、2053、710、1375、711、712、713、4829、4738、4811、4570、4961、1245、714、2045、4707、715、2169、4713、1841、4234、4924、1154、1314、4096、2023、716、717、4895、718、1155、719、720、2063、1311、721、4642、722、4885、4666、2249、4217、1156、723、1157、1627、2116、4566、2287、1158、2330、4826、4622、4740、724、4700、725、1159、5013、4894、726、2434、1953、1160、1201、727、3787、2046、1161、728、729、2485、2044、4568、3747、730、731、2024、1846、2507、2368、2019、2333、3815、2005、2266、1964、2347、2385、732、2177、2059、4958、1822、4815、1262、2094、4480、1537、1291、2419、1318、2283、4976、4294、2486、4926、1582、2162、733、4587、734、735、3439、2833、4287、4509、4505、4267、3697、3272、4112、2967、3651、1991、1805、1628、3705、2479、736、1195、4863、1163、3859、1164、2394、1165、2355、2351、4679、4835、2259、4839、4571、1166、4968、2250、4912、2423、737、1167、4989、4684、4669、4552、4612、2127、1745、1973、4767、1168、2273、2310、3807、4307、1169、2303、1454或1781。
18、在一些方面,seq?id?no:5014的x3、x6和x1是堿性氨基酸殘基。在一些方面,seq?idno:5014的x3、x6和x4是堿性氨基酸殘基。在一些方面,seq?id?no:5014的x3、x6、x1和x4是堿性氨基酸殘基。
19、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述vp衣殼多肽的581至589區(qū)包含至少兩個(gè)堿性氨基酸殘基和不超過(guò)一個(gè)酸性氨基酸殘基。
20、在一些方面,所述vp衣殼多肽包含選自由以下組成的組的一個(gè)或多個(gè)特征:(a)所述581至589區(qū)包含兩個(gè)或更多個(gè)堿性氨基酸殘基;(b)seq?id?no:5014的x3、x6、x1或x4或它們的任何組合是堿性氨基酸殘基;以及(c)所述581至589區(qū)包含不超過(guò)一個(gè)酸性氨基酸殘基。
21、在一些方面,所述vp衣殼多肽包含兩個(gè)或更多個(gè)特征。在一些方面,所述vp衣殼多肽包含三個(gè)特征。在一些方面,所述酸性氨基酸殘基是d或e。在一些方面,所述堿性氨基酸殘基是k、r或h。
22、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:14–seq?idno:2013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列。
23、在一些方面,所述581至589區(qū)包含seq?id?no:14–seq?id?no:2013中任一個(gè)的序列。
24、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:2514–seq?idno:4513中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列。
25、在一些方面,所述581至589區(qū)包含seq?id?no:2514–seq?id?no:4513中任一個(gè)的序列。在一些方面,與seq?id?no:1的野生型aav5?vp衣殼多肽相比,所述581至589區(qū)賦予增加的視網(wǎng)膜組織向性。在一些方面,所述視網(wǎng)膜組織向性為seq?id?no:1的野生型aav5?vp衣殼多肽的至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少75倍、至少100倍、至少200倍或至少500倍。
26、在一些方面,與seq?id?no:1的野生型aav5?vp衣殼多肽相比,所述581至589區(qū)還賦予增加的視網(wǎng)膜色素上皮組織向性。在一些方面,與seq?id?no:1的野生型aav5?vp衣殼多肽相比,所述581至589區(qū)賦予降低的光感受器組織向性。在一些方面,所述光感受器組織包括桿狀光感受器細(xì)胞、錐形光感受器細(xì)胞或它們的組合。在一些方面,所述vp衣殼多肽包含與seq?id?no:1至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少97%、至少98%、至少98.5%、至少99%或至少99.5%相同的氨基酸序列。
27、在一些方面,所述vp衣殼多肽具有seq?id?no:2的序列,其中seq?id?no:2的殘基581至589(x1x2x3x4x5x6x7x8x9)對(duì)應(yīng)于所述581至589區(qū)。在一些方面,所述vp衣殼多肽能夠組裝成重組病毒衣殼。在一些方面,與seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6、seq?id?no:7和seq?id?no:8中的每一個(gè)相比,所述vp衣殼多肽包含至少一個(gè)氨基酸取代。在一些方面,所述581至589區(qū)在ph?7.4下包含凈正電荷。
