本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體涉及一種苯并噻吩類衍生物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、rho相關(guān)卷曲螺旋蛋白激酶(rocks)是一類屬于agc激酶家族的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是rho小gtp結(jié)合蛋白的下游效應(yīng)分子。rock蛋白包含n端激酶結(jié)構(gòu)域、rho蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域(rbd)、以及c端被鋅指樣基序域(crd)一分為二的ph結(jié)構(gòu)域。在經(jīng)典的rock信號(hào)通路中，rho?gtpase激活下游rock激酶，并進(jìn)一步磷酸化rock下游底物，從而重塑細(xì)胞骨架、誘導(dǎo)肌動(dòng)蛋白-肌球蛋白收縮及調(diào)節(jié)微管動(dòng)力。

2、rock激酶由rock1和rock2兩種亞型組成，二者在氨基酸序列上有65％的同源性，激酶結(jié)構(gòu)域處的氨基酸序列相似性達(dá)到92％。rock在全身組織中廣泛分布，其中rock1在非神經(jīng)性組織如血液、小腸和胸腺中表達(dá)更高，而rock2在腦、心臟和結(jié)腸中表達(dá)更高。

3、rock激酶參與了多種疾病的發(fā)生和發(fā)展，包括眼部疾病、心腦血管疾病、腫瘤轉(zhuǎn)移、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和糖尿病腎病等，成為治療多種疾病的重要靶標(biāo)。迄今為止，已有四種rock抑制劑成功通過臨床試驗(yàn)并上市：法舒地爾(fasudil)、利帕舒地爾(ripasudil)、netarsudil和kd025。此外，rock抑制劑y27632目前正在進(jìn)行治療角膜水腫的i期臨床試驗(yàn)，而at13148已完成用于治療晚期實(shí)體瘤的i期研究。然而，由于at13148的治療指數(shù)窄及藥代動(dòng)力學(xué)特性，其開發(fā)已被中止。

4、組蛋白去乙?；?hdacs)是一類重要的酶類，它們通過去除組蛋白上的乙酰基團(tuán)來調(diào)節(jié)染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和基因的表達(dá)。hdacs屬于一個(gè)大家族，包含多個(gè)亞類和成員，它們在細(xì)胞的多種生物學(xué)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。hdacs在細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、dna修復(fù)、細(xì)胞代謝等多種生物學(xué)過程中發(fā)揮作用。它們通過調(diào)控特定基因的表達(dá)，影響細(xì)胞的命運(yùn)和功能。根據(jù)序列同源性分為四類：i類hdac(hdac1、hdac2、hdac3、hdac8)，iia類hdac(hdac4、hdac5、hdac7、hdac9)，iib類hdac(hdac6、hdac10)，iii類hdac(sirtuins)，以及iv類hdac(hdac11)。

5、迄今為止，已經(jīng)開發(fā)了許多hdac抑制劑，其中六種已獲準(zhǔn)用于臨床：vorinostat(saha)、belinostat、panobinostat、pracinostat、chidamide和romidepsin。然而，hdac抑制劑作為單一藥物的治療應(yīng)用有限，過去的研究經(jīng)常將hdac抑制劑與其他蛋白抑制劑結(jié)合，形成雙靶點(diǎn)抑制劑，增強(qiáng)治療效果。

6、rock和hdac在多種病理過程中的相互作用為治療多種疾病提供了新的治療策略。這些酶在癌癥、炎癥、自身免疫性疾病、纖維化、移植排斥、與特定細(xì)胞因子如il-17、il-21和il-23相關(guān)的疾病、以及眼部、心腦血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、糖尿病腎病和皮膚疾病中扮演著關(guān)鍵角色。它們通過調(diào)節(jié)細(xì)胞行為、炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答，共同影響疾病的發(fā)生和發(fā)展。雙靶點(diǎn)抑制劑作為一種創(chuàng)新治療策略，通過同時(shí)作用于rock和hdac兩種關(guān)鍵酶，提供了一種更為有效的疾病治療方法。這種治療方法能夠針對疾病發(fā)展的多個(gè)環(huán)節(jié)，從而提高療效，同時(shí)降低因單靶點(diǎn)治療可能引發(fā)的副作用和耐藥性風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于現(xiàn)有技術(shù)中的不足，申請人設(shè)計(jì)出一種具有rock激酶抑制活性以及一種具有rock/hdac雙靶點(diǎn)抑制活性的苯并噻吩類衍生物或其藥用鹽，以及該苯并噻吩類衍生物或其藥用鹽的制備方法與應(yīng)用。

2、本發(fā)明提供了一種苯并噻吩類衍生物，所述苯并噻吩類衍生物結(jié)構(gòu)如式i所示：

3、

4、其中，r1基團(tuán)為苯環(huán)上其中一個(gè)位置取代的氫原子、鹵基、吡唑基、吡啶基、異喹啉基和吲哚基中的至少一種，

5、r2基團(tuán)為以下至少一種的基團(tuán)：氫原子、鹵基、芐基，5至7元的芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基，碳原子個(gè)數(shù)為1至6的烷基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷基羥肟酸、羥烷基、氰基、羥基、硝基、羧基。

