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      高效降解組胺、緩解特應(yīng)性皮炎的植物乳桿菌SM5-2及其應(yīng)用的制作方法

      文檔序號(hào):40443716發(fā)布日期:2024-12-24 15:18閱讀:22來(lái)源:國(guó)知局
      高效降解組胺、緩解特應(yīng)性皮炎的植物乳桿菌SM5-2及其應(yīng)用的制作方法

      本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域,具體涉及一株高效降解組胺、緩解特應(yīng)性皮炎的植物乳桿菌sm5-2及其應(yīng)用。


      背景技術(shù):

      1、皮膚作為人體抵御外界因素侵?jǐn)_的第一道防線,具有屏障保護(hù)、結(jié)構(gòu)支撐、調(diào)節(jié)體溫以及維持人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等功能。特應(yīng)性皮炎(atopic?dermatitis,ad)是一種臨床上最常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病,以反復(fù)發(fā)作和嚴(yán)重瘙癢為主要特征,常與食物過(guò)敏、哮喘和過(guò)敏性鼻炎等其他過(guò)敏反應(yīng)有關(guān)。ad通常影響身體的特定部位如臉部、頸部、四肢及皮膚褶皺處,以皮膚干燥、紅斑、丘疹、苔蘚樣硬化、滲出和結(jié)痂為典型病理特征。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球約20%的兒童和10%的成年人受其影響。盡管ad是以過(guò)敏的形式影響皮膚系統(tǒng),但近年研究發(fā)現(xiàn)其與心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病以及肥胖等非過(guò)敏性疾病的高發(fā)病率也存在聯(lián)系。除了對(duì)患者軀體造成傷害外,ad也因其持續(xù)的瘙癢癥狀嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量以及工作效率,危害患者心理健康。因此,尋找有效、安全的預(yù)防和治療ad的方法對(duì)于提高我國(guó)居民生活水平有重要的意義。

      2、ad屬于ige抗體介導(dǎo)的i型超敏反應(yīng),當(dāng)過(guò)敏原入侵皮膚屏障后,被皮膚抗原遞呈細(xì)胞(antigen-presenting?cells,apc)攝取,隨后apc將過(guò)敏原遞呈至組織與血液中的初始輔助性t細(xì)胞(naive?helper?t?cell,th0),并誘導(dǎo)th0細(xì)胞向th2細(xì)胞分化增殖;分化后th2細(xì)胞分泌大量過(guò)敏性細(xì)胞因子如il-4、il-5、il-13,形成過(guò)度的th2型免疫反應(yīng)。一方面,th2分泌的細(xì)胞因子可募集更多的th0細(xì)胞并向th2分化,另一方面,th2細(xì)胞作用于b細(xì)胞,誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為分泌特異性ige的漿細(xì)胞;這些漿細(xì)胞來(lái)源的ige將激活皮膚肥大細(xì)胞(mast?cell,mc)表面的fc受體,使mc發(fā)生脫顆粒,釋放大量致敏效應(yīng)物質(zhì)組胺進(jìn)入血液與皮膚組織,引起皮膚紅腫、瘙癢等系列癥狀。flg基因功能缺失突變導(dǎo)致的遺傳因素;瘙癢-抓撓-嚴(yán)重瘙癢引起的表皮功能障礙;皮膚及腸道菌群失調(diào);th1/th2免疫調(diào)節(jié)失衡;氣候變化、空氣污染、社會(huì)心理壓力等環(huán)境影響,這些因素共同作用促進(jìn)了ad的發(fā)生。

      3、益生菌是一類能夠附著在胃腸道黏膜且具有多樣化臨床及免疫能力的活性微生物。目前研究指出,益生菌可通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)黏附位置、產(chǎn)生細(xì)菌素等抗菌物質(zhì)、阻止細(xì)菌生物膜的形成、促進(jìn)th1型細(xì)胞因子分泌,抑制th2型細(xì)胞因子水平,從而抑制病原菌生長(zhǎng),修復(fù)受損皮膚及腸道屏障,促進(jìn)失衡菌群平衡重建,恢復(fù)th1/th2免疫失調(diào),最終減輕及改善患者皮膚過(guò)敏及臨床癥狀。因此,特定的益生菌具有增強(qiáng)屏障功能、抑制病原體增殖以及調(diào)節(jié)th1/th2免疫應(yīng)答的作用,可被應(yīng)用于預(yù)防及治療特應(yīng)性皮炎。

      4、目前針對(duì)ad的治療方法包括回避療法、漂白浴、潤(rùn)膚劑、外用皮質(zhì)類固醇、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑、jak抑制劑等系列方法,但這些治療具有諸如皮膚萎縮、多毛、色素沉著、應(yīng)用部位產(chǎn)生灼燒感和瘙癢、生長(zhǎng)遲緩、骨質(zhì)疏松、鼻咽炎、頭痛、惡心、腹瀉等較嚴(yán)重的副作用。抗組胺藥如酮替芬(ketotifen)是組胺受體拮抗劑,這類藥物是目前治療ad的主要選擇。抗組胺藥雖然不能直接降解組胺,但它通過(guò)阻斷細(xì)胞表面組胺受體的激活,抑制肥大細(xì)胞的脫顆粒,一方面減少過(guò)敏物質(zhì)的釋放,另外一方面可以減少過(guò)敏細(xì)胞的再激活,進(jìn)而緩解皮膚炎癥。但在實(shí)際應(yīng)用中,該藥具有嗜睡的副作用,且對(duì)兒童認(rèn)知能力存在影響,因此限制了其長(zhǎng)期、廣泛應(yīng)用。隨著新一代測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn),研究發(fā)現(xiàn)腸道菌群失調(diào)通過(guò)促炎細(xì)胞因子增加腸道通透性,進(jìn)而促進(jìn)免疫失調(diào),導(dǎo)致包括ad、痤瘡以及銀屑病等皮膚疾病的發(fā)生。而益生菌具有增強(qiáng)上皮屏障的完整性、抑制病原體增殖以及重新恢復(fù)機(jī)體免疫平衡的作用,是預(yù)防和治療ad在內(nèi)的過(guò)敏性疾病的新手段。因此,研發(fā)出一種新的安全、有效、經(jīng)濟(jì)的微生態(tài)制劑具有廣闊的市場(chǎng)發(fā)展空間和較高的市場(chǎng)價(jià)值。


