本發(fā)明涉及醫(yī)療器械性能測(cè)試，具體是一種氣溶膠挑戰(zhàn)儀、多劑量滴眼劑瓶包裝密封完整性及使用時(shí)物理阻菌系統(tǒng)阻菌性的測(cè)試方法。

背景技術(shù)：

1、多劑量滴眼劑由于包裝量大，通常使用20-30天，在反復(fù)使用過程中，易發(fā)生微生物污染。為了保持藥物的無菌性，延長藥物開封有效期，多劑量滴眼液大多使用添加防腐劑的方式抑制樣品中微生物的生長。眾所周知，防腐劑具有眼部表面細(xì)胞毒性，可能造成眼部損害，防腐劑的副作用一直是生產(chǎn)使用者所擔(dān)憂的難題。多年來，對(duì)于局部用藥配方中防腐劑副作用的風(fēng)險(xiǎn)被廣泛關(guān)注，無防腐劑正逐步發(fā)展為局部用藥趨勢(shì)，多劑量滴眼劑瓶物理阻菌系統(tǒng)采用物理方法阻菌，而不添加防腐劑，即可維持多劑量使用滴眼劑的無菌性，同時(shí)沒有防腐劑的副作用。

2、多劑量滴眼劑瓶物理阻菌系統(tǒng)，是利用物理屏障阻隔內(nèi)容物微生物污染的多次量容器。其分別具有藥液通道和回氣通道，藥液通道使用加載彈簧控制滴孔密封，藥液和污染藥液無法回流；回氣通道使用無菌過濾元件過濾空氣，防止微生物通過回氣通道進(jìn)入包裝內(nèi)部。

3、具有物理阻菌系統(tǒng)的多劑量滴眼劑瓶是新興的一種滴眼劑包裝，滴眼劑雖是外部用藥，但是由于其直接用藥于眼部，屬于高風(fēng)險(xiǎn)局部用藥，對(duì)其無菌性的保持，一直與注射劑要求相同。其物理阻菌系統(tǒng)最大的風(fēng)險(xiǎn)是在使用過程中，微生物污染藥液通道和回氣通道，所以多劑量滴眼劑瓶的藥液通道與回氣通道的阻菌性能，以保證包裝內(nèi)部的無微生物侵入的性能是多劑量滴眼劑瓶物理阻菌系統(tǒng)的關(guān)鍵性能。

4、包裝系統(tǒng)密封性，又稱容器密封完整性，是指包裝系統(tǒng)防止內(nèi)容物損失、微生物侵入以及氣體(氧氣、空氣、水蒸氣等)或其他物質(zhì)進(jìn)入，保證藥品持續(xù)符合安全與質(zhì)量要求的能力。無菌藥品和醫(yī)療器械包裝系統(tǒng)泄露、內(nèi)容物被微生物污染，會(huì)對(duì)患者的用藥安全造成重大風(fēng)險(xiǎn)。國外藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)相繼發(fā)布了標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范等要求無菌藥品包裝系統(tǒng)應(yīng)能保證有效期內(nèi)產(chǎn)品無菌，無菌藥品包裝系統(tǒng)密封性日益成為其關(guān)鍵質(zhì)量屬性?，F(xiàn)有技術(shù)中針對(duì)多劑量滴眼劑瓶的包裝系統(tǒng)密封性的測(cè)試是通過儀器，通過抽真空的方式在試樣內(nèi)外產(chǎn)生壓差，從而觀察試樣的氣體外逸情況和形狀恢復(fù)情況，進(jìn)而判斷試樣的密封性能。其缺點(diǎn)在于無法對(duì)密封處的微生物屏障性能進(jìn)行直接測(cè)試，只是對(duì)密封處的物理強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)試。而《消毒技術(shù)規(guī)范》2002版中提到的醫(yī)療機(jī)構(gòu)滅菌包裝的無菌性保持的測(cè)試方法，是在加速老化箱中放置7天，對(duì)內(nèi)部醫(yī)療器械進(jìn)行無菌檢查的方式進(jìn)行。此方法的試驗(yàn)條件，在62℃的高溫下，本身微生物的存活條件受到限制，且無加壓或抽真空的試驗(yàn)條件，無法模擬無菌屏障系統(tǒng)在真實(shí)環(huán)境條件下，如滅菌前后，低溫儲(chǔ)存，高空運(yùn)輸過程中可能發(fā)生的氣壓變化，而致使方法靈敏度較低。

