本發(fā)明涉及與淋巴毒素β受體(ltbr)結(jié)合的新穎抗體，并且涉及包含這些新穎ltbr抗體以及結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原、特別是成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的雙特異性抗原結(jié)合分子，涉及生產(chǎn)這些分子的方法并且涉及使用這些分子的方法。

背景技術(shù)：

1、近年來(lái)，在癌癥免疫療法諸如阻斷免疫檢查點(diǎn)pd-1/pd-l1和ctla-4的藥劑得到開(kāi)發(fā)和批準(zhǔn)后，癌癥治療的格局發(fā)生了深刻的變化。這些癌癥免疫療法可在癌癥適應(yīng)癥諸如黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌和膀胱癌中實(shí)現(xiàn)持久緩解，并因此正在成為單獨(dú)或與其他療法組合的新型標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理。然而，僅有一部分患者(<30％)從這些療法中獲得持久的益處，并且大多數(shù)患者由于原發(fā)性或獲得性抗性機(jī)制而復(fù)發(fā)。此外，若干常見(jiàn)的癌癥適應(yīng)癥(例如，結(jié)直腸癌和胰腺癌)大多是用這些免疫調(diào)節(jié)劑難治的。因此，在開(kāi)發(fā)療法以解決抗性機(jī)制并且增加對(duì)癌癥免疫療法(包括檢查點(diǎn)抑制劑)的應(yīng)答方面存在迫切的醫(yī)療需求。

2、臨床數(shù)據(jù)顯示，對(duì)檢查點(diǎn)抑制劑無(wú)應(yīng)答或應(yīng)答不佳的患者表現(xiàn)出非t細(xì)胞炎癥免疫表型，其特征在于不存在細(xì)胞毒性t細(xì)胞或者其局限于腫瘤基質(zhì)。因此，旨在增加免疫浸潤(rùn)的新穎療法對(duì)于改善對(duì)檢查點(diǎn)抑制劑的緩解率、擴(kuò)大其臨床獲益將具有巨大的用途。

3、tnfr超家族由19種配體和29種受體構(gòu)成，這些配體和受體共有一定的結(jié)構(gòu)相似性，但參與許多不同的生理功能。一般來(lái)說(shuō)，該超家族的成員可誘導(dǎo)細(xì)胞死亡(例如，dr5-trail、fas-fasl)，或者它們可促進(jìn)存活和炎癥(例如，tnf-tnfr)。淋巴毒素β受體(ltbr)是屬于第二類的tnfr超家族的成員，并且由多種細(xì)胞(包括腫瘤微環(huán)境的基質(zhì)細(xì)胞、髓樣細(xì)胞和上皮來(lái)源的腫瘤細(xì)胞)表達(dá)。tnfr超家族內(nèi)的配體-受體相互作用可以是單價(jià)的，也可以是多價(jià)的。例如，ox40及其配體(ox40l)形成單型配體-受體對(duì)，而ltbr、ltα、ltβ和light顯示出形成互連途徑的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的多價(jià)相互作用。淋巴毒素α1β1(ltα1β1)或light配體結(jié)合對(duì)ltbr的活化經(jīng)由經(jīng)典和非經(jīng)典nfκb途徑誘導(dǎo)受體寡聚化和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致炎癥和發(fā)育基因如黏附分子(icam和vcam)、化學(xué)引誘物(cxcl9、10、11)和淋巴組織趨化因子(ccl21、ccl19、cxcl13)的上調(diào)(lu和browning.,front?immunol.2014,5:47,doi:10.3389/fimmu.2014.00047)。該途徑對(duì)于次級(jí)淋巴器官的發(fā)育和維持至關(guān)重要，如ltbr被敲除的小鼠的表型所示，這些小鼠無(wú)法發(fā)育淋巴結(jié)和派爾集合淋巴結(jié)(fütterer等人,immunity1998,9(1),59-70,doi:10.1016/s1074-7613(00)80588-9)。此外，它對(duì)于高內(nèi)皮小靜脈(hev)的發(fā)育和維持也很關(guān)鍵(browning等人,immunity?2005,23(5),539-550,doi:10.1016/j.immuni.2005.10.002)。在許多實(shí)體瘤中通過(guò)組織學(xué)檢測(cè)到類似于次級(jí)淋巴器官的多細(xì)胞聚集體，其由t細(xì)胞和活化的樹(shù)突狀細(xì)胞(dc)、b細(xì)胞和hev構(gòu)成。臨床證據(jù)顯示，此類異位淋巴器官(也稱為三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(tls))的存在或hev的存在與若干腫瘤適應(yīng)癥的更好的預(yù)后相關(guān)(dieu-nosjean等人,immunol.rev.2016,271(1),260-275,doi:10.1111/imr.12405)。tls和hev被認(rèn)為響應(yīng)于淋巴結(jié)發(fā)育諸如ltbr途徑活化中涉及的相同分子信號(hào)而形成。因此，ltbr的活化具有促進(jìn)腫瘤微環(huán)境中tls的形成并且誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的潛力。

