本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種甘草次酸小檗堿鹽的制備方法及其制備的產(chǎn)品和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、小檗堿(berberine，bb)，亦稱黃連素，是從中藥黃連中分離的一種季銨生物堿，是黃連抗菌的主要有效成分，為黃色針狀結(jié)晶，味苦。在植物界中分布較廣，大約有4個(gè)科10個(gè)屬內(nèi)發(fā)現(xiàn)有小檗堿存在。現(xiàn)有研究表明，小檗堿通過抑制增殖、促進(jìn)凋亡、阻滯周期、抑制腫瘤遷移和侵襲、誘導(dǎo)自噬、抗炎抗氧化以及免疫調(diào)節(jié)等方面產(chǎn)生抗腫瘤作用。全球已經(jīng)有超過80個(gè)臨床試驗(yàn)研究bb在抗腫瘤等各種疾病中的藥用價(jià)值，其水溶性低，口服生物利用度較差，限制了其臨床應(yīng)用，對bb進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造是解決這一困境的有效途徑。利用陰離子取代策略，借助有機(jī)酸對bb陰離子部分進(jìn)行置換，不僅可以保持bb母體結(jié)構(gòu)不變，同時(shí)改變bb的理化性質(zhì)協(xié)同增加其藥理活性。研究表明：bb經(jīng)檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸和富馬酸等有機(jī)酸進(jìn)行陰離子取代后可提高抗2型糖尿病活性。

2、甘草酸是常用中藥甘草的主要活性成分，甘草次酸(glycyrrhetinic?acid，ga)是甘草酸體內(nèi)活性代謝物，甘草次酸不僅具有抗炎、抗?jié)?、抗過敏、抗病毒、降血脂等作用，還具有一定的防癌功效。中國專利cn?101935334a公開了一種小檗堿甘草次酸對映體鹽及其制備方法應(yīng)用，該專利中記載了小檗堿甘草次酸對映體鹽能夠用于制備抗腫瘤藥物、治療糖尿病的藥物。但該專利公開的制備方法中小檗堿甘草次酸對映體鹽的收率約為50％，收率低，純度低。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題和不足，本發(fā)明目的旨在提供一種甘草次酸小檗堿鹽的制備方法及其制備的產(chǎn)品和應(yīng)用。

2、為實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明首先提供了一種甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，該方法包括以下步驟：

4、s1：將氫氧化小檗堿溶于溶劑a中，得到氫氧化小檗堿溶液；

5、s2：向所述氫氧化小檗堿溶液中加入甘草次酸，充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后收集反應(yīng)產(chǎn)物，即得甘草次酸小檗堿鹽。

6、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，步驟s2中，所述氫氧化小檗堿與甘草次酸的摩爾比為(0.5～2):1。

7、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述溶劑a為有機(jī)溶劑時(shí)，步驟s2的具體操作為：向所述氫氧化小檗堿溶液中加入甘草次酸，氫氧化小檗堿與甘草次酸的摩爾比為(0.5～2):1，在40～60℃攪拌反應(yīng)12～48h，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)去除溶劑a、干燥，得到甘草次酸小檗堿鹽。更加優(yōu)選地，所述氫氧化小檗堿與甘草次酸的摩爾比為1:1；所述反應(yīng)溫度為50℃，反應(yīng)時(shí)間為12h；所述溶劑a為甲醇，所述去除溶劑a的方法為減壓旋蒸。

8、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述溶劑a為水時(shí)，步驟s2的具體操作為：向所述氫氧化小檗堿溶液中加入甘草次酸，氫氧化小檗堿與甘草次酸的摩爾比為(0.5～2):1，邊加邊攪拌，甘草次酸全部加入后，在40～60℃反應(yīng)6～24h時(shí)間，反應(yīng)結(jié)束后過濾，收集沉淀物，沉淀物經(jīng)洗滌、干燥，得到甘草次酸小檗堿鹽。更加優(yōu)選地，所述氫氧化小檗堿與甘草次酸的摩爾比為1:1；所述反應(yīng)溫度為50℃，反應(yīng)時(shí)間為24h。

9、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，步驟s1中，所述氫氧化小檗堿的制備方法為：鹽酸小檗堿溶于溶劑b中，得到鹽酸小檗堿溶液；向所述鹽酸小檗堿溶液中加入堿性離子交換樹脂，混合，反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后過濾，收集濾液，去除濾液中的溶劑b，真空干燥，得到氫氧化小檗堿。

10、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述鹽酸小檗堿與堿性離子交換樹脂的交換比率為0.15mmol/g～1.5mmol/g。更加優(yōu)選地，所述鹽酸小檗堿與堿性離子交換樹脂的交換比率為0.15mmol/g。

11、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述堿性離子交換樹脂在使用前需進(jìn)行活化處理，所述活化處理的具體操作為：將堿性離子交換樹脂加入堿液中進(jìn)行浸泡處理，浸泡結(jié)束后洗滌；將洗滌后的堿性離子交換樹脂加入溶劑c中進(jìn)行浸泡處理，浸泡后烘干，得到活化堿性離子交換樹脂。

12、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述堿性離子交換樹脂為amberlysttma26oh，所述堿液為氫氧化鈉溶液。更加優(yōu)選地，所述氫氧化鈉溶液的濃度為5％。