5、微生物挑戰(zhàn)法在包裝系統(tǒng)密封性研究中具有關(guān)鍵性的作用。無菌產(chǎn)品的容器密封系統(tǒng)應(yīng)能防止微生物入侵，當(dāng)需要獲得能夠預(yù)防微生物侵入的直接證據(jù)時(shí)，通過微生物挑戰(zhàn)測(cè)試是最有用的。氣溶膠挑戰(zhàn)法是將包裝系統(tǒng)置于含有特定濃度的微生物氣溶膠的挑戰(zhàn)儀中，放置一定時(shí)間，挑戰(zhàn)儀是密封系統(tǒng)，可設(shè)定抽真空和加壓的試驗(yàn)條件，模擬包裝系統(tǒng)在實(shí)際儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中，可能遇到的壓力變化，包裝內(nèi)盛有液體或固體的培養(yǎng)基，挑戰(zhàn)結(jié)束后，培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基中是否有微生物生長。普通氣溶膠挑戰(zhàn)箱，無法在氣溶膠挑戰(zhàn)的過程中，實(shí)現(xiàn)人工操作，一旦氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)開始，每瓶樣品進(jìn)行完試驗(yàn)需更換樣品，所以需要?dú)馊苣z挑戰(zhàn)箱配備密封手套，進(jìn)行操作。現(xiàn)有氣溶膠挑戰(zhàn)儀無法實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)測(cè)試氣溶膠濃度及噴霧器的開啟關(guān)閉，無法保證氣溶膠濃度的穩(wěn)定性，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

6、國內(nèi)外還沒有形成標(biāo)準(zhǔn)的在多劑量滴眼劑瓶使用過程中的其阻菌性測(cè)試方法，現(xiàn)有技術(shù)中公開了一種試驗(yàn)方法，是滴出幾滴滴眼劑檢測(cè)物理阻菌系統(tǒng)的阻菌性，考慮到物理阻菌系統(tǒng)在每一滴滴眼液的使用過程中都具有微生物感染風(fēng)險(xiǎn)，所以只滴幾滴滴眼液模擬使用進(jìn)行測(cè)試，不能代表整瓶滴眼劑全部使用過程都能保證滴眼劑瓶內(nèi)部無微生物侵入。而且也未能證明滴眼劑開封后，在其開封有效期內(nèi)是否對(duì)物理阻菌裝置的阻菌性有保證。