4、事實(shí)上，臨床前證據(jù)支持以下假設(shè)：ltbr活化可增加免疫浸潤(rùn)、增強(qiáng)對(duì)檢查點(diǎn)抑制劑的應(yīng)答并且誘導(dǎo)tls形成。通過(guò)激動(dòng)性抗體或靶向配體活化ltbr，在若干小鼠腫瘤模型中增加了t細(xì)胞浸潤(rùn)(lukashev等人,cancer?res.2006,66(19),9617-9624,doi:10.1158/0008-5472.can-06-0217)。因此，檢查點(diǎn)抑制劑與ltbr激動(dòng)劑組合時(shí)的組合療法更有效(allen等人,sci?transl?med.2017,9(385),eaak9679,doi:10.1126/scitranslmed.aak9679；johansson-percival等人,cell?rep.2017,13(12),2687-2698,doi:10.1016/j.celrep.2015.12.004；以及tang等人,cancer?cell?2016,29(3),285-296,doi:10.1016/j.ccell.2016.02.004)。此外，還報(bào)道了響應(yīng)于此類激動(dòng)劑的tls形成和hev發(fā)育的證據(jù)。

5、除了ltbr在tls和hev發(fā)育中的關(guān)鍵作用以外，還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ltbr的活化誘導(dǎo)某些癌細(xì)胞系的細(xì)胞死亡(browning等人,j?exp?med1996,183(3),867-878,doi:10.1084/jem.183.3.867)。一項(xiàng)i期研究評(píng)定了ltbr激動(dòng)性人源化抗體(hcbe11)在患有晚期實(shí)體瘤的患者中的安全性和耐受性(clinicaltrials.gov,nct00105170)。該研究在完成患者入組之前暫停并且隨后終止。這表明存在與人體內(nèi)廣泛的ltbr激動(dòng)作用相關(guān)聯(lián)的嚴(yán)重安全問(wèn)題的可能性。

6、鑒于ltbr激動(dòng)劑在改善癌癥免疫療法方面具有巨大的治療潛力，需要提供具有優(yōu)異的藥理學(xué)特征的激動(dòng)性ltbr抗體、或者具有有利的安全性特征并且能夠僅在腫瘤微環(huán)境中而不是在其他表達(dá)ltbr的組織中活化ltbr的雙特異性抗體。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及與人淋巴毒素β受體(ltbr)特異性結(jié)合的新型抗體，特別是激動(dòng)性人ltbr抗體。這些抗體能夠以小于2倍的親和力差異與人ltbr和與食蟹猴ltbr結(jié)合。一些新型激動(dòng)性人ltbr抗體甚至能夠與人ltbr、食蟹猴ltbr和鼠ltbr結(jié)合。本發(fā)明還涉及包含這些新型激動(dòng)性抗體的多特異性抗體。

2、因此，本文提供了一種與人ltbr和與食蟹猴ltbr特異性結(jié)合的激動(dòng)性淋巴毒素β受體(ltbr)抗體，其中所述抗體包含

3、(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seq?id?no:27的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:28的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:29的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:30的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?idno:31的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:32的氨基酸序列；或者

4、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:43的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:44的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:45的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:46的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:47的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:48的氨基酸序列；或者

5、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:75的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:76的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:77的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:78的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:79的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:80的氨基酸序列；或者

