本發(fā)明涉及合成磷脂領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)制備高純度鞘磷脂和甘油磷酸膽堿的方法。

背景技術(shù)：

1、蛋黃卵磷脂中含有：磷脂酰膽堿(pc)、溶血磷脂酰膽堿(lpc)、磷脂酰乙醇胺(pe)、溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)、鞘磷脂(sm)等成分，目前，蛋黃卵磷脂和蛋黃pc的制備工藝已經(jīng)成熟，且作為乳化劑用于制備營(yíng)養(yǎng)型和載藥脂肪乳。其他磷脂如天然sm具有重要的生理學(xué)功能，sm及其代謝產(chǎn)物參與機(jī)體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等生理活動(dòng)；同時(shí)sm也是制備硫酸長(zhǎng)春新堿脂質(zhì)體注射劑的重要組分。此外，磷脂水解的主要成分——l-α-甘油磷酸膽堿(gpc)在國(guó)外用于治療腦缺血型中風(fēng)、阿爾茲海默癥等疾病。因此，開(kāi)發(fā)蛋黃卵磷脂深度加工技術(shù)有助于充分利用磷脂各種成分，并開(kāi)拓高附加值產(chǎn)品。

2、現(xiàn)有關(guān)于高純度sm的制備技術(shù)有：現(xiàn)有技術(shù)1(cn114989212a)通過(guò)柱層析和重結(jié)晶的方法得到高純度的sm，但卵磷脂中sm含量?jī)H為3％，單獨(dú)制備sm導(dǎo)致生產(chǎn)成本增加，并且會(huì)造成大量的浪費(fèi)，難以大規(guī)模應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中。現(xiàn)有技術(shù)2(cn114644650a)需通過(guò)兩次柱層析分離，獲取高純度的sm和蛋黃卵磷脂，但操作較為繁瑣。由此可見(jiàn)，由于sm和pc的極性接近，現(xiàn)有技術(shù)難以通過(guò)單次分離得到高純度產(chǎn)物(≥98％)。因此針對(duì)上述技術(shù)難題，開(kāi)發(fā)新型的sm制備技術(shù)提高分離效果和降低生產(chǎn)成本，具有重要應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于，解決現(xiàn)有天然鞘磷脂提取純化過(guò)程存在的分離難度大、成本高等難題。

2、為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種同時(shí)制備高純度鞘磷脂和甘油磷酸膽堿的方法，其特征在于，包括如下步驟：

4、a、向磷脂混合物中加入降解劑進(jìn)行降解反應(yīng)，獲得中間體混合物1；

5、b、將所述中間體混合物1進(jìn)行萃取分離，有機(jī)相獲得精制混合物1，水相獲得精制混合物2；

6、c、將所述精制混合物1進(jìn)一步分離，獲得下層絮狀物；

7、d、將所述下層絮狀物進(jìn)行柱層析純化，得到鞘磷脂；

8、e、將所述精制混合物2進(jìn)行吸附、脫鹽、重結(jié)晶處理，得到甘油磷酸膽堿。

9、本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)制備高純度鞘磷脂和甘油磷酸膽堿的方法，包括以下步驟：1)向磷脂混合物中加入降解劑降解磷脂，得到鞘磷脂和甘油磷酸膽堿混合物，通過(guò)精制方法分離得到粗產(chǎn)物；2)經(jīng)過(guò)柱層析得到純度高于98％的鞘磷脂；3)通過(guò)精制方法得到純度高于95％的甘油磷酸膽堿；4)在經(jīng)過(guò)干燥得到符合藥用標(biāo)準(zhǔn)的磷脂。本發(fā)明使用溶劑均可回收循環(huán)使用，對(duì)環(huán)境友好，反應(yīng)條件溫和，選擇性好，對(duì)原料純度要求低，且生產(chǎn)成本較低，利于產(chǎn)業(yè)化大量生產(chǎn)。

10、優(yōu)選的，還包括如下步驟：

11、f、將所述鞘磷脂和所述甘油磷酸膽堿分別進(jìn)行干燥，同時(shí)獲得鞘磷脂產(chǎn)品和甘油磷酸膽堿產(chǎn)品。

12、優(yōu)選的，步驟a中，所述降解反應(yīng)的反應(yīng)條件包括：20～60℃下持續(xù)攪拌，反應(yīng)時(shí)間為0.5～8小時(shí)；步驟b中，所述萃取分離包括：在所述中間體混合物1中加入有機(jī)溶劑和水?dāng)嚢杌旌?，靜置分層后分離，水相繼續(xù)加入有機(jī)溶劑重復(fù)操作多次，獲得所述精制混合物2，合并多次萃取分離的有機(jī)相，獲得所述精制混合物1；步驟c中，所述進(jìn)一步分離包括：靜置待絮狀物沉淀底部，并傾倒上層油狀物，獲得所述下層絮狀物；步驟d中，所述柱層析純化包括硅膠柱層析分離，所用復(fù)合洗脫劑包括鹵代烷烴-低級(jí)醇-水混合；步驟e中，所述吸附包括：在所述精制混合物2中加入吸附劑，攪拌混合均勻，之后過(guò)濾分離。