7、綜上，現(xiàn)有技術(shù)中目前沒有可進(jìn)行多劑量滴眼劑瓶氣溶膠挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn)的氣溶膠挑戰(zhàn)裝置，現(xiàn)有技術(shù)中針對(duì)多劑量滴眼劑瓶的包裝密封完整性和使用時(shí)多劑量滴眼劑瓶物理阻菌系統(tǒng)阻菌性的測(cè)試方法均有一定的局限性和不準(zhǔn)確性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，提供了一種氣溶膠挑戰(zhàn)儀、多劑量滴眼劑瓶的包裝密封完整性及使用時(shí)物理阻菌系統(tǒng)阻菌性的測(cè)試方法，本發(fā)明首先完成測(cè)試裝置的構(gòu)建，然后進(jìn)行測(cè)試方法的探索。一方面可以形成多劑量滴眼劑瓶物理阻菌系統(tǒng)測(cè)試的試驗(yàn)裝置，為以后的產(chǎn)品測(cè)試形成物質(zhì)條件，另一方面探索多劑量滴眼劑瓶包裝密封完整性及使用時(shí)物理阻菌系統(tǒng)的阻菌性能測(cè)試方法，為標(biāo)準(zhǔn)方法的形成提供理論依據(jù)。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種氣溶膠挑戰(zhàn)儀，包括密封艙、氣溶膠發(fā)生器、第一氣源泵、囊式高效過濾器和第二氣源泵，所述的密封艙上設(shè)置有第一密封門和/或第二密封門，所述的第一密封門為完全密封，所述的第二密封門上配備有安全手套，所述的密封艙內(nèi)用于測(cè)試樣品的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)；所述的氣溶膠發(fā)生器用于產(chǎn)生微生物氣溶膠，氣溶膠發(fā)生器一端與密封艙頂部內(nèi)部連通；所述的第一氣源泵的一端與氣溶膠發(fā)生器另一端連接，第一氣源泵的另一端與密封艙底部內(nèi)部連通，從密封艙取出氣體，用于氣溶膠產(chǎn)生的氣源，第一氣源泵將氣溶膠發(fā)生器產(chǎn)生的氣溶膠輸送至密封艙內(nèi)；所述的囊式高效過濾器用于密封艙進(jìn)出氣體的過濾清洗，囊式高效過濾器的一端與密封艙的頂部內(nèi)部連通，所述的第二氣源泵的一端與囊式高效過濾器的另一端連接，第二氣源泵的另一端與密封艙的底部內(nèi)部連通，第二氣源泵用于密封艙內(nèi)的抽真空與加壓；所述的密封艙的頂部內(nèi)部還與第三管道連通，所述的密封艙的底部還與第四管道連通，所述的第三管道和第四管道上都設(shè)置有第三閥門，所述的第四管道與采樣儀器或粒子計(jì)數(shù)器連接，采樣儀器為空氣微生物采樣器，所述的第三管道與過濾器連接，所述的第三管道用于采樣入口管道，所述的第四管道用于采樣出口管道，常壓下，對(duì)氣溶膠發(fā)生器運(yùn)行的時(shí)間和產(chǎn)生的微生物氣溶膠粒子，以及微生物氣溶膠的濃度可維持的時(shí)間進(jìn)行驗(yàn)證，此時(shí)利用采樣口采樣，通過采樣出口，采樣儀器或粒子計(jì)數(shù)器從密封艙內(nèi)采集微生物氣溶膠。采樣入口，為了保持密封艙氣壓平衡，在儀器常壓使用時(shí)可以打開閥門，并連接有過濾器的管路；所述的密封艙的頂部設(shè)置有壓力傳感器，壓力傳感器用于測(cè)量密封艙內(nèi)的壓力大??；所述的密封艙的內(nèi)部還設(shè)置有堆疊支架，所述的堆疊支架上用于放置測(cè)試樣品，根據(jù)樣品大小進(jìn)行堆疊，可適用于不同體積的樣品，所述的密封艙的底部設(shè)置有風(fēng)扇，所述的密封艙內(nèi)還設(shè)置有溫度傳感器，風(fēng)扇用于保證微生物氣溶膠的均勻性，保證試驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性及準(zhǔn)確性；所述的密封艙的頂部還連接有第一安全閥和第二安全閥，所述的第一安全閥為正壓泄壓閥，所述的第二安全閥為負(fù)壓安全閥，第一安全閥和第二安全閥用于安全泄壓，避免密封艙壓力過大，產(chǎn)生安全隱患。超過密封艙的某一設(shè)定壓力，第一安全閥和第二安全閥打開，泄壓。

3、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述氣溶膠發(fā)生器與密封艙之間通過第二管道連接，所述的第二管道上設(shè)置有第二閥門；所述的氣溶膠發(fā)生器與第一氣源泵之間通過第八管道連接，所述的第八管道上設(shè)置有第一流量控制器；所述的第一氣源泵與密封艙之間通過第五管道連接，所述的第五管道上設(shè)置有第五閥門。

4、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述的囊式高效過濾器與密封艙之間通過第一管道連接，所述的第一管道上設(shè)置有第一閥門；所述的囊式高效過濾器與密封艙之間通過第六管道連接，第六管道上依次設(shè)置有第二流量控制器、第七閥門和第六閥門；所述的第二氣源泵與第七閥門并聯(lián)連接；所述的第一管道上還設(shè)置有與外部連通的第一支管，所述的第一支管上設(shè)置有第四閥門，所述的第六管道上第六閥門與第七閥門和第二氣源泵并聯(lián)的節(jié)點(diǎn)之間設(shè)置有與外部連通的第二支管，所述的第二支管上設(shè)置有第八閥門；進(jìn)行加壓時(shí)，第二支管的第八閥門打開，第二氣源泵開啟，通過第二流量控制器控制加壓大小，外部氣源經(jīng)囊式高效過濾器后打開第一閥門，進(jìn)入密封艙；抽真空時(shí)，第六閥門打開，第二氣源泵開啟，通過第二流量控制器控制抽真空大小，內(nèi)部氣源經(jīng)囊式高效過濾器后，打開第四閥門，排出密封艙外；快速泄壓時(shí)，第六閥門打卡，第七閥門打開，通過第二流量控制器控制泄壓大小，內(nèi)部氣源經(jīng)囊式高效過濾器后，打開第四閥門，直接排出密封艙外。