6、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:83的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:84或seq?id?no:92的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:85的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:86的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:87的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:88的氨基酸序列；或者

7、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:35的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:36的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:37的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:38的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:39的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:40的氨基酸序列；或者

8、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:51的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:52的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:53的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:54的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:55的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:56的氨基酸序列；或者

9、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:59的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:60的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:61的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:62的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:63的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:64的氨基酸序列；或者

10、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:67的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:68的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:69的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?idno:70的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:71的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:72的氨基酸序列。

11、在一個(gè)方面，提供了如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體，其中該激動(dòng)性抗體具有以下特性中的至少一者：

12、(a)以小于2倍的親和力差異與人ltbr和與食蟹猴ltbr結(jié)合；或者

13、(b)以通過(guò)elisa測(cè)量的小于4nm的ec50與人ltbr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并且以通過(guò)elisa測(cè)量的小于5nm的ec50與食蟹猴ltbr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合；或者

14、(c)需要針對(duì)其激動(dòng)活性進(jìn)行交聯(lián)以活化人ltbr；或者

15、(d)需要針對(duì)其激動(dòng)活性進(jìn)行交聯(lián)以誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞或癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞中的icam上調(diào)；或者

16、(e)抑制人ltbr與其人配體淋巴毒素α1β2和light之間的相互作用。

17、在一個(gè)方面，提供了一種激動(dòng)性ltbr抗體，該激動(dòng)性ltbr抗體包含(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:33的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:34的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

18、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:50的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

19、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:81的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:82的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

20、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:89的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:90的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

21、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:97的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:98的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；

22、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:41的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:42的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；

23、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:57的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:58的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

24、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:65的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:66的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

25、(ix)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:73的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:74的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列。

26、在一個(gè)方面，如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體包含

27、(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列；或者

28、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列；或者

29、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:81的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:82的氨基酸序列；或者

30、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:89的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:90的氨基酸序列；或者

31、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:97的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:98的氨基酸序列；或者

32、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:41的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:42的氨基酸序列；或者

33、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:57的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:58的氨基酸序列；或者

34、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:65的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:66的氨基酸序列；

35、(ix)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:73的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:74的氨基酸序列。

36、在一個(gè)特定的方面，提供了一種如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體，其中該激動(dòng)性ltbr抗體進(jìn)一步與鼠ltbr特異性結(jié)合。在一個(gè)方面，激動(dòng)性ltbr抗體以通過(guò)elisa測(cè)量的小于1nm的ec50與鼠ltbr細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。

37、在一個(gè)方面，進(jìn)一步特異性結(jié)合鼠ltbr的激動(dòng)性ltbr抗體包含

38、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seqid?no:27的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:28的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seqid?no:29的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:30的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:31的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:32的氨基酸序列；或者

39、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:43的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:44的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:45的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:46的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:47的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:48的氨基酸序列；或者

40、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:75的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:76的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:77的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:78的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:79的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:80的氨基酸序列；或者

41、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:83的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:84或seq?id?no:92的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seqid?no:85的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:86的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:87的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:88的氨基酸序列。

42、在一個(gè)方面，進(jìn)一步特異性結(jié)合鼠ltbr的激動(dòng)性ltbr抗體包含重鏈可變區(qū)(vhltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列；或者

43、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列；或者

44、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:81的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:82的氨基酸序列；或者

45、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:89的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:90的氨基酸序列；或者

46、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:97的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:98的氨基酸序列。

47、在一個(gè)特定方面，如本文所述的激動(dòng)性ltbr抗體與人ltbr上的seq?id?no:351的表位區(qū)域結(jié)合。在一個(gè)方面，此類激動(dòng)性ltbr抗體包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:27的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:28的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:29的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:30的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:31的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:32的氨基酸序列。在一個(gè)方面，包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列。

48、本發(fā)明還涉及激動(dòng)性ltbr抗體，其為包含如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體的多特異性抗體。在一個(gè)特定方面，提供了作為雙特異性抗體的激動(dòng)性ltbr抗體。在本文之前描述的任何方面，激動(dòng)性ltbr抗體優(yōu)選地包含人源、特別是人igg亞類、更特別是人igg1亞類的fc結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)方面，激動(dòng)性ltbr抗體包含人igg1亞類的fc結(jié)構(gòu)域，該fc結(jié)構(gòu)域包含降低抗原結(jié)合分子對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)方面，激動(dòng)性ltbr抗體包含人igg1亞類的fc結(jié)構(gòu)域，該fc結(jié)構(gòu)域具有氨基酸突變l234a、l235a和p329g(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))。

