本發(fā)明屬于中藥提取分離、植物化學(xué)及醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及從茄科植物地骨皮中分離得到的倍半萜類化合物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、糖尿病作為一種慢性代謝性疾病，具有發(fā)病率高、并發(fā)癥多的特點(diǎn)。糖尿病的發(fā)展常伴隨炎癥產(chǎn)生，神經(jīng)病變又是其最主要的慢性并發(fā)癥。神經(jīng)炎癥若未能得到有效控制，將導(dǎo)致疼痛、認(rèn)知障礙、運(yùn)動(dòng)障礙甚至動(dòng)脈粥樣硬化、腦卒中等癥狀，嚴(yán)重威脅糖尿病患者的生病安全。目前，治療糖尿病的藥物作用主要集中于疼痛管理和血糖控制，用于糖尿病引發(fā)的神經(jīng)炎癥的治療藥物所見甚少，因此開發(fā)效果明顯、副作用低的抗糖尿病神經(jīng)炎癥藥物迫在眉睫。

2、地骨皮(cortex?lycii)是茄科(solanaceae)植物枸杞(lycium?chinese?mill.)或?qū)幭蔫坭?lycium?barbarum?l.)的干燥根皮，其性寒、味甘，歸肺、肝、腎經(jīng)，具有涼血除蒸、清肺降火之效，主要用于陰虛潮熱、骨蒸盜汗、肺熱咳嗽、咯血、衄血及內(nèi)熱消渴等癥狀。現(xiàn)代研究表明其具有降血壓、降血脂、降血糖、抑菌抗炎、免疫調(diào)節(jié)及解熱鎮(zhèn)痛等藥理活性，其單味和復(fù)方制劑已在臨床應(yīng)用于糖尿病神經(jīng)病變的治療。目前從地骨皮中發(fā)現(xiàn)的化合物主要包括生物堿類、黃酮類、萜類、蒽醌類、有機(jī)酸類、糖苷類、環(huán)肽類。但其抗糖尿病神經(jīng)炎癥的活性成分尚未明確。

3、因此，進(jìn)一步分析并開發(fā)地骨皮中的抗糖尿病神經(jīng)炎癥成分，對(duì)于地骨皮的應(yīng)用及新的抗糖尿病神經(jīng)炎癥藥物或保健品的開發(fā)具有重要意義

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明以茄科枸杞屬植物地骨皮為研究目標(biāo)，對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研究，得到了新型倍半萜類化合物，并評(píng)價(jià)其抗神經(jīng)炎癥活性，均具有抗神經(jīng)炎癥活性。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、從茄科枸杞屬植物地骨皮(lycii?cortex)中分離得到的結(jié)構(gòu)如下所示的倍半萜類化合物：

4、

5、

6、作為本發(fā)明所述的優(yōu)選技術(shù)方案，結(jié)構(gòu)如下所示的倍半萜類化合物：

7、

8、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述的倍半萜類化合物的制備方法，包括：

9、步驟(1)、干燥的地骨皮藥材用75～90％乙醇進(jìn)行回流提取，提取液減壓濃縮除去溶劑，得到浸膏，浸膏吸附于等量硅藻土上，依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇洗脫，分別收集石油醚洗脫液、乙酸乙酯洗脫液和甲醇洗脫液，分別進(jìn)行減壓濃縮，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、甲醇部位；其中，干燥的地骨皮藥材和75～90％乙醇質(zhì)量體積比為1:10～1:20kg/l或g/ml；

10、步驟(2)、乙酸乙酯部位進(jìn)行硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯體系、二氯甲烷-甲醇體系為洗脫劑，合并相同流分，得到九個(gè)組分：fr.a～fr.i；

11、步驟(3)、組分fr.e進(jìn)行硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇體系為洗脫劑，得到十個(gè)餾分：fr.e1～fr.e10；fr.e6進(jìn)行制備hplc色譜(制備型高效液相色譜)，得到化合物11；fr.e8進(jìn)行制備hplc色譜，得到化合物10；fr.e9進(jìn)行制備hplc色譜，得到化合物3、化合物4、化合物5；