28、在一些方面,相對(duì)于seq?id?no:1的野生型vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽還包含581至589區(qū)之外的一個(gè)或多個(gè)突變。在一些方面,與包含seq?id?no:1的肽的野生型aav衣殼相比,所述581至589區(qū)賦予由所述vp衣殼多肽組裝而成的重組病毒衣殼改善的穩(wěn)定性。在一些方面,與seq?id?no:1的野生型vp衣殼多肽相比,所述581至589區(qū)在施用于受試者時(shí)賦予更低的毒性。在一些方面,相對(duì)于seq?id?no:1的野生型vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽還包含581至589區(qū)之外有助于減少中和抗體的產(chǎn)生的一個(gè)或多個(gè)突變。在一些方面,相對(duì)于seq?id?no:1的野生型vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽還包含581至589區(qū)之外提高可制造性的一個(gè)或多個(gè)突變。
29、在各個(gè)方面,本公開提供了一種重組病毒腺相關(guān)病毒(raav)衣殼,其包含如本文所述的vp衣殼多肽,其中所述raav衣殼優(yōu)先靶向視網(wǎng)膜組織。
30、在一些方面,所述raav還包含含有581至589區(qū)的vp2多肽和含有581至589區(qū)的vp3多肽。
31、在各個(gè)方面,本公開提供了一種重組腺相關(guān)病毒(raav),其包含如本文所述的組裝成重組病毒衣殼的vp衣殼多肽和由所述重組病毒衣殼包封的有效載荷。
32、在一些方面,所述raav優(yōu)先靶向視網(wǎng)膜組織。在一些方面,所述raav還包含含有581至589區(qū)的vp2多肽和含有581至589區(qū)的vp3多肽在一些方面,所述有效載荷編碼治療性多核苷酸或治療性肽。在一些方面,所述有效載荷編碼向?qū)na、trna、阻抑trna、sirna、mirna、mrna、shrna、環(huán)狀rna或反義寡核苷酸(aso)、核糖酶、dna酶、適體或它們的任何組合。在一些方面,所述向?qū)na是crispr/cas向?qū)na或adar向?qū)na。在一些方面,所述有效載荷編碼crispr/cas系統(tǒng)的組分、作用于rna的腺苷脫氨酶(adar)酶、轉(zhuǎn)錄激活物或轉(zhuǎn)錄阻遏物。
33、在各個(gè)方面,本公開提供了一種藥物組合物,其包含如本文所述的vp衣殼多肽、如本文所述的raav衣殼或如本文所述的raav。
34、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜組織的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含581至589區(qū),所述區(qū)包含相對(duì)于seq?id?no:9的至少一個(gè)取代,并且其中所述581至589區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)堿性氨基酸殘基。
35、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜組織的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:14–seq?id?no:2013或seq?id?no:2514–seq?id?no:4513中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列。
36、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜組織的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含如本文所述的vp衣殼多肽。
37、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜組織的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含581至589區(qū),所述區(qū)包含相對(duì)于seq?id?no:9的至少一個(gè)取代,并且其中所述581至589區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)堿性氨基酸殘基;以及(ii)將所述有效載荷遞送至所述視網(wǎng)膜組織。
38、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜組織的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含與seq?id?no:14–seq?idno:2013或seq?id?no:2514–seq?id?no:4513中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的581至589區(qū);以及(ii)將所述有效載荷遞送至所述視網(wǎng)膜組織。
39、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜組織的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含如本文所述的vp衣殼多肽;以及(ii)將所述有效載荷遞送至所述視網(wǎng)膜組織。
40、在一些方面,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用來(lái)施用所述raav。在一些方面,所述方法包括通過(guò)視網(wǎng)膜下注射、局部粘膜施用或全身施用來(lái)施用所述raav。在一些方面,所述方法還包括表達(dá)由所述有效載荷編碼的治療性多肽或治療性多核苷酸。在一些方面,所述方法還包括在表達(dá)所述有效載荷時(shí)產(chǎn)生治療效果。在一些方面,在施用1x105至5x1014個(gè)raav后產(chǎn)生治療效果。在一些方面,所述方法包括施用足以在受試者中產(chǎn)生治療效果而不產(chǎn)生毒性的量的raav。