49、在一個(gè)方面，激動(dòng)性ltbr抗體為與ltbr和腫瘤相關(guān)抗原(taa)特異性結(jié)合的雙特異性抗體。

50、在一個(gè)方面，提供了一種激動(dòng)性ltbr抗體，該激動(dòng)性ltbr抗體為雙特異性抗體，該雙特異性抗體能夠與淋巴毒素β受體(ltbr)和成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)特異性結(jié)合，并因此將與fap特異性結(jié)合的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與能夠與ltbr、特別是人ltbr激動(dòng)性結(jié)合的至少一個(gè)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域組合，其中通過(guò)ltbr的活化是通過(guò)與腫瘤基質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)的fap結(jié)合進(jìn)行交聯(lián)來(lái)提供的。與常規(guī)的非靶向激動(dòng)性ltbr抗體相比，靶向fap等腫瘤相關(guān)抗原(taa)能夠?qū)tbr激動(dòng)作用僅限于腫瘤微環(huán)境(腫瘤內(nèi)皮和癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞)，從而減少潛在的副作用。

51、成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)是一種絲氨酸蛋白酶，在癌癥相關(guān)基質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞表面上以及次級(jí)淋巴器官的成纖維細(xì)胞網(wǎng)狀細(xì)胞上高度表達(dá)，但在正常組織中的表達(dá)卻非常有限。fap在各種癌癥適應(yīng)癥中非常普遍，使其可用作應(yīng)在腫瘤基質(zhì)內(nèi)積累的藥物的靶向部分。

52、因此，在一個(gè)方面，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含

53、(a)與成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，

54、(b)與淋巴毒素β受體(ltbr)特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及

55、(c)由第一亞基和第二亞基構(gòu)成并且包含降低抗體對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的fc結(jié)構(gòu)域。

56、雙特異性抗體具有由第一亞基和第二亞基構(gòu)成的fc結(jié)構(gòu)域，該fc結(jié)構(gòu)域包含降低抗體對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。從而消除了fc受體介導(dǎo)的交聯(lián)，并且通過(guò)與抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合進(jìn)行交聯(lián)來(lái)實(shí)現(xiàn)腫瘤特異性活化，該抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過(guò)與其腫瘤相關(guān)靶標(biāo)結(jié)合而與fap特異性結(jié)合。提供了一種雙特異性抗體，其僅在與fap結(jié)合后活化ltbr。因此，提供了一種活化腫瘤基質(zhì)中的ltbr的雙特異性抗體。

57、在一個(gè)方面，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含

58、(a)與成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)特異性結(jié)合的第一fab片段，

59、(b)與淋巴毒素β受體(ltbr)特異性結(jié)合的第二fab片段，以及(c)由第一亞基和第二亞基構(gòu)成并且包含降低抗原結(jié)合分子對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的fc結(jié)構(gòu)域。

60、在一個(gè)方面，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，其中該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含與ltbr特異性結(jié)合的第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，即，包含以下的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體：(a)與成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；(b)與淋巴毒素β受體(ltbr)特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；以及(c)由第一亞基和第二亞基構(gòu)成并且包含降低抗原結(jié)合分子對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的fc結(jié)構(gòu)域。

61、在一個(gè)特定方面，與ltbr特異性結(jié)合的第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域跟與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域相同，這意味著與淋巴毒素β受體(ltbr)特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是相同的。在一個(gè)方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)榕cltbr特異性結(jié)合的fab片段。在一個(gè)方面，與ltbr特異性結(jié)合的fab片段為crossfab片段。在另一方面，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)閒ab片段。

62、在一個(gè)方面，如本文所公開(kāi)的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含與成纖維細(xì)胞活化蛋白(fap)特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含(i)重鏈可變區(qū)(vhfap)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seq?id?no:3的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:4的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:5的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?idno:6的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:7的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:8的氨基酸序列；或者