13、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述溶劑b、溶劑c均為有機(jī)溶劑；更加優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇中的至少一種；最優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為甲醇。

14、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述去除濾液中溶劑b的具體操作為：將濾液在40～70℃進(jìn)行減壓旋蒸。更加優(yōu)選地，所述去除濾液中溶劑b的具體操作為：將濾液在50℃進(jìn)行減壓旋蒸。

15、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，步驟s1中，所述氫氧化小檗堿的制備方法為：

16、將鹽酸小檗堿溶解在溶劑d中，得到鹽酸小檗堿溶液；向鹽酸小檗堿溶液中加入氧化銀進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后過濾，得到氫氧化小檗堿溶液，去除氫氧化小檗堿溶液中的溶劑，得到氫氧化小檗堿。

17、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述鹽酸小檗堿與氧化銀的摩爾比為1:(1～20)；所述鹽酸小檗堿與氧化銀反應(yīng)的反應(yīng)溫度為40～60℃，反應(yīng)時(shí)間為6～24h。更加優(yōu)選地，所述鹽酸小檗堿與氧化銀的摩爾比為1:5；所述小檗堿與氧化銀反應(yīng)的反應(yīng)溫度為50℃，反應(yīng)時(shí)間為12h。

18、根據(jù)上述甘草次酸小檗堿鹽的制備方法，優(yōu)選地，所述溶劑d為水。

19、本發(fā)明第二方面提供了一種利用上述第一方面所述制備方法制備的甘草次酸小檗堿鹽產(chǎn)品。

20、本發(fā)明第三方面提供了上述第二方面所述甘草次酸小檗堿鹽產(chǎn)品在制備預(yù)防、治療或/和緩解肝癌藥物中的應(yīng)用。

21、本發(fā)明第四方面提供了一種藥物，所述藥物用于肝癌預(yù)防、緩解或/和治療肝癌，所述藥物包括甘草次酸小檗堿鹽納米粒，所述甘草次酸小檗堿鹽納米粒是以上述第二方面所述的甘草次酸小檗堿鹽產(chǎn)品為原料，通過納米沉淀法制備得到。

22、根據(jù)上述的藥物，所述甘草次酸小檗堿鹽納米粒制備方法的步驟如下：

23、a、將甘草次酸小檗堿鹽溶于二甲基亞砜中，得到甘草次酸小檗堿鹽溶液；

24、b、在超聲條件下將所述甘草次酸小檗堿鹽溶液滴加至吐溫-80溶液中，得到混合液，將混合液離心、去上清，得到納米粒；將納米粒冷凍干燥，即得甘草次酸小檗堿鹽納米粒(bb-gands)。

25、根據(jù)上述的藥物，優(yōu)選地，所述甘草次酸小檗堿鹽溶液中甘草次酸小檗堿鹽的濃度為0.01g/ml。

26、根據(jù)上述的藥物，優(yōu)選地，所述吐溫-80溶液的濃度為0.002g/ml。

27、根據(jù)上述的藥物，優(yōu)選地，所述超聲的功率為240w。

28、根據(jù)上述的藥物，優(yōu)選地，所述藥物為注射劑型。

29、本發(fā)明中通過氫氧化小檗堿與甘草次酸反應(yīng)制備甘草次酸小檗堿鹽的原理為：氫氧化小檗堿與甘草次酸中的羧酸根反應(yīng)，脫水得到甘草次酸小檗堿鹽。

30、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明取得的積極有益效果為：

31、(1)本發(fā)明先通過鹽酸小檗堿與離子交換樹脂進(jìn)行離子交換得到氫氧化小檗堿或?qū)Ⅺ}酸小檗堿與氧化銀反應(yīng)制備得到氫氧化小檗堿，然后再將氫氧化小檗堿與甘草次酸反應(yīng)，生成甘草次酸小檗堿鹽；與現(xiàn)有的制備方法相比，本發(fā)明甘草次酸小檗堿鹽的制備方法具有甘草次酸小檗堿鹽產(chǎn)率高(＞90％)，純度高(＞90％)的優(yōu)點(diǎn)，其中，甘草次酸小檗堿鹽的最高產(chǎn)率達(dá)到了96.78％，最高純度達(dá)到了97.82％，遠(yuǎn)高于現(xiàn)有的制備方法。

32、(2)本發(fā)明制備的甘草次酸小檗堿鹽能夠通過納米沉淀法制備成納米顆粒(bb-gands)，該納米顆粒的粒徑為307.8nm，zeta電位為-13.11±2.11mv，有利于bb-ga?nds體內(nèi)循環(huán)，同時(shí)bb-gands可以制備成注射劑型的藥物；本發(fā)明進(jìn)一步通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了bb-gands具有預(yù)防、緩解或/和治療肝癌的作用，由于甘草次酸具有靶向性與直接跨膜遞送的特性，因此，通過bb與ga的協(xié)同作用，使bb-gands具有肝癌細(xì)胞靶向性，極大地提高了bb-gands的對肝癌治療的靶向性和治療效果，而且bb-gands在體內(nèi)具有長效緩釋性能，無需額外載體，有效改善了鹽酸小檗堿通過尾靜脈注射的生物安全性。