可變域的三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)相互作用以界SV h-'二聚物表面上的抗原結(jié)合位點(diǎn)。六 個(gè)CDR共同賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域（或僅包含對(duì)抗原具有 特異性的六個(gè)CDR中的三者的經(jīng)分離的V H* ^區(qū)）也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，不過(guò)親 和力通常比完整Fv片段低。
[0049] 除重鏈和輕鏈可變區(qū)以外，"Fab"片段還含有輕鏈的恒定域和重鏈的第一恒定域 (CH 1)。Fab片段起初在木瓜蛋白酶消化抗體后觀察到。Fab'片段與Fab片段的不同之處 在于F (ab'）片段在重鏈CH>t的羧基端含有若干其它殘基，所述殘基包括來(lái)自抗體鉸鏈區(qū) 的一個(gè)或一個(gè)以上半胱氨酸。F (ab'）2片段含有兩個(gè)Fab片段，所述Fab片段接近鉸鏈區(qū)由 二硫鍵連接，且起初在胃蛋白酶消化抗體之后觀察到。Fab'-SH在本文中是恒定域的半胱氨 酸殘基攜有游離硫醇基的Fab'片段的名稱?？贵w片段的其它化學(xué)偶合也是已知的。
[0050] 來(lái)自任何脊椎動(dòng)物物種的抗體（免疫球蛋白）的"輕鏈"可基于其恒定域的氨基 酸序列而被指定為兩個(gè)明確不同類型（稱為κ和λ)中的一者。視其重鏈恒定域的氨基 酸序列而定，免疫球蛋白可被指定成5個(gè)主要種類：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且數(shù)個(gè)這些 種類可進(jìn)一步分為子類（同型），例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。
[0051] "單鏈Fv"或"sFv"或"scFv"抗體片段包含抗體的V#P V尾，其中這些域以單個(gè) 多肽鏈的形式存在。在一些實(shí)施例中，F(xiàn)v多肽另外包含在V#P 之間的多肽連接子，所 述多肽連接子使sFv能夠形成用于抗原結(jié)合的所需結(jié)構(gòu)。對(duì)于sFv的綜述，參見普呂克通 (Pluckthun),單克隆抗體的藥理學(xué)（The Pharmacology of Monoclonal Antibodies),第 113卷（羅森堡（Rosenburg)和穆爾（Moore)編）施普林格出版公司（Springer-Verlag)， 紐約，第269頁(yè)到第315頁(yè)（1994)。
[0052] 術(shù)語(yǔ)"雙功能抗體"是指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片段，所述片段包含與 相同多肽鏈（V h-VJ中的輕鏈可變域（')連接的重鏈可變域（Vh)。通過(guò)使用過(guò)短而不允 許在同一鏈上的兩個(gè)域之間配對(duì)的連接子，所述域被迫與另一鏈的互補(bǔ)域配對(duì)，從而產(chǎn) 生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙功能抗體另外描述于例如EP 404, 097、WO 93/11161和霍林格 (Hollinger)等人（1993)美國(guó)科學(xué)院院刊（Proc. Natl. Acad. Sci.)美國(guó) 90:6444-6448 中。
[0053] "經(jīng)分離的"抗體是已鑒別且自其天然環(huán)境的組分中分離和/或回收的抗體。其天 然環(huán)境的組分可包括酶、激素和其它蛋白性或非蛋白性溶質(zhì)。在一些實(shí)施例中，經(jīng)分離的抗 體經(jīng)純化（1)達(dá)到如由洛利法（Lowry method)測(cè)定大于抗體的95重量％，例如大于99重 量％; (2)達(dá)到例如通過(guò)使用旋杯測(cè)序儀足以獲得N端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個(gè)殘基 的程度；或⑶達(dá)到通過(guò)凝膠電泳（例如SDS-PAGE)在還原或非還原性條件下且利用考馬 斯藍(lán)（Coomassie blue)或銀染色檢測(cè)均質(zhì)。由于抗體天然環(huán)境中的至少一種組分將不存 在，故術(shù)語(yǔ)"經(jīng)分離的抗體"包括在重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。在某些實(shí)施例中，經(jīng)分離的抗 體通過(guò)至少一個(gè)純化步驟制備。
[0054] 如本文所用，"免疫反應(yīng)性"是指抗體或其片段對(duì)氨基酸殘基序列（"結(jié)合位點(diǎn)"或 "抗原決定基"）具有特異性，然而如果與其它肽/蛋白質(zhì)交叉反應(yīng)，那么在其被調(diào)配以供人 類使用的投與的水平下無(wú)毒性。"抗原決定基"是指能夠與抗體或其抗原結(jié)合片段形成結(jié)合 相互作用的抗原部分?？乖瓫Q定基可以是線性肽序列（即，"連續(xù)的"）或可由非相連氨基 酸序列組成（即，"構(gòu)象的"或"不連續(xù)的"）。術(shù)語(yǔ)"優(yōu)選結(jié)合"意指結(jié)合劑以與其結(jié)合無(wú)關(guān) 氨基酸序列相比較大的親和力結(jié)合到結(jié)合位點(diǎn)上。