63、(ii)重鏈可變區(qū)(vhfap)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:19的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:20的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:21的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:22的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:23的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:24的氨基酸序列；或者

64、(iii)重鏈可變區(qū)(vhfap)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:11的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:12的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:13的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:14的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:15的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:16的氨基酸序列。

65、在一個(gè)方面，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含(i)重鏈可變區(qū)(vhfap)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seq?id?no:3的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:4的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:5的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?idno:6的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:7的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:8的氨基酸序列；或者(ii)重鏈可變區(qū)(vhfap)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seqid?no:19的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:20的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seqid?no:21的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seqid?no:22的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:23的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seqid?no:24的氨基酸序列。在一個(gè)特定方面，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含(i)重鏈可變區(qū)(vhfap)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seq?id?no:3的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:4的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:5的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:6的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:7的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:8的氨基酸序列。

66、在一個(gè)方面，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含與seq?id?no:9的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含與seq?id?no:10的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含與seq?id?no:25的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含與seq?id?no:26的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含與seq?id?no:17的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含與seq?id?no:18的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列。在一個(gè)方面，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:9的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?id?no:10的氨基酸序列；或者該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:25的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?id?no:26的氨基酸序列；或者該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:17的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?idno:18的氨基酸序列。在一個(gè)特定方面，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:9的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?idno:10的氨基酸序列。特別地，與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:9的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?id?no:10的氨基酸序列，并且該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域?yàn)閒ab片段。

67、在另一方面，如本文所公開(kāi)的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含

68、(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seq?id?no:27的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:28的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:29的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:30的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:31的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:32的氨基酸序列；或者

69、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:43的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:44的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:45的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:46的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:47的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:48的氨基酸序列；或者

70、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:75的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:76的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:77的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:78的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:79的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:80的氨基酸序列；或者

71、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:83的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:84或seq?id?no:92的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:85的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?idno:86的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:87的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:88的氨基酸序列；或者

72、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:35的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:36的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:37的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:38的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:39的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:40的氨基酸序列；或者

73、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:51的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:52的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:53的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:54的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:55的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:56的氨基酸序列；或者

74、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:59的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:60的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:61的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:62的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:63的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:64的氨基酸序列；或者

75、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:67的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:68的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:69的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?idno:70的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:71的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:72的氨基酸序列。

76、在一個(gè)方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含

77、(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seq?id?no:27的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:28的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:29的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:30的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:31的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:32的氨基酸序列；或者

78、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:43的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:44的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:45的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:46的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:47的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:48的氨基酸序列；或者

79、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:75的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:76的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:77的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:78的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:79的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:80的氨基酸序列；或者

80、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:83的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:84或seq?id?no:92的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:85的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:86的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:87的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:88的氨基酸序列；或者

81、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:35的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:36的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:37的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:38的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:39的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:40的氨基酸序列；或者

82、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:51的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:52的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:53的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:54的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:55的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:56的氨基酸序列；或者

83、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:59的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:60的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:61的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:62的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:63的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:64的氨基酸序列；或者

84、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:67的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:68的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:69的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?idno:70的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:71的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?idno:72的氨基酸序列。

85、在一個(gè)方面，提供了如本文所公開(kāi)的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，其中與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)各自包含(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:33的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:34的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

86、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:49的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:50的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

87、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:81的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:82的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

88、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:89的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:90的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

89、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:97的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:98的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；

90、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:41的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:42的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；

91、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:57的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:58的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

92、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:65的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:66的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；或者

93、(ix)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含與seq?id?no:73的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列；和輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含與seq?id?no:74的氨基酸序列至少約95％相同的氨基酸序列。

94、在一個(gè)方面，如本文所公開(kāi)的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含

95、(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列；或者

96、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列；或者

97、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:81的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:82的氨基酸序列；或者

98、(iv)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:89的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:90的氨基酸序列；或者

99、(v)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:97的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:98的氨基酸序列；或者

100、(vi)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:41的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:42的氨基酸序列；或者

101、(vii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:57的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:58的氨基酸序列；或者

102、(viii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:65的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:66的氨基酸序列；

103、(ix)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:73的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:74的氨基酸序列。