41、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含581至589區(qū),所述區(qū)包含相對(duì)于seqid?no:9的至少一個(gè)取代,并且其中所述581至589區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)堿性氨基酸殘基。
42、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),所述區(qū)與seq?id?no:14–seq?id?no:2013或seq?id?no:2514–seq?idno:4513中任一個(gè)具有至少85%序列同一性。
43、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含如本文所述的vp衣殼多肽。
44、在一些方面,所述方法還包括在所述受試者的視網(wǎng)膜組織中表達(dá)所述有效載荷。在一些方面,所述方法還包括在所述受試者中產(chǎn)生治療效果。
45、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含581至589區(qū),所述區(qū)包含相對(duì)于seq?id?no:9的至少一個(gè)取代,并且其中所述581至589區(qū)包含一個(gè)或多個(gè)堿性氨基酸殘基;以及(ii)在所述受試者的視網(wǎng)膜組織中表達(dá)所述有效載荷,從而治療所述受試者的所述疾患。
46、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:14–seq?id?no:2013或seq?id?no:2514–seqid?no:4513中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列;以及(ii)在所述受試者的視網(wǎng)膜組織中表達(dá)所述有效載荷,從而治療所述受試者的所述疾患。
47、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含如本文所述的vp衣殼多肽;以及(ii)在所述受試者的視網(wǎng)膜組織中表達(dá)所述有效載荷,從而治療所述受試者的所述疾患。
48、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含如本文所述的vp衣殼多肽;(ii)將所述有效載荷遞送至所述受試者的視網(wǎng)膜組織;以及(iii)在所述視網(wǎng)膜組織中產(chǎn)生治療效果,從而治療所述疾患。
49、在一些方面,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用來(lái)施用所述raav。在一些方面,所述方法包括通過(guò)視網(wǎng)膜下注射、局部粘膜施用或全身施用來(lái)施用所述raav。在一些方面,所述疾患是眼部疾患。在一些方面,所述眼部疾患是色盲、黃斑變性、白內(nèi)障、無(wú)脈絡(luò)膜癥、青光眼、視神經(jīng)病變、馬方綜合征(marfan?syndrome)、近視、息肉狀脈絡(luò)膜血管病變、視網(wǎng)膜色素變性、斯塔加特病(stargardt?disease)、烏舍綜合征(usher?syndrome)、萊伯氏先天性黑蒙癥、萊伯氏遺傳性視神經(jīng)病變、葡萄膜黑色素瘤或x連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥。在一些方面,所述眼部疾患是斯塔加特病。
50、在一些方面,所述方法還包括以高于包含seq?id?no:1的肽的野生型aav5衣殼的組織向性將所述raav遞送至視網(wǎng)膜組織。在一些方面,所述方法還包括以高于光感受器組織的組織向性將所述raav遞送至視網(wǎng)膜組織。在一些方面,所述方法包括以包含seq?idno:1的肽的野生型aav5衣殼的至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少75倍、至少100倍、至少200倍、至少500倍或至少1000倍的組織向性將所述raav遞送至視網(wǎng)膜組織。在一些方面,所述方法包括施用1x105至5x1014個(gè)raav。
51、在一些方面,所述有效載荷編碼治療性蛋白質(zhì)、治療性多核苷酸、向?qū)na、trna、阻抑trna、sirna、mirna、mrna、shrna、環(huán)狀rna、反義寡核苷酸(aso)、核糖酶、dna酶、適體或它們的任何組合。在一些方面,所述向?qū)na是crispr/cas向?qū)na或adar向?qū)na。在一些方面,所述治療性蛋白質(zhì)選自由以下組成的組:cngb3、nos2a、cfh、cf、c2、c3、cfb、htra1/loc、mmp-9、timp-3、slc16a8、gemin4、cyp51a1、ric1、tapt1、taf1a、wdr87、ape1、mip、cx50、gja3、gja8、cryaa、crybb2、prx、polr3b、xrcc1、znf350、epha2、rep1、calm2、mpp-7、optineurin、lox1、cyp1b1、cav1/2、myoc、pitx2、foxc1、pax6、ltbp2、復(fù)合物i、nd、opa1、rpe65、fbn1、tgfbr2、mthfr、mtr、mtrr、hgf、c-met、umodl1、mmp-1/2、cbs、igf-1、uhrf1bp1l、ptprr、ppfia2、p4ha2、serping1、pedf、arms2-htra1、fgd6、abcg1、loc387715、cetp、nrl、rdh12、prph2(rds)、rho、rpgr、snrnp200、nr2e3、impdh1、crx、hk1、impdh2、prpf3、agbl5、abca1、abca4、crb1、ush2a、nrp1、nd4、rlbp1、pten、bap1、gnaq、gna11、ddef1、sf3b1、eif1ax、cdkn2a、p14arf、herc2/oca2、vegf和rs1。