[0055] 抗MMP9抗體可從重鏈和輕鏈的CDR方面描述。如本文所用的術(shù)語(yǔ)"CDR" 或"互補(bǔ)決定區(qū)"打算意指在重鏈和輕鏈多肽兩者的可變區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的非相連抗原組 合位點(diǎn)。這些特定區(qū)已由以下描述：卡巴特（Kabat)等人，生物化學(xué)雜志（J. Biol. Chem.) 252:6609-6616 (1977);卡巴特等人，美國(guó)衛(wèi)生和公共服務(wù)部（U. S. D印t. of Health and Human Services), "免疫學(xué)相關(guān)蛋白質(zhì)的序列（Sequences of proteins of immunological interest) "（1991);喬塔（Chothia)等人，分子生物學(xué)雜志 196:901-917(1987);和麥卡勒姆（MacCallum)等人，分子生物學(xué)雜志 262:732-745(1996)， 其中定義包括當(dāng)針對(duì)彼此比較時(shí)氨基酸殘基的重疊或子集。盡管如此，涉及抗體的CDR或 接枝的抗體或其變異體的任一定義的應(yīng)用打算處于如本文中定義和使用的術(shù)語(yǔ)的范圍內(nèi)。 涵蓋如由以上引用的參考文獻(xiàn)中的每一者定義的CDR的氨基酸殘基作為比較闡述于以下 表1中。
[0056] 表 I :CDR 定義
[0057]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種MMP9結(jié)合蛋白，其包含 免疫球蛋白重鏈多肽或其功能片段，和 免疫球蛋白輕鏈多肽或其功能片段， 其中所述MMP9結(jié)合蛋白特異性結(jié)合MMP9。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白結(jié)合人類MMP9的抗 原決定基，所述抗原決定基包含氨基酸殘基R162、Elll、D113和1198。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到 人類MMP9上，所述抗體包含重鏈多肽。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到 人類MMP9上，所述抗體包含重鏈多肽，所述重鏈多肽包含SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5到 SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到 人類MMP9上，所述抗體包含輕鏈多肽，所述輕鏈多肽包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:9到 SEQ ID NO: 12的氨基酸序列。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到 人類MMP9上，所述抗體包含重鏈多肽和輕鏈多肽，所述重鏈多肽包含SEQ ID NO: 13到SEQ ID NO: 15的互補(bǔ)決定區(qū)CDR，所述輕鏈多肽包含SEQ ID NO: 16到SEQ ID NO: 18的CDR。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述重鏈多肽包含SEQ ID N0:13到SEQ ID NO: 15的互補(bǔ)決定區(qū)CDR，且所述輕鏈多肽包含SEQ ID NO: 16到SEQ ID NO: 18的CDR。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白與抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到 人類MMP9上，所述抗體包含重鏈多肽和輕鏈多肽，所述重鏈多肽包含選自由SEQ ID NO: 3 或SEQ ID NO:5到SEQ ID NO:8組成的群組的可變區(qū)，所述輕鏈多肽包含選自由SEQ ID N0:4或SEQ ID N0:9到SEQ ID NO: 12組成的群組的可變區(qū)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述重鏈多肽是IgG。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的MMP9結(jié)合蛋白，其中所述MMP9結(jié)合蛋白對(duì)MMP9的所述結(jié) 合抑制MMP9的酶促活性。
【專利摘要】本發(fā)明提供涉及結(jié)合到基質(zhì)金屬蛋白酶-9MMP9蛋白質(zhì)(MMP9也稱為明膠酶-B)上的結(jié)合蛋白(例如抗體和其抗原結(jié)合片段)的組合物和使用方法，其中所述結(jié)合蛋白包含免疫球蛋白Ig重鏈(或其功能片段)和Ig輕鏈(或其功能片段)。
【IPC分類】C07K16-40
【公開號(hào)】CN104530238
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410816632
【發(fā)明人】斯科特·艾倫·麥考利, 瑪利亞·沃伊斯貝戈
【申請(qǐng)人】吉聯(lián)亞生物科技有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2011年8月26日
【公告號(hào)】CA2808418A1, CN103140240A, CN103140240B, EP2608809A2, EP2608809A4, US8377443, US8501916, US9120863, US20120135004, US20130023654, US20130281675, US20130281676, WO2012027721A2, WO2012027721A3