5、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述的第一密封門和密封艙之間的通過密封手輪固定。

6、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述的第二密封門與密封艙之間通過螺釘固定。

7、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述的密封艙的側(cè)部設(shè)置有配電箱，所述的配電箱的頂部設(shè)置有顯示屏控制系統(tǒng)。

8、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述的壓力傳感器、第一流量控制器、第二流量控制器、第一閥門、第二閥門、第四閥門、第五閥門、第六閥門、第七閥門和第八閥門都與顯示屏控制系統(tǒng)通信連接，顯示屏控制系統(tǒng)獲取壓力傳感器的壓力數(shù)據(jù)、第一流量控制器和第二流量控制器的流量數(shù)據(jù)并控制各閥門的開閉。

9、本發(fā)明的進(jìn)一步的方案在于，所述的密封艙和配電箱的底部設(shè)置有腳輪。

10、通過上述技術(shù)方案，首先將滅菌干燥處理后的測(cè)試樣品放入密封艙，并關(guān)閉密封艙；然后采用囊式高效過濾器進(jìn)行密封艙的沖洗；在密封艙的控制面板設(shè)置試驗(yàn)參數(shù)，包括氣溶膠發(fā)生器的運(yùn)行周期(儀器驗(yàn)證期間，確認(rèn)氣溶膠發(fā)生器周期運(yùn)行產(chǎn)生的氣溶膠濃度及氣溶膠可維持此濃度的時(shí)間)，測(cè)試的抽真空壓力及維持時(shí)間，測(cè)試加壓及維持時(shí)間，測(cè)試常壓及維持時(shí)間，接著，運(yùn)行測(cè)試，氣溶膠發(fā)生器產(chǎn)生微生物氣溶膠并輸送至密封艙內(nèi)；氣源泵進(jìn)行抽真空或加壓處理等。

11、一種多劑量滴眼劑瓶包裝密封完整性的測(cè)試的方法，包括以下步驟：

12、a1.將配制和滅菌的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)無菌灌裝至滴眼劑瓶中作為樣品瓶，進(jìn)行培養(yǎng)并觀察是否渾濁，選擇未渾濁的樣品瓶進(jìn)行試驗(yàn)；

13、a2.將未渾濁的樣品瓶分為試驗(yàn)組、陽性組和陰性組；

14、a3.將陽性組和陰性組的樣品瓶置于生物安全柜中；將試驗(yàn)組的樣品瓶置于上述的氣溶膠挑戰(zhàn)儀的密封艙內(nèi)進(jìn)行氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)，將配置好的萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢懸液利用氣溶膠挑戰(zhàn)儀產(chǎn)生氣溶膠并輸送至密封艙內(nèi)部，設(shè)定氣溶膠挑戰(zhàn)儀的試驗(yàn)參數(shù)，包括壓力、溫度、維持時(shí)間和氣溶膠發(fā)生器周期性運(yùn)行時(shí)間；

15、a4.試驗(yàn)組的樣品瓶進(jìn)行氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)結(jié)束后，采用75％酒精無菌酒精棉片反復(fù)擦拭試驗(yàn)組的樣品瓶，并輕輕搖動(dòng)，以確保試驗(yàn)組的樣品瓶內(nèi)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)接觸所有樣品瓶內(nèi)表面；將陽性組的樣品瓶，接種萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢菌液；陰性組的樣品瓶不做處理；

16、a5.將上述a4中試驗(yàn)組、陽性組和陰性組的樣品瓶，置于35℃培養(yǎng)，培養(yǎng)7天，觀察樣品瓶中的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)是否渾濁。

