本發(fā)明涉及人分泌性scd14的診斷，特別涉及抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、人cd14蛋白分為膜型(mcd14)和分泌型(scd1)兩類。mcd14在巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中表達(dá)，其主要功能是作為細(xì)菌脂多糖(lps)和其他病原體相關(guān)分子的共受體。分泌型scd14也分為高分子量(49kd-55kd)scd14和低分子量(11kd-15kd)scd14-st兩類。高分子量的scd14雖然廣泛存在于敗血癥，艾滋及紅斑狼瘡等病人的血液中，但不是一個(gè)特異性的分子標(biāo)記。scd14-st由高分子量的scd14的n端組成，并且c端氨基酸被大量刪除。因此scd14-st和高分子量的scd14有著不同的免疫源性，可以被不同的抗體進(jìn)行區(qū)分。研究發(fā)現(xiàn)，scd14-st可以作為敗血癥特異性的生物學(xué)指標(biāo)，有潛在的生物學(xué)價(jià)值，從而引起臨床高度重視。治療敗血癥的共識(shí)是早期識(shí)別并給予有效的抗感染治療。因此，開發(fā)高靈敏、特異性識(shí)別scd14-st抗體對敗血癥早期診斷具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對以上現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體，通過利用兔單b細(xì)胞抗體開發(fā)技術(shù)，從scd14-st免疫的兔外周血中，分離scd14-st特異性的單b細(xì)胞，通過pcr擴(kuò)增及測序分析，獲得多個(gè)特異性識(shí)別抗scd14-st蛋白的抗體。本發(fā)明篩選出的單克隆抗體，相比于采用傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)篩選的抗體和兔多抗而言，親和力和特異性更高；增加了抗scd14-st蛋白的抗體的多樣性，為開發(fā)高靈敏度的scd14-st?elisa診斷試劑盒奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。具體通過以下技術(shù)實(shí)現(xiàn)。

2、一種抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體，包括ab1、ab2、ab3、ab4、ab5、ab6的任一種；

3、ab1的重鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?idno.1-3所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，ab1的輕鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.4-6所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；

4、ab2的重鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1和cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.7-8所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，cdr2的氨基酸序列為stg或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；ab2的輕鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?idno.9-11所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；

5、ab1的重鏈可變區(qū)cdr3與ab2的重鏈可變區(qū)的cdr3的氨基酸序列相同。

6、ab3的重鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1和cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.12-13所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，cdr2的氨基酸序列為ssd或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；ab3的輕鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?idno.14-16所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；

7、ab4的重鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1的氨基酸序列如seq?id?no.17所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，cdr2的氨基酸序列為dsg或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，cdr3的氨基酸序列為gdl或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；ab4的輕鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.18-20所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；

8、ab1的輕鏈可變區(qū)的cdr2與ab4的輕鏈可變區(qū)的cdr2的氨基酸序列相同。

9、ab5的重鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?idno.21-23所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，ab5的輕鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.24-26所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列；

10、ab6的重鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?idno.27-29所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列，ab6的輕鏈可變區(qū)的3個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列如seq?id?no.30-32所示或?qū)ζ溥M(jìn)行保守修飾的氨基酸序列。

11、ab5的重鏈可變區(qū)的cdr3與ab6的重鏈可變區(qū)的cdr3的氨基酸序列相同。ab5的輕鏈可變區(qū)的cdr3與ab6的輕鏈可變區(qū)的cdr3的氨基酸序列相同。

12、優(yōu)選地地，所述抗體是兔單克隆或多克隆抗體或其片段。

13、優(yōu)選地地，所述抗體是人源化抗體或嵌合抗體。

14、優(yōu)選地地，所述cdr之間具有47.4％-100％的同源性。

15、優(yōu)選地，所述抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體，ab1的重鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.33-36所示，ab1的輕鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?idno.37-40所示；

16、ab2的重鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.41-44所示，ab2的輕鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.45-48所示；

17、ab3的重鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.49-52所示，ab3的輕鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.53-56所示；

18、ab4的重鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.57-60所示，ab4的輕鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.61-64所示；

19、ab5的重鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.65-68所示，ab5的輕鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.69-72所示；

20、ab6的重鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.73-76所示，ab6的輕鏈可變區(qū)的4個(gè)骨架區(qū)fr1、fr2、fr3和fr4的氨基酸序列如seq?id?no.77-80所示。