在一些方面,所述治療性多核苷酸靶向編碼選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)的mrna:cngb3、nos2a、cfh、cf、c2、c3、cfb、htra1/loc、mmp-9、timp-3、slc16a8、gemin4、cyp51a1、ric1、tapt1、taf1a、wdr87、ape1、mip、cx50、gja3、gja8、cryaa、crybb2、prx、polr3b、xrcc1、znf350、epha2、rep1、calm2、mpp-7、optineurin、lox1、cyp1b1、cav1/2、myoc、pitx2、foxc1、pax6、ltbp2、復(fù)合物i、nd、opa1、rpe65、fbn1、tgfbr2、mthfr、mtr、mtrr、hgf、c-met、umodl1、mmp-1/2、cbs、igf-1、uhrf1bp1l、ptprr、ppfia2、p4ha2、serping1、pedf、arms2-htra1、fgd6、abcg1、loc387715、cetp、nrl、rdh12、prph2(rds)、rho、rpgr、snrnp200、nr2e3、impdh1、crx、hk1、impdh2、prpf3、agbl5、abca1、abca4、crb1、ush2a、nrp1、nd4、rlbp1、pten、bap1、gnaq、gna11、ddef1、sf3b1、eif1ax、cdkn2a、p14arf、herc2/oca2、vegf或rs1。在一些方面,所述有效載荷編碼靶向abca1、abca4或crb1的治療性多核苷酸或編碼abca1、abca4或crb1的轉(zhuǎn)基因。在一些方面,所述有效載荷編碼crispr/cas系統(tǒng)的組分、作用于rna的腺苷脫氨酶(adar)酶、轉(zhuǎn)錄激活物或轉(zhuǎn)錄阻遏物。在一些方面,所述crispr/cas系統(tǒng)的組分包含cas3、cas8、cas10、cas9、cas4、cas12、cas13、向?qū)na或它們的組合。在一些方面,所述adar酶是adar1或adar2。在一些方面,所述轉(zhuǎn)錄激活物是vp64。在一些方面,所述轉(zhuǎn)錄阻遏物是krab。
52、在一些方面,所述方法還包括表達(dá)由所述有效載荷編碼的治療性多肽或治療性多核苷酸。在一些方面,所述方法包括在視網(wǎng)膜組織中以與包含seq?id?no:1的肽的野生型aav5衣殼相比更高的水平表達(dá)治療性多肽或治療性多核苷酸。在一些方面,所述方法包括在視網(wǎng)膜組織中以與野生型aav5衣殼相比至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少75倍、至少100倍、至少200倍、至少500倍或至少1000倍的水平表達(dá)治療性多肽或治療性多核苷酸。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用相當(dāng)數(shù)量的包含seq?id?no:1的vp衣殼多肽的野生型aav5衣殼時(shí)所產(chǎn)生的毒性更低的毒性。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用足以將相當(dāng)數(shù)量的有效載荷遞送至視網(wǎng)膜組織的數(shù)量的包含seq?id?no:1的vp衣殼多肽的野生型aav5衣殼時(shí)所產(chǎn)生的毒性更低的毒性。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用相當(dāng)數(shù)量的包含seqid?no:1的vp衣殼多肽的野生型aav5衣殼時(shí)所產(chǎn)生的中和抗體濃度更低的中和抗體濃度。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用相當(dāng)數(shù)量的野生型aav2衣殼時(shí)所產(chǎn)生的中和抗體濃度更低的中和抗體濃度。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用相當(dāng)數(shù)量的野生型aav8衣殼時(shí)所產(chǎn)生的中和抗體濃度更低的中和抗體濃度。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用相當(dāng)數(shù)量的野生型aav9衣殼時(shí)所產(chǎn)生的中和抗體濃度更低的中和抗體濃度。在一些方面,所述方法包括在所述受試者中產(chǎn)生比施用足以將相當(dāng)數(shù)量的有效載荷遞送至視網(wǎng)膜組織的數(shù)量的包含seq?id?no:1的vp衣殼多肽的野生型aav5衣殼時(shí)所產(chǎn)生的中和抗體濃度更低的中和抗體濃度。
53、在各個(gè)方面,本公開提供了如本文所述的raav衣殼、如本文所述的raav或如本文所述的藥物組合物,其用作藥物。
54、在各個(gè)方面,本公開提供了如本文所述的raav衣殼、如本文所述的raav或如本文所述的藥物組合物,其用于治療眼部疾患的方法中。
55、在一些方面,所述眼部疾患是色盲、黃斑變性、白內(nèi)障、無(wú)脈絡(luò)膜癥、青光眼、視神經(jīng)病變、馬方綜合征、近視、息肉狀脈絡(luò)膜血管病變、視網(wǎng)膜色素變性、斯塔加特病、烏舍綜合征、萊伯氏先天性黑蒙癥、萊伯氏遺傳性視神經(jīng)病變、葡萄膜黑色素瘤或x連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥。在一些方面,所述眼部疾患是斯塔加特病。
56、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:2014–seq?idno:2513中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列。
57、在一些方面,所述581至589區(qū)包含seq?id?no:2014–seq?id?no:2513中任一個(gè)的序列。