17、試驗(yàn)樣品為低密度聚乙烯多劑量滴眼劑瓶，規(guī)格5ml。灌裝了無菌培養(yǎng)基的樣品12瓶，其中陰性組對(duì)照1瓶，陽性組對(duì)照1瓶，試驗(yàn)組10瓶。試驗(yàn)試劑為萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢懸液(mesalabs，批號(hào)：ssg-682)，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基美國(美國bd公司，批號(hào)：0350681)。試驗(yàn)儀器為氣溶膠挑戰(zhàn)儀、生物安全柜、立式壓力蒸汽滅菌器、恒溫恒濕箱等。

18、在a1中，無菌灌裝有胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)的樣品瓶進(jìn)行培養(yǎng)的條件為：將灌裝有胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)的樣品瓶置于25℃培養(yǎng)7d，35℃培養(yǎng)7d。

19、在a3中，氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)的試驗(yàn)參數(shù)為，首先溫度為35℃，然后抽真空-30kpa，維持時(shí)間30min，然后加壓30kpa，維持時(shí)間30min，設(shè)置氣溶膠發(fā)生器周期性開啟，以維持所需氣溶膠濃度105cfu/l。

20、在a4中，萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢菌液的接種量為0.1ml，萎縮芽孢桿菌atcc9372芽孢菌液的芽孢濃度低于100cfu/0.1ml。

21、一種多劑量滴眼劑瓶使用時(shí)物理阻菌系統(tǒng)阻菌性的測(cè)試方法，包括以下步驟：

22、s1.將配制和滅菌的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)無菌灌裝至滴眼劑瓶中作為樣品瓶，進(jìn)行培養(yǎng)并觀察是否渾濁，選擇未渾濁的樣品瓶進(jìn)行試驗(yàn)；

23、s2.將未渾濁的樣品瓶進(jìn)行銅綠假單胞菌菌液浸沒滴頭挑戰(zhàn)試驗(yàn)：

24、s2-1.制備銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液備用；

25、s2-2.將未渾濁的樣品瓶分為試驗(yàn)組、陽性組和陰性組并置于生物安全柜中；

26、s2-3.將s2-2中的試驗(yàn)組中的樣品瓶，保持滴孔完全浸入銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液中進(jìn)行浸沒滴頭挑戰(zhàn)試驗(yàn)，按壓瓶身，一滴一滴反復(fù)擠壓滴出胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)，使用無菌紗布擦除滴頭部位的挑戰(zhàn)菌液，使用75％酒精無菌酒精棉片擦拭滴頭，輕輕搖動(dòng)滴眼劑瓶，以確保胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)接觸所有試驗(yàn)組樣品瓶內(nèi)表面；將s2-2中的陽性組中的樣品瓶中接種銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液；將s2-2中陰性組中的樣品瓶不做處理；

27、s2-4.將上述s2-3中的試驗(yàn)組、陽性組和陰性組的樣品瓶，置于35℃培養(yǎng)，觀察滴眼劑瓶中的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)是否渾濁；

28、s2-5.按照周期重復(fù)s2-3～s2-4中的步驟；

29、s2-6.按照周期進(jìn)行浸沒滴頭挑戰(zhàn)試驗(yàn)后，將試驗(yàn)完成后的試驗(yàn)組、陽性組和陰性組的樣品瓶置于35℃培養(yǎng)，培養(yǎng)7天，觀察胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)是否渾濁。

30、在s1中，無菌灌裝有胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)的樣品瓶進(jìn)行培養(yǎng)的條件為：將灌裝有胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)的樣品瓶置于25℃培養(yǎng)7d，35℃培養(yǎng)7d。

31、在s2-1中，所制備的銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液為將銅綠假單胞菌atcc?9027標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)過夜，浸沒滴頭挑戰(zhàn)試驗(yàn)所需的銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液的濃度為106cfu/ml；在s2-3中，陽性組中的樣品瓶中接種銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液的接種量為0.1ml，接種銅綠假單胞菌atcc?9027菌懸液的濃度低于100cfu/0.1ml。

32、在s2-3中，反復(fù)擠壓滴出胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)的量為1ml，s2-5所述的周期為5個(gè)周期，每個(gè)周期的間隔時(shí)間為7d。

33、試驗(yàn)樣品為低密度聚乙烯多劑量滴眼劑瓶，規(guī)格5ml，無菌灌裝胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)8ml于樣品瓶中，以模擬滴眼劑瓶的使用，模擬使用滴完5ml，剩余3ml培養(yǎng)基，以進(jìn)行微生物的培養(yǎng)，試驗(yàn)組為10瓶、陽性組為1瓶、陰性組為1瓶。