6、優(yōu)選的，所述r1基團(tuán)為苯環(huán)上其中一個(gè)位置(苯并噻吩環(huán)的4-7號(hào)位置)取代的吡唑基、吡啶基、異喹啉基或吲哚基，

7、r2基團(tuán)為5至7元的芳基或碳原子個(gè)數(shù)為1至6的烷基。

8、具體的，所述苯并噻吩類衍生物為以下任意一個(gè)化合物：

9、

10、

11、

12、進(jìn)一步優(yōu)選的，所述苯并噻吩類衍生物為以下任意一個(gè)化合物：

13、

14、在本發(fā)明具體的實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物中24，27，28，34具有比陽性藥saha和y27632更好的抗mda-mb-231乳腺癌細(xì)胞增殖活性。且化合物24表現(xiàn)出更高效的rock1、2激酶抑制活性。以及化合物24具有比陽性藥saha更好的抗腫瘤免疫效果。

15、本發(fā)明提供了所述苯并噻吩類衍生物的制備方法，包括以下步驟：

16、(1)將帶有鹵代苯并噻吩-2-甲酸和具有相應(yīng)r2基團(tuán)的胺在n，n，n′，n′-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽作用下發(fā)生酰胺化反應(yīng)制得產(chǎn)物1；

17、(2)產(chǎn)物1與具有相應(yīng)r1基團(tuán)的硼酸發(fā)生鈴木反應(yīng)(也稱作suzuki偶聯(lián)反應(yīng)、suzuki-miyaura反應(yīng)(鈴木-宮浦反應(yīng)))制得所述苯并噻吩類衍生物；

18、所述r1基團(tuán)為苯環(huán)上其中一個(gè)位置取代的吡唑基、吡啶基、異喹啉基或吲哚基，

19、r2基團(tuán)為5至7元的芳基。

20、優(yōu)選的，步驟(1)中，鹵代苯并噻吩-2-甲酸和具有相應(yīng)r2基團(tuán)的胺的摩爾比為1：1.5；

21、反應(yīng)時(shí)，還添加有催化劑，所述催化劑為n-甲基咪唑；

22、步驟(2)中，將產(chǎn)物1和具有相應(yīng)r1基團(tuán)的硼酸溶于溶劑中，再加入催化劑和堿進(jìn)行反應(yīng)，

23、所述產(chǎn)物1和具有相應(yīng)r1基團(tuán)的硼酸的摩爾比為1：2；

24、所述溶劑為二惡烷和水的混合溶液，

25、所述催化劑為四(三苯基膦)鈀，

26、所述堿為碳酸鉀，

27、在本發(fā)明中，所述鈴木反應(yīng)的條件為：在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在反應(yīng)溫度為100℃下反應(yīng)16-20h。

28、本發(fā)明還提供了所述苯并噻吩類衍生物的制備方法，包括以下步驟：

29、(1)將帶有鹵代苯并噻吩-2-甲酸和具有相應(yīng)r2基團(tuán)的酯在n，n，n′，n′-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽作用下發(fā)生酰胺化反應(yīng)制得產(chǎn)物1；

30、(2)將產(chǎn)物1脫保護(hù)反應(yīng)，制得產(chǎn)物2；

31、(3)將產(chǎn)物2與o-2-四氫-2h-吡喃羥胺在n，n，n′，n′-四甲基氯甲脒六氟磷酸鹽作用下發(fā)生酰胺化反應(yīng)制得產(chǎn)物3；

32、(4)產(chǎn)物3與具有相應(yīng)r1基團(tuán)的硼酸發(fā)生鈴木反應(yīng)制得產(chǎn)物4；

33、(5)將產(chǎn)物4脫保護(hù)反應(yīng)，制得所述苯并噻吩類衍生物；

34、所述r1基團(tuán)為苯環(huán)上其中一個(gè)位置取代的吡唑基或吡啶基，

35、r2基團(tuán)為碳原子個(gè)數(shù)為1至6的烷基。

36、優(yōu)選的，步驟(1)中，鹵代苯并噻吩-2-甲酸和具有相應(yīng)r2基團(tuán)的酯的摩爾比為1：1.5；

37、反應(yīng)時(shí)，還添加有催化劑，所述催化劑為n-甲基咪唑；

38、步驟(2)和(5)中，所述脫保護(hù)反應(yīng)為將產(chǎn)物1或產(chǎn)物4溶于二氯甲烷中，加入和二氯甲烷等體積的三氟乙酸進(jìn)行；