104、在另一方面，提供了如本文所公開(kāi)的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，其中與人ltbr、食蟹猴ltbr和鼠ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含

105、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1)，其包含seqid?no:27的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:28的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seqid?no:29的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)cdr-l1，其包含seq?id?no:30的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:31的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:32的氨基酸序列；或者

106、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:43的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:44的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:45的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:46的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:47的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:48的氨基酸序列；或者

107、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:75的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:76的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seq?id?no:77的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:78的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:79的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:80的氨基酸序列；或者

108、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，該重鏈可變區(qū)包含：cdr-h1，其包含seq?id?no:83的氨基酸序列；cdr-h2，其包含seq?id?no:84或seq?id?no:92的氨基酸序列；和cdr-h3，其包含seqid?no:85的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，該輕鏈可變區(qū)包含：cdr-l1，其包含seq?id?no:86的氨基酸序列；cdr-l2，其包含seq?id?no:87的氨基酸序列；和cdr-l3，其包含seq?id?no:88的氨基酸序列。

109、在一個(gè)方面，雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含與人ltbr、食蟹猴ltbr和鼠ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含

110、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列；或者

111、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列；或者

112、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:81的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:82的氨基酸序列；或者

113、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:89的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:90的氨基酸序列；或者

114、重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:97的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlltbr)，其包含seq?id?no:98的氨基酸序列。

115、在另一方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含

116、(i)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列；或者

117、(ii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:41的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:42的氨基酸序列；或者

118、(iii)重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列，以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列。

119、在一個(gè)特定方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列。在另一個(gè)特定方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:41的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:42的氨基酸序列。在又一個(gè)特定方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列。

120、因此，在一個(gè)特定方面，如本文所述的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含：(a)與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:9的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?id?no:10的氨基酸序列；以及(b)與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:33的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:34的氨基酸序列。在另一方面，如本文所述的雙特異性抗原結(jié)合分子包含：(a)與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:9的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?id?no:10的氨基酸序列；以及(b)與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:41的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:42的氨基酸序列。在又一方面，如本文所述的雙特異性抗原結(jié)合分子包含：(a)與fap特異性結(jié)合的第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該第一抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含：重鏈可變區(qū)(vhfap)，其包含seq?id?no:9的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vlfap)，其包含seq?id?no:10的氨基酸序列；以及(b)與ltbr特異性結(jié)合的第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)，該第二抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(和任選地第三抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域)包含：重鏈可變區(qū)(vh?ltbr)，其包含seq?id?no:49的氨基酸序列；以及輕鏈可變區(qū)(vl?ltbr)，其包含seq?id?no:50的氨基酸序列。

121、在本文之前描述的所有這些方面，雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含fc結(jié)構(gòu)域，該fc結(jié)構(gòu)域由第一亞基和第二亞基構(gòu)成并且包含降低抗原結(jié)合分子對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。在一個(gè)方面，由第一亞基和第二亞基構(gòu)成的fc結(jié)構(gòu)域?yàn)閕gg?fc結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)特定方面，由第一亞基和第二亞基構(gòu)成的fc結(jié)構(gòu)域?yàn)閕gg1?fc結(jié)構(gòu)域或igg4?fc結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)特定方面，fc結(jié)構(gòu)域?qū)儆谌薸gg1亞類，其具有氨基酸突變l234a、l235a和p329g(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))。

122、在另一方面，提供了一種如本文之前所定義的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，其中根據(jù)杵臼結(jié)構(gòu)(knobs?into?holes)方法，fc區(qū)的第一亞基包含杵并且fc區(qū)的第二亞基包含臼。特別地，提供了一種雙特異性抗原結(jié)合分子，其中(i)所述fc區(qū)的第一亞基包含氨基酸取代s354c和t366w(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))，并且所述fc區(qū)的第二亞基包含氨基酸取代y349c、t366s和y407v(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))，或(ii)所述fc區(qū)的第一亞基包含氨基酸取代k392d和k409d(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))，并且所述fc區(qū)的第二亞基包含氨基酸取代e356k和d399k(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))。更特別地，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，其中fc區(qū)的第一亞基包含氨基酸取代s354c和t366w(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))，并且fc區(qū)的第二亞基包含氨基酸取代y349c、t366s和y407v(根據(jù)kabat?eu索引編號(hào))。