13、精制混合物1中，實(shí)際是包含著不溶于水的油分和固體絮狀物的混合物質(zhì)，靜置一段較長(zhǎng)的時(shí)間后，油層和固體絮狀物就會(huì)慢慢分離，絮狀物沉淀到底部。

14、優(yōu)選的，步驟a中，所述降解劑的用量與所述磷脂混合物的質(zhì)量比為1％～20％；步驟b中，每次萃取分離操作時(shí)，加入所述有機(jī)溶劑與水的體積比為1～3:1；步驟c中，所述進(jìn)一步分離的靜置時(shí)間為0.5～24小時(shí)；步驟d中，所述復(fù)合洗脫劑中，鹵代烷烴、低級(jí)醇、水的體積比為300～100：100：5；步驟e中，所述吸附劑的用量與所述磷脂混合物的質(zhì)量比1:10～100。

15、優(yōu)選的，步驟a中，所述磷脂混合物包括蛋黃磷脂提取混合物，所述降解劑包括甲醇鈉、乙醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉、磷脂酶、脂肪酶中的一種或多種；步驟b中，所述有機(jī)溶劑包括丁醇、戊醇、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、己烷、辛烷、石油醚、碳酸二甲酯中的一種或多種；步驟c中，還包括將所述下層絮狀物用所述復(fù)合洗脫劑溶解；步驟d中，所述復(fù)合洗脫劑中，鹵代烷烴包括氯仿、二氯甲烷中的一種或多種，低級(jí)醇包括甲醇、乙醇、異丙醇中的一種或多種；步驟e中，所述吸附劑包括硅藻土、氧化鋁、硅膠、活性碳中的一種或多種。

16、優(yōu)選的，步驟a中，所述降解反應(yīng)結(jié)束后，還包括去除所述降解劑的操作，獲得所述中間體混合物1；步驟b中，重復(fù)操作的次數(shù)為2～3次；步驟e中，所述脫鹽包括：在吸附后的所述精制混合物2中加入陰陽(yáng)離子樹(shù)脂，攪拌混合均勻，之后過(guò)濾分離。

17、降解反應(yīng)結(jié)束后，應(yīng)進(jìn)行去除降解劑的步驟。當(dāng)降解劑是無(wú)機(jī)鹽的時(shí)候，加入鹽酸、硝酸、硫酸、醋酸、三氟乙酸等調(diào)節(jié)ph至中性。當(dāng)降解劑是酶的時(shí)候，需要通過(guò)過(guò)濾或離心除去酶。

18、優(yōu)選的，步驟a中，所述磷脂混合物反應(yīng)前在溶液中溶解；步驟c中，所述進(jìn)一步分離進(jìn)行前，還包括先濃縮所述精制混合物1；步驟d中，所述柱層析純化進(jìn)行前，還包括先用所述復(fù)合洗脫劑溶解所述精制混合物1；步驟e中，所述重結(jié)晶包括：在脫鹽后的所述精制混合物2溶于重結(jié)晶試劑，降溫并加入晶種析晶后洗滌。

19、優(yōu)選的，步驟a中，所述溶液包括甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇、乙醚、正己烷、石油醚、水的一種或多種；步驟c中，所述精制混合物1濃縮至溶劑蒸干；步驟e中，所述重結(jié)晶試劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、水中的一種或多種，采用加熱回流溶解，溶解后降溫至-20～20℃析晶。

20、一種如上述同時(shí)制備高純度鞘磷脂和甘油磷酸膽堿的方法獲得的鞘磷脂產(chǎn)品。

21、一種如上述同時(shí)制備高純度鞘磷脂和甘油磷酸膽堿的方法獲得的甘油磷酸膽堿產(chǎn)品。

22、制備得到的合成磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺純度不低于98％，且氯仿或二氯甲烷殘留不高于0.006％，碳酸二甲酯殘留不高于0.5％，醇類(lèi)殘留不高于0.5％。

23、與現(xiàn)有技術(shù)相比較，實(shí)施本發(fā)明，具有如下有益效果：

24、相比于中國(guó)專(zhuān)利cn114644650a和cn114989212a，通過(guò)本專(zhuān)利的技術(shù)方案制備的高純度sm，避免了現(xiàn)有技術(shù)二次柱層析或其他精制操作，簡(jiǎn)化了制備步驟，顯著地降低了溶劑消耗量和制備時(shí)間，更合適產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本專(zhuān)利首次結(jié)合酯交換法和柱層析方法，實(shí)現(xiàn)高效富集sm的技術(shù)，同時(shí)充分地利用原料制備了高純度l-α-甘油磷酸膽堿(gpc)的產(chǎn)品。

25、本發(fā)明使用溶劑均可回收循環(huán)使用，對(duì)環(huán)境友好，反應(yīng)條件溫和，選擇性好，對(duì)原料純度要求低，且生產(chǎn)成本較低，利于產(chǎn)業(yè)化大量生產(chǎn)。通過(guò)本工藝路線，可同時(shí)制備純度不低于98％的sm和純度不低于95％的gpc，且氯仿或二氯甲烷殘留不高于0.006％，碳酸二甲酯殘留不高于0.5％，醇類(lèi)殘留不高于0.5％。