      技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

      1、本發(fā)明的第一個(gè)目的提供植物乳桿菌(lactiplantibacillusplantarum)sm5-2,保藏編號(hào)為gdmcc?no:64823。

      2、本發(fā)明的植物乳桿菌sm5-2可高效降解組胺,在體外明顯降低由組胺誘導(dǎo)的hacat細(xì)胞炎癥因子水平,體內(nèi)降低血清及皮膚組織中組胺水平,提高皮膚組織中inf-γ及il-10水平,恢復(fù)th1/th2免疫反應(yīng),有效緩解ad癥狀。

      3、本發(fā)明的第二個(gè)目的提供上述的植物乳桿菌sm5-2在如下任一中的應(yīng)用:

      4、1)制備預(yù)防和/或治療特應(yīng)性皮炎的產(chǎn)品;

      5、2)降解組胺。

      6、優(yōu)選地,所述的植物乳桿菌sm5-2是以植物乳桿菌sm5-2的活菌菌體、菌體破碎物、發(fā)酵液或發(fā)酵上清液的形式使用。

      7、本發(fā)明的第三個(gè)目的提供一種預(yù)防和/或治療特應(yīng)性皮炎的產(chǎn)品,其含有上述的植物乳桿菌sm5-2作為活性成分。

      8、優(yōu)選地,所述的產(chǎn)品為食品、藥品或保健品。

      9、優(yōu)選地,所述的藥品包括植物乳桿菌sm5-2、藥物載體和/或藥物輔料;所述食品為含有植物乳桿菌sm5-2的固體飲料或由植物乳桿菌sm5-2發(fā)酵生產(chǎn)得到的乳制品、豆制品或果熟制品。

      10、本發(fā)明的第四個(gè)目的提供一種鑒別上述的植物乳桿菌sm5-2的靶標(biāo)核苷酸序列,其核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

      11、該靶標(biāo)的特征在于其按實(shí)施方案操作,能特異區(qū)分該菌株與其他乳酸菌分離株。

      12、本發(fā)明的第五個(gè)目的提供一種鑒別上述的植物乳桿菌sm5-2的引物組,包括:5’-agcattccaggggttcaagg-3’和5’-taaccgtgttcccgttagcc-3’。

      13、本發(fā)明的第六個(gè)目的提供一種鑒別上述的植物乳桿菌sm5-2的方法,是以上述的引物組作為擴(kuò)增引物對(duì)待測(cè)菌進(jìn)行pcr反應(yīng)擴(kuò)增,如果擴(kuò)增出487bp的產(chǎn)物,則為植物乳桿菌sm5-2,如果沒(méi)有擴(kuò)增出487bp的產(chǎn)物,則不是植物乳桿菌sm5-2。

      14、本發(fā)明的第七個(gè)目的提供一種用于定量檢測(cè)上述的植物乳桿菌sm5-2的方法,是利用上述的引物組,采用pma-qpcr方法對(duì)菌株dna進(jìn)行定量檢測(cè)。

      15、使用者根據(jù)讀取反應(yīng)的ct值,帶入公式可快速、精準(zhǔn)獲得樣品中sm5-2的活菌定量。

      16、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):

      17、1、本發(fā)明中的植物乳桿菌sm5-2分離自酸奶樣本,為食品來(lái)源的優(yōu)良菌株。

      18、2、與傳統(tǒng)治療ad的化學(xué)藥物相比,本發(fā)明具有對(duì)生態(tài)環(huán)境無(wú)毒副作用、無(wú)殘留風(fēng)險(xiǎn),綠色安全。

      19、3、本發(fā)明使用方便、安全,在基因、細(xì)胞、動(dòng)物多水平證實(shí)均無(wú)對(duì)人體有潛在的危險(xiǎn),具有安全、高效的優(yōu)點(diǎn)。

      20、4、本發(fā)明的植物乳桿菌sm5-2是從164株益生菌中篩選出的具有良好的緩解ad癥狀的乳桿菌,具體表現(xiàn)為:

      21、(1)顯著降低組胺誘導(dǎo)的hacat細(xì)胞炎癥水平;

      22、(2)在體內(nèi)能顯著緩解ad紅斑、水腫、糜爛、結(jié)痂等相關(guān)癥狀;

      23、(3)在體內(nèi)具有降低血清、腸道及皮膚中的組胺水平,提高皮膚組織中il-10及inf-γ水平的作用。

      24、因此,植物乳桿菌sm5-2在制備預(yù)防或緩解ad的產(chǎn)品(如食品、藥品、化妝品)中,具有巨大的應(yīng)用前景。

      25、植物乳桿菌(lactiplantibacillusplantarum)sm5-2于2024年7月3日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(gdmcc),保藏地址:廣東省廣州市先烈中路100號(hào)大院59號(hào)樓5樓,郵編:510070,保藏編號(hào)為gdmcc?no:64823。

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