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      一種SIRT6永生化hUCMSCs及其構(gòu)建方法、SIRT6外囊泡及其提取方法與流程

      文檔序號:39618134發(fā)布日期:2024-10-11 13:32閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法,其特征在于,包括以下步驟:hucmscs的提取與培養(yǎng)、永生化hucmscs的構(gòu)建、sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建;

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法,其特征在于,所述永生化hucmscs的構(gòu)建方法包括以下步驟:將hucmscs接種至培養(yǎng)板,依次加入tert慢病毒、完全培養(yǎng)基、陽離子聚合物,培養(yǎng)48±2h;然后更換含有嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基進行篩選與擴增,獲得永生化hucmscs。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法,其特征在于,所述sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法包括以下步驟:將永生化hucmscs接種至培養(yǎng)板,依次加入sirt6慢病毒、完全培養(yǎng)基、陽離子聚合物,培養(yǎng)48±2h;然后更換含有滅瘟素s的完全培養(yǎng)基進行篩選與擴增,傳代5代后不再添加抗生素;當細胞生長至匯合度80%?以上時,按照1:5比例進行傳代培養(yǎng),獲得sirt6永生化hucmscs。

      4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法,其特征在于,所述hucmscs和永生化hucmscs的接種密度均為3.5×105個/孔;所述完全培養(yǎng)基為αmem?完全培養(yǎng)基;所述含有嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基中嘌呤霉素的濃度為3-5μg/ml,所述含有滅瘟素s的完全培養(yǎng)基中滅瘟素s的濃度為1.5-2.5μg/ml。

      5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法,其特征在于,所述永生化hucmscs和sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建步驟中,加入陽離子聚合物的同時補充完全培養(yǎng)基,使得陽離子聚合物的終濃度為5-7μg/ml。

      6.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法,其特征在于,所述tert慢病毒的滴度為(7-9)×108tu/ml,所述tert慢病毒、完全培養(yǎng)基的體積比為1:(20-25);所述滅瘟素s的滴度為(0.8-1.5)×109tu/ml,所述tert慢病毒、完全培養(yǎng)基的體積比為1:(33-38)。

      7.一種利用權(quán)利要求1-6中任一項所述的sirt6永生化hucmscs的構(gòu)建方法獲得的sirt6永生化hucmscs。

      8.一種sirt6外囊泡,其特征在于,對權(quán)利要求7所述的sirt6永生化hucmscs進行提取獲得。

      9.一種如權(quán)利要求8所述的sirt6外囊泡的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:

      10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的sirt6外囊泡的提取方法,其特征在于,所述離心步驟具體為:


      技術(shù)總結(jié)
      本申請涉及細胞工程技術(shù)領(lǐng)域,具體公開了一種SIRT6永生化hUCMSCs及其構(gòu)建方法、SIRT6外囊泡及其提取方法。本申請?zhí)峁┑腟IRT6永生化hUCMSCs的構(gòu)建方法,包括以下步驟:hUCMSCs的提取與培養(yǎng)、永生化hUCMSCs的構(gòu)建、SIRT6永生化hUCMSCs的構(gòu)建;永生化hUCMSCs的構(gòu)建采用的永生化基因為TERT基因,SIRT6永生化hUCMSCs的構(gòu)建采用的基因為SIRT6。本申請通過兩次慢病毒感染,獲得一種三項分化能力好、增殖能力高于hUCMSCs的SIRT6永生化hUCMSCs,與原代外囊泡相比,SIRT6永生化hUCMSCs提取的SIRT6外囊泡的SIRT6蛋白表達量顯著提高,其SIRT6蛋白表達量能夠達到原代外囊泡SIRT6蛋白表達量的3倍左右。

      技術(shù)研發(fā)人員:楊桂花,趙進軍
      受保護的技術(shù)使用者:和攜科技有限公司
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/10/10
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