39、步驟(3)中，產(chǎn)物2與o-2-四氫-2h-吡喃羥胺的摩爾比為1：1.5；

40、步驟(4)中，產(chǎn)物3與具有相應(yīng)r1基團(tuán)的硼酸溶于溶劑中，再加入催化劑和堿進(jìn)行反應(yīng)，

41、所述產(chǎn)物3與具有相應(yīng)r1基團(tuán)的硼酸的摩爾比為1：2；

42、所述溶劑為二惡烷和水的混合溶液，

43、所述催化劑為四(三苯基膦)鈀，

44、所述堿為碳酸鉀，

45、在本發(fā)明中，所述鈴木反應(yīng)的條件為：在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在反應(yīng)溫度為100℃下反應(yīng)16-20h。

46、本發(fā)明還提供了所述苯并噻吩類衍生物在制備用于治療和/或預(yù)防與rock和/或hdac異常活性相關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。

47、具體的，所述與rock和/或hdac異常活性相關(guān)的疾病選自癌癥、炎性疾病、自身免疫性疾病、纖維化疾病、移植排斥、與il-17、il-21和/或il-23過度分泌相關(guān)的疾病、眼部疾病、心腦血管疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病腎病和皮膚病中的至少一種。

48、更為具體的，所述與rock和/或hdac異?；钚韵嚓P(guān)的疾病為乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或銀屑病。抑制rock和/或hdac在癌癥方面可以同時(shí)抑制癌細(xì)胞的遷移、侵襲、增殖和血管生成，從而有效抑制腫瘤的生長和擴(kuò)散；在炎性疾病方面可以通過抑制炎癥細(xì)胞的遷移和炎癥基因的表達(dá)，從而減輕炎癥反應(yīng)；在自身免疫性疾病方面可以通過調(diào)控免疫細(xì)胞的活性和免疫相關(guān)基因的表達(dá)，減輕免疫系統(tǒng)對自身組織的攻擊。雖然實(shí)施例中僅展示了乳腺癌的治療效果，但基于rock和hdac在多種疾病中的作用機(jī)制，推測該苯并噻吩類衍生物也可用于治療其他與rock和/或hdac異?；钚韵嚓P(guān)的疾病，如子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病等。

49、在本發(fā)明具體的實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物中24，27，28，34具有比陽性藥saha和y27632更好的抗mda-mb-231乳腺癌細(xì)胞增殖活性。且化合物24表現(xiàn)出更高效的rock1、2激酶抑制活性。以及化合物24具有比陽性藥saha更好的抗腫瘤免疫效果。

50、本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包含所述的苯并噻吩類衍生物或其可藥用的鹽，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

51、可將活性化合物制成適合于通過任何適當(dāng)途徑給藥的形式，通過常規(guī)方法使用一種或多種藥學(xué)上可接受的載體來配制本發(fā)明的組合物。因此，本發(fā)明的活性化合物可以配制成用于口服給藥、注射(例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)給藥，吸入或吹入給藥的各種劑型。本發(fā)明的化合物也可以配制成例如片劑、硬或軟膠囊、水性或油性混懸液、乳劑、注射液、可分散性粉末或顆粒、栓劑、錠劑或糖漿等劑型。

52、作為一般性指導(dǎo)，活性化合物優(yōu)選是以單位劑量的方式，或者是以患者單劑自我給藥的方式。本發(fā)明化合物或組合物的單位劑量的表達(dá)方式可以是片劑、膠囊、扁囊劑、瓶裝藥水、藥粉、顆粒劑、錠劑、栓劑、再生藥粉或液體制劑。合適的單位劑量可以是0.1～1000mg。

53、本發(fā)明的藥物組合物除活性化合物外，可含有一種或多種輔料，所述輔料選擇以下成分：填充劑(稀釋劑)、粘合劑、潤濕劑、崩解劑或賦形劑等。根據(jù)給藥方法的不同，組合物可含有0.1至99％重量的活性化合物。

54、如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，藥物的給藥劑量依賴于多種因素，包括但并非限定于以下因素：所用具體化合物的活性、疾病的嚴(yán)重性、患者的年齡、患者的體重、患者的健康狀況、患者的行為、患者的飲食、給藥時(shí)間、給藥方式、排泄的速率、藥物的組合等；另外，最佳的治療方式如治療的模式、日用量或可藥用的鹽的種類可以根據(jù)傳統(tǒng)的治療方案來驗(yàn)證。

55、本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

56、本發(fā)明提供了一類結(jié)構(gòu)新穎的苯并噻吩類衍生物，具有rock激酶抑制活性以及具有rock/hdac雙靶點(diǎn)抑制活性。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的化合物均表現(xiàn)出較高活性，所制得的化合物具有良好的rock/hdac抑制活性，特別是在抗乳腺癌細(xì)胞增殖以及免疫方面表現(xiàn)出較好的活性。此外，本發(fā)明還提出了一種制備該苯并噻吩類衍生物的方法，該方法合成路線短，制備過程簡單、易操作，能夠滿足大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的需要。