58、在各個(gè)方面,本公開提供了一種病毒蛋白(vp)衣殼多肽,其包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:4514–seq?idno:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列。
59、在一些方面,所述581至589區(qū)包含seq?id?no:4514–seq?idno:5013中任一個(gè)的序列。
60、在各個(gè)方面,本公開提供了一種重組病毒腺相關(guān)病毒(raav)衣殼,其包含如本文所述的vp衣殼多肽,其中所述raav衣殼優(yōu)先靶向視網(wǎng)膜色素上皮組織。
61、在各個(gè)方面,本公開提供了一種重組病毒腺相關(guān)病毒(raav)衣殼,其包含如本文所述的vp衣殼多肽,其中所述raav衣殼優(yōu)先靶向脈絡(luò)膜組織。
62、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜色素上皮組織的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),所述區(qū)與seq?id?no:2014–seq?idno:2513或seq?id?no:4514–seq?id?no:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性。
63、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜色素上皮組織的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),所述區(qū)與seq?id?no:2014–seq?idno:2513或seq?id?no:4514–seq?id?no:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性。
64、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的脈絡(luò)膜組織的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含與seq?id?no:2014–seqid?no:2513或seq?id?no:4514–seq?id?no:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的581至589區(qū);以及(ii)將所述有效載荷遞送至所述脈絡(luò)膜組織。
65、在各個(gè)方面,本公開提供了一種將有效載荷遞送至受試者的視網(wǎng)膜色素上皮組織的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封所述有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含與seq?id?no:2014–seq?id?no:2513或seq?id?no:4514–seq?id?no:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的581至589區(qū);以及(ii)將所述有效載荷遞送至所述視網(wǎng)膜色素上皮組織。
66、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括通過(guò)玻璃體內(nèi)施用將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),所述區(qū)與seq?id?no:2014–seq?id?no:2513或seq?id?no:4514–seq?idno:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性。
67、在各個(gè)方面,本公開提供了一種治療受試者的疾患的方法,所述方法包括:(i)將重組腺相關(guān)病毒(raav)施用于所述受試者,其中所述raav包封有效載荷,并且其中所述raav包含vp衣殼多肽,所述vp衣殼多肽包含對(duì)應(yīng)于aav5?vp1多肽的殘基581至589的581至589區(qū),其中所述581至589區(qū)包含與seq?id?no:2014–seq?id?no:2513或seq?id?no:4514–seq?id?no:5013中任一個(gè)具有至少85%序列同一性的序列;以及(ii)在所述受試者的視網(wǎng)膜色素上皮組織中表達(dá)所述有效載荷,從而治療所述受試者的所述疾患。
68、通過(guò)引用并入
69、本文引用的所有參考文獻(xiàn)均通過(guò)引用并入,其引用程度如同每個(gè)單獨(dú)的出版物、數(shù)據(jù)庫(kù)條目(例如,genbank序列或geneid條目)、專利申請(qǐng)或?qū)@粚iT且單獨(dú)地指示出于所有目的通過(guò)引用整體并入一般。根據(jù)37c.f.r.§1.57(b)(1),申請(qǐng)人旨在通過(guò)引用并入本說(shuō)明以涉及每個(gè)單獨(dú)的出版物、數(shù)據(jù)庫(kù)條目(例如,genbank序列或geneid條目)、專利申請(qǐng)或?qū)@?,所述文獻(xiàn)中的每一個(gè)根據(jù)37c.f.r.§1.57(b)(2)明確鑒定,即使此類引用不與通過(guò)引用并入的專有說(shuō)明緊密相鄰。在說(shuō)明書中包含通過(guò)引用并入的專有說(shuō)明(如果有的話)并不以任何方式削弱通過(guò)引用并入的此一般性聲明。本文引用參考文獻(xiàn)并非意圖承認(rèn)所述參考文獻(xiàn)是相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù),也不構(gòu)成對(duì)這些出版物或文獻(xiàn)的內(nèi)容或日期的任何承認(rèn)。