12、步驟(4)、組分fr.g進(jìn)行硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇體系為洗脫劑，得到十二個(gè)餾分：fr.g1～fr.g12；fr.g5進(jìn)行sephadex?lh-20凝膠柱色譜，以甲醇-水體系為洗脫劑，得到六個(gè)餾分：fr.g5a～fr.g5f；fr.g5a進(jìn)行制備hplc色譜，得到化合物1、化合物8；fr.g10進(jìn)行硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇體系為洗脫劑，得到八個(gè)餾分：fr.g10a～g10h；fr.g10b進(jìn)行制備hplc色譜，得到化合物6；fr.g10g進(jìn)行制備hplc色譜，得到化合物2、化合物7、化合物9。

13、步驟(1)中，優(yōu)選的，干燥的地骨皮藥材用75％乙醇進(jìn)行回流提取。

14、優(yōu)選的，干燥的地骨皮藥材和75～90％乙醇質(zhì)量體積比為1:20kg/l。

15、所述的提取的次數(shù)為2次，每次提取的時(shí)間為2h。

16、步驟(2)中，所述的石油醚-乙酸乙酯體系為石油醚:乙酸乙酯＝10:1→0:1v/v，二氯甲烷-甲醇體系為二氯甲烷-甲醇＝15:1→5:1v/v。

17、步驟(3)中，所述的二氯甲烷-甲醇體系為二氯甲烷:甲醇＝150:1→10:1v/v。

18、分離化合物11時(shí)，制備hplc色譜的條件為：ymc-pack?ods-a色譜柱(型號(hào)aa12s05-2510wt)，流動(dòng)相為乙腈:水＝50:50v/v，流速為7～10ml/min。

19、分離化合物10時(shí)，制備hplc色譜的條件為：ymc-pack?ods-a色譜柱(型號(hào)aa12s05-2510wt)，流動(dòng)相為乙腈:水＝30:70v/v，流速為7～10ml/min。

20、分離化合物3，化合物4，化合物5時(shí)，制備hplc色譜的條件為：ymc-pack?ods-a色譜柱(型號(hào)aa12s05-2510wt)，流動(dòng)相為乙腈:水＝30:70v/v，流速為7～10ml/min。

21、步驟(4)中，組分fr.g進(jìn)行硅膠柱色譜，所述的二氯甲烷-甲醇體系為二氯甲烷:甲醇＝100:1→20:1v/v。

22、所述的甲醇-水體系為甲醇:水＝80:20v/v。

23、分離化合物1和8時(shí)，制備hplc色譜的條件為：ymc-pack?ods-a色譜柱(型號(hào)aa12s05-2510wt)，流動(dòng)相為乙腈:水＝30:70v/v，流速為7～10ml/min。

24、fr.g10進(jìn)行硅膠柱色譜時(shí)，所述的二氯甲烷-甲醇體系為二氯甲烷:甲醇＝100:0→10:1v/v；

25、分離化合物6時(shí)，制備hplc色譜的條件為：ymc-pack?ods-a色譜柱(型號(hào)aa12s05-2510wt)，流動(dòng)相為乙腈:水＝30:70v/v，流速為7～10ml/min。

26、制備化合物2，化合物7，化合物9時(shí)，制備hplc色譜的條件為：ymc-pack?ods-a色譜柱(型號(hào)aa12s05-2510wt)，流動(dòng)相為乙腈:水＝30:70v/v，流速為7～10ml/min。

27、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述的倍半萜類化合物在制備治療神經(jīng)炎癥的藥物中的應(yīng)用。

28、本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述的倍半萜類化合物在制備治療糖尿病引發(fā)的神經(jīng)炎癥的藥物中的應(yīng)用。

29、本發(fā)明還提供了一種具有抗神經(jīng)炎癥的藥物組合物，所述的藥物組合物以所述的倍半萜類化合物為有效成分。

30、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

31、本發(fā)明從茄科枸杞屬植物地骨皮中分離得到了具有新型結(jié)構(gòu)的倍半萜類化合物。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，倍半萜類化合物具有抗神經(jīng)炎癥活性，在制備抗神經(jīng)炎癥的藥物中具有良好的應(yīng)用前景，同時(shí)可以作為先導(dǎo)化合物，為發(fā)掘潛在的抗神經(jīng)炎癥新藥提供了有力依據(jù)。

32、本發(fā)明倍半萜類化合物的分離方法簡(jiǎn)便可靠，效率高，可操作性強(qiáng)。