21、優(yōu)選地，所述抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體，所述ab1的重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.81所示，所述ab1的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.82所示；

22、所述ab2的重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.83所示，所述ab2的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.84所示；

23、所述ab3的重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.85所示，所述ab3的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.86所示；

24、所述ab4的重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.87所示；所述ab4的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.88所示；

25、所述ab5的重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.89所示，所述ab5的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.90所示；

26、所述ab6的重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.91所示，所述ab6的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.92所示。

27、本技術(shù)中的“保守修飾”是指基本不影響原序列抗體特性的氨基酸修飾，包括氨基酸的突變、插入和缺失，具體修飾方式可以是本領(lǐng)域已知的修飾手段，如定點(diǎn)突變或pcr介導(dǎo)的誘變等。氨基酸的保守取代是指其氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基取代。氨基酸殘基家族為本領(lǐng)域公知定義，包括具有堿性側(cè)鏈的氨基酸(如賴氨酸，精氨酸，組氨酸)，酸性側(cè)鏈氨基酸(如天冬氨酸，谷氨酸)，不帶電荷的極性側(cè)鏈氨基酸(如甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，絲氨酸，蘇氨酸，酪氨酸，半胱氨酸，色氨酸)，非極性側(cè)鏈氨基酸(如丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸)，β支鏈側(cè)鏈氨基酸(如蘇氨酸，纈氨酸，異亮氨酸)和芳香族側(cè)鏈(如酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，組氨酸)。因此，cdr區(qū)的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被來自相同側(cè)鏈家族的其他氨基酸殘基代替，并進(jìn)行檢測確保其保留原序列的功能。

28、本技術(shù)中的“保守修飾的變體”包括多肽序列的個(gè)別氨基酸被功能相似氨基酸取代、缺失或添加，還包括多態(tài)性變體、種間同系物及其等位基因。以下各組內(nèi)氨基酸可以相互取代：(1)丙氨酸(a)，甘氨酸(g)；(2)天冬氨酸(d)，谷氨酸(e)；(3)天冬酰胺(n)，谷氨酰胺(q)；(4)精氨酸(r)，賴氨酸(k)；(5)異亮氨酸(i)，亮氨酸(l)，蛋氨酸(m)，纈氨酸(v)；(6)苯丙氨酸(f)，酪氨酸(y)，色氨酸(w)；(7)絲氨酸(s)，蘇氨酸(t)；(8)半胱氨酸(c)，蛋氨酸(m)。本技術(shù)中“保守序列修飾”指基本上不影響或改變其結(jié)合能力的氨基酸修飾。

29、優(yōu)選地，所述抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體，還包括共價(jià)或非共價(jià)連接的偶聯(lián)物。

30、優(yōu)選地，所述fr之間具有55.6％-100％的同源性。

31、更優(yōu)選地，所述抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體，所述偶聯(lián)物包括酶、熒光蛋白、熒光團(tuán)、生物素或鏈霉親和素。

32、更優(yōu)選地，所述酶包括hrp。

33、本發(fā)明還提供了上述的抗人scd14-st蛋白的單克隆抗體在制備人scd14-st蛋白的檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述檢測產(chǎn)品為檢測試紙條、檢測試劑盒等。

34、一種人scd14-st蛋白的檢測產(chǎn)品，包括上述任一項(xiàng)的抗人scd14-st單克隆抗體

35、優(yōu)選地，所述檢測產(chǎn)品為檢測試紙條或檢測試劑盒。

36、更優(yōu)選地，所述檢測試紙條為膠體金試紙條或elisa試紙條；所述檢測試劑盒為膠體金檢測試劑盒、elisa檢測試劑盒、免疫比濁檢測試劑盒、免疫層析試劑盒、磁顆粒檢測試劑盒、化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒、免疫熒光檢測試劑盒或放射免疫檢測試劑盒。

37、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益之處在于：本發(fā)明針對人scd14-st蛋白，研究獲得了一種兔抗人單克隆抗體，利用這種抗體或相應(yīng)的檢測試劑盒具有更高的特異性、親和力和靈敏度，能精準(zhǔn)定量地檢測人scd14-st蛋白；能夠在診斷和預(yù)后檢測，以及在免疫學(xué)領(lǐng)域的人scd14-st蛋白動(dòng)力學(xué)作用機(jī)制研究中發(fā)揮重要作用。