34、s3.將未渾濁的樣品瓶進(jìn)行萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢氣溶膠回氣閥挑戰(zhàn)試驗(yàn)：

35、s3-1.配置好的萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢懸液備用；

36、s3-2.將未渾濁的樣品瓶分為試驗(yàn)組、陽性組和陰性組，將試驗(yàn)組的樣品瓶置于氣溶膠挑戰(zhàn)儀的密封艙內(nèi)，將陽性組和陰性組的樣品瓶置于生物安全柜中；

37、s3-3.將配置好的萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢懸液利用氣溶膠挑戰(zhàn)儀產(chǎn)生氣溶膠并輸送至密封艙內(nèi)部，設(shè)定氣溶膠挑戰(zhàn)儀的試驗(yàn)參數(shù)，包括壓力、溫度、維持時(shí)間和氣溶膠發(fā)生器周期性運(yùn)行時(shí)間；當(dāng)氣溶膠挑戰(zhàn)儀的密封艙內(nèi)達(dá)到所需芽孢氣溶膠濃度時(shí)，通過安全手套將s3-2中的試驗(yàn)組的樣品瓶按壓瓶身，一滴一滴反復(fù)擠壓滴出胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)；

38、s3-4.試驗(yàn)組的樣品瓶進(jìn)行氣溶膠回氣閥挑戰(zhàn)試驗(yàn)結(jié)束后，將試驗(yàn)組的樣品瓶取出使用75％酒精無菌酒精棉片反復(fù)擦拭滴眼劑瓶，輕輕搖動(dòng)滴眼劑瓶，以確保胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)接觸所有試驗(yàn)組的樣品瓶內(nèi)表面；將s3-2中的陽性組中的樣品瓶中接種萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢懸液；將s3-2中陰性組中的樣品瓶不做處理；

39、s3-5.將上述s3-4中的試驗(yàn)組、陽性組和陰性組的樣品瓶蓋上瓶蓋后，置于35℃培養(yǎng)，

40、觀察滴眼劑瓶中的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)是否渾濁；

41、s3-6.按照周期重復(fù)s3-3～s3-5中的步驟；

42、s3-7.按照周期進(jìn)行氣溶膠回氣閥挑戰(zhàn)試驗(yàn)后，將試驗(yàn)完成后的試驗(yàn)組、陽性組和陰性組的樣品瓶置于35℃培養(yǎng)，培養(yǎng)7天，觀察胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)是否渾濁。

43、在s3-3中，氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)時(shí)，試驗(yàn)參數(shù)設(shè)置為溫度為35℃，設(shè)置氣溶膠發(fā)生器周期性開啟，所需氣溶膠濃度105cfu/l；在s3-4中接種的萎縮芽孢桿菌atcc?9372芽孢菌液，其芽孢濃度低于100cfu/0.1ml。

44、在s3-3中，反復(fù)擠壓滴出胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)的量為1ml，s3-6所述的周期為5個(gè)周期，每個(gè)周期的間隔時(shí)間為7d。

45、本測(cè)試方法中，試驗(yàn)樣品為低密度聚乙烯多劑量滴眼劑瓶，規(guī)格5ml，無菌灌裝胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(tsb)8ml于樣品瓶中，以模擬滴眼劑瓶的使用，模擬使用滴完5ml，剩余3ml培養(yǎng)基，以進(jìn)行微生物的培養(yǎng)，試驗(yàn)組為10瓶、陽性組為1瓶、陰性組為1瓶。

46、培養(yǎng)基渾濁，即為有菌生長，即微生物通過滴眼劑瓶的阻菌系統(tǒng)污染了培養(yǎng)基。也可以在培養(yǎng)基渾濁之后，進(jìn)一步驗(yàn)證，是否為挑戰(zhàn)微生物對(duì)滴眼劑瓶內(nèi)的培養(yǎng)基發(fā)生了污染。具體操作是，對(duì)于陽性對(duì)照組及渾濁的測(cè)試樣品，對(duì)比觀察分離的有代表性的單菌落和挑戰(zhàn)菌菌落形態(tài)，另外需要對(duì)代表性菌落進(jìn)行革蘭氏染色，然后通過形態(tài)對(duì)比和革蘭氏鏡檢進(jìn)行判定是否為陽性。