123、在另一方面，提供了一種如本文之前所定義的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含

124、(a)與fap特異性結(jié)合的第一fab片段，

125、(b)與ltbr特異性結(jié)合的第二fab片段，以及

126、(c)由第一亞基和第二亞基構(gòu)成并且包含降低抗體對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的fc結(jié)構(gòu)域。在一個(gè)方面，與ltbr特異性結(jié)合的第二fab片段為crossfab片段。因此，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體提供了對(duì)ltbr的單價(jià)結(jié)合以及對(duì)fap的單價(jià)結(jié)合。

127、在另一方面，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體包含

128、(a)與fap特異性結(jié)合的第一fab片段，

129、(b)與ltbr特異性結(jié)合的第二fab片段和第三fab片段，以及

130、(c)由第一亞基和第二亞基構(gòu)成并且包含降低抗體對(duì)fc受體的結(jié)合親和力和/或效應(yīng)子功能的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的fc結(jié)構(gòu)域，其中與fap結(jié)合的第一fab片段在其n末端處融合至fc結(jié)構(gòu)域亞基中的一者的c末端，并且與ltbr特異性結(jié)合的第二fab片段和第三fab片段各自在其c末端處融合至fc結(jié)構(gòu)域亞基中的一者的n末端。

131、因此，提供了一種雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體提供了對(duì)ltbr的二價(jià)結(jié)合以及對(duì)fap的單價(jià)結(jié)合。

132、根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了分離的一個(gè)或多個(gè)分離的多核苷酸，其編碼如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種載體，特別是表達(dá)載體，該載體包含本發(fā)明的分離的多核酸；并且提供了一種宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞包含本發(fā)明的分離的核酸或表達(dá)載體。在一些方面，宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞，特別是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在另一方面，提供了一種生產(chǎn)如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體的方法，該方法包括在適合于表達(dá)激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體的條件下培養(yǎng)如上所述的宿主細(xì)胞，并且分離該激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體。本發(fā)明還涵蓋如通過(guò)本發(fā)明的方法所生產(chǎn)的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體。

133、本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體以及藥用載體。在一個(gè)方面，藥物組合物包含另外的治療劑。

134、本發(fā)明還涵蓋如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，或包含該雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體的藥物組合物，其用作藥物。

135、在一個(gè)方面，提供了如本文之前所述的雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體或本發(fā)明的藥物組合物，其用于(a)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞或癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞上的icam上調(diào)，或(b)增強(qiáng)t細(xì)胞黏附。

136、在一個(gè)具體方面，提供了如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體或本發(fā)明的藥物組合物，其用于治療癌癥。在另一個(gè)具體方面，本發(fā)明提供了如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體，其用于治療癌癥，其中激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體與化療劑、放射和/或供在癌癥免疫療法中使用的其他藥劑組合施用。在一個(gè)方面，如本文所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體用于治療癌癥，其中該激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體用于與阻斷pd-l1/pd-1相互作用的藥劑組合施用。在另一方面，提供了如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體或本發(fā)明的藥物組合物，其用于上調(diào)或延長(zhǎng)細(xì)胞毒性t細(xì)胞活性。

137、在另一方面，本發(fā)明提供了一種抑制個(gè)體的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，該方法包括向該個(gè)體施用有效量的如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體或本發(fā)明的藥物組合物，以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。在另一方面，本發(fā)明提供了一種治療或延緩個(gè)體的癌癥的方法，該方法包括向該個(gè)體施用有效量的如本文之前所述的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體或本發(fā)明的藥物組合物。

138、另外，提供了如上文所述的雙特異性抗原結(jié)合分子在制造用于治療有需要的個(gè)體的疾病的藥物中的用途，特別是在制造用于治療癌癥的藥物中的用途，以及一種治療個(gè)體的疾病的方法，該方法包括向所述個(gè)體施用治療有效量的包含本發(fā)明的激動(dòng)性ltbr抗體或雙特異性激動(dòng)性ltbr抗體的組合物，該組合物呈藥用形式。在一個(gè)具體方面，疾病為癌癥。在上述方面中的任何方面，個(gè)體為哺乳動(dòng)物，特別是人。