47、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

48、1.本發(fā)明提供了一種氣溶膠挑戰(zhàn)儀，通過設(shè)計(jì)第一密封門和第二密封門，第一密封門可實(shí)現(xiàn)真空或加壓的高密閉狀態(tài)下的氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)，第二密封門可實(shí)現(xiàn)相對(duì)良好的密閉狀態(tài)下的氣溶膠挑戰(zhàn)試驗(yàn)；通過第一氣源泵及其管路實(shí)現(xiàn)了氣溶膠的產(chǎn)生和輸送，增加試驗(yàn)條件的嚴(yán)苛性，增加試驗(yàn)方法的靈敏度，通過第二氣源泵及其管路實(shí)現(xiàn)了密封艙內(nèi)的抽真空、加壓和快速泄壓功能，可設(shè)定抽真空和加壓的試驗(yàn)條件，模擬包裝系統(tǒng)在實(shí)際儲(chǔ)存和運(yùn)輸過程中，可能遇到的壓力變化，通過設(shè)置壓力傳感器，壓力值偏離設(shè)定值時(shí)，中控系統(tǒng)控制氣源泵，維持壓力的穩(wěn)定；通過采樣入口、采樣出口與采樣儀器或粒子計(jì)數(shù)器連接，實(shí)現(xiàn)常壓下，對(duì)氣溶膠發(fā)生器運(yùn)行的時(shí)間和產(chǎn)生的微生物氣溶膠粒子，以及微生物氣溶膠的濃度可維持的時(shí)間進(jìn)行驗(yàn)證；本氣溶膠挑戰(zhàn)儀可用于藥品、食品、醫(yī)療機(jī)構(gòu)滅菌包布等無菌透氣包裝無菌屏障系統(tǒng)的完整性測(cè)試。

49、2.本發(fā)明提供了一種多劑量滴眼劑瓶包裝密封完整性的測(cè)試方法，本測(cè)試方法在整體上對(duì)滴眼劑瓶的包裝的完整性進(jìn)行微生物測(cè)試，而不是僅對(duì)滴眼劑瓶的材料和密封處的測(cè)試，本方法的通過氣溶膠挑戰(zhàn)儀產(chǎn)生氣溶膠，增加試驗(yàn)條件的嚴(yán)苛性，增加試驗(yàn)方法的靈敏度，并設(shè)定密封艙內(nèi)的正負(fù)壓狀態(tài)，模擬包裝在實(shí)際滅菌，儲(chǔ)存運(yùn)輸中的可能形成的壓差；通過采用較小和可移動(dòng)的微生物能夠?qū)崿F(xiàn)穿透微小泄露，增加方法的靈敏度，可設(shè)定挑戰(zhàn)菌的存活適宜溫度，保證微生物的活性，增加試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

50、3.本發(fā)明提供了一種多劑量滴眼劑瓶使用時(shí)物理阻菌系統(tǒng)阻菌性的測(cè)試方法，本測(cè)試方法對(duì)物理阻菌系統(tǒng)的滴頭進(jìn)行菌液浸沒滴頭挑戰(zhàn)試驗(yàn)，實(shí)際模擬眼部發(fā)生感染時(shí)，液體的微生物是否會(huì)污染內(nèi)部滴眼劑；本測(cè)試方法對(duì)物理阻菌系統(tǒng)的回氣閥進(jìn)行氣溶膠回氣閥挑戰(zhàn)試驗(yàn)，實(shí)際模擬物理阻菌系統(tǒng)回氣時(shí)空氣中的微生物是否會(huì)污染內(nèi)部滴眼劑；在多劑量滴眼劑瓶的開封有效期內(nèi)，每周進(jìn)行試驗(yàn)，證明多劑量滴眼劑瓶開封有效期內(nèi)，物理阻菌系統(tǒng)的阻菌有效性；實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，滴完滴眼劑規(guī)格的全部內(nèi)裝培養(yǎng)基，證明阻菌系統(tǒng)每一次使用過程都能保證阻菌有效，本測(cè)試方法還能應(yīng)用到其他多劑量給藥系統(tǒng)，如飲劑，滴鼻劑等物理阻菌系統(tǒng)阻菌性能測(cè)試。