一種用于冬季蛋雞養(yǎng)殖雞舍空氣凈化微生物菌劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物，特別是一種用于冬季蛋雞養(yǎng)殖雞舍空氣凈化微生物菌劑的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]一般情況下，蛋雞養(yǎng)殖多為封閉式飼養(yǎng)，蛋雞養(yǎng)殖既要保證雞舍內(nèi)的溫度，蛋雞養(yǎng)殖較適宜溫度為21°C?25°C，過高或過低都會(huì)影響蛋殼質(zhì)量，出現(xiàn)耗料多、產(chǎn)蛋少；還要保證雞舍內(nèi)空氣新鮮，雞舍內(nèi)通風(fēng)不良，易受氨氣、硫化氫等有害氣體的侵襲，直接影響蛋雞的健康，容易引發(fā)各種疾病。溫度控制是蛋雞養(yǎng)殖的空氣環(huán)境控制核心，通風(fēng)管理是蛋雞養(yǎng)殖空氣環(huán)境控制的關(guān)鍵，通風(fēng)和保溫的平衡及空氣質(zhì)量直接影響雞群的健康和生產(chǎn)力水平，蛋雞養(yǎng)殖要解決好溫度與空氣質(zhì)量問題的矛盾，注意正確處理通風(fēng)換氣與保暖的關(guān)系，特別是冬季有一個(gè)不易處理的問題是雞舍內(nèi)有害氣體的排除問題，因?yàn)橥L(fēng)過大不利于棚內(nèi)保溫，天氣寒冷，外界氣溫較低，大多數(shù)養(yǎng)殖戶注意到防寒保暖的重要性，然而在保暖的同時(shí)，往往忽視了通風(fēng)換氣，致使蛋雞雞舍內(nèi)有害氣體如氨氣、硫化氫等濃度升高，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致蛋雞中毒或引發(fā)其它疾病；還有的養(yǎng)殖戶注意到了通風(fēng)換氣，但冷空氣進(jìn)入雞舍后降低了雞舍內(nèi)溫度，容易引發(fā)一些疾病，通風(fēng)處理操作不當(dāng)如冷風(fēng)直接吹到雞群也容易使蛋雞患呼吸道疾病。冬季在不降低正常雞舍室溫的前提下，要想蛋雞雞舍空氣新鮮，避免蛋雞呼吸道病的發(fā)生，減少蛋雞雞舍內(nèi)有害氣體的含量成為一個(gè)寒冷季節(jié)蛋雞養(yǎng)殖的難題。
[0003]氨氣、硫化氫等為蛋雞養(yǎng)殖雞舍中主要有害氣體，主要來自蛋雞糞便、飼料殘?jiān)蛪|料等有機(jī)物腐敗、細(xì)菌分解等，處理方法主要有物理法(物理吸附法、稀釋擴(kuò)散法、遮蔽法)、化學(xué)法(氧化法、化學(xué)吸收法、化學(xué)吸附法)、生物法等三種，化學(xué)法和物理法處理費(fèi)用高，成本高，設(shè)備要求高，不易操作，處理中存在二次污染物，利用微生物降解蛋雞雞舍惡臭物質(zhì)而使雞舍氣體脫臭、凈化蛋雞雞舍空氣的方法，去除效率高，處理成本低廉，運(yùn)行維護(hù)容易，可避免二次污染。但至今未見有如何制備用于冬季蛋雞養(yǎng)殖雞舍空氣凈化微生物菌劑的公開報(bào)導(dǎo)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種用于冬季蛋雞養(yǎng)殖雞舍空氣凈化微生物菌劑的制備方法，可有效解決用于蛋雞雞舍空氣凈化微生物菌劑的制備，以滿足冬季蛋雞養(yǎng)殖的需要問題。
[0005]本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，由方法由以下步驟實(shí)現(xiàn):
A、制備沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas palustris) ASl.2180發(fā)酵液，方法是:
(I)、制備沼澤紅假單胞菌斜面保藏培養(yǎng)基:將磷酸氫二鉀(K2HPO4)0.9?1.lg、氯化鈣(CaCl2) 0.08 ?0.12g、碳酸氫鈉(NaHCO3) 2.8 ?3.2g、乙酸鈉(CH3COONa) 0.9 ?1.lg、氯化鎂(MgCl2)0.4?0.6g、氯化銨(NH4Cl)0.9?1.lg、氯化鈉(NaCl )0.9?1.lg、微量元素溶液0.9?1.lmL、維生素溶液0.9?1.11^、瑭泊酸鈉0.9?1.lg、酵母膏0.4?0.6g、蛋白胨0.4?0.6g、瓊脂14?16g和蒸飽水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勾，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值為6.8?7.2，成沼澤紅假單胞菌斜面保藏培養(yǎng)基；
所述的微量元素溶液是由四水合氯化亞鐵(FeCl2.4H20) 1.Sg、六水合氯化鈷(CoCl2.6H20) 0.25g、六水合二氯化鎳(NiCl2.6H20) 0.0lg、二水合氯化銅(CuCl2.2H20)0.0lg、四水合氯化錳(MnCl2.4H20) 0.70g、氯化鋅(ZnCl2) 0.lg、硼酸(H3BO3) 0.5g、二水合鉬酸鈉(Na2MoO4.2H20) 0.03g、五水亞砸酸鈉(Na2SeO3.5H20) 0.0lg和蒸餾水100mL混合均勻制成；
所述的維生素溶液是由生物素0.lg、煙酸0.35g、鹽酸硫胺素0.3g、對(duì)氨基苯甲酸0.2g、鹽酸卩比多胺0.lg、泛酸媽0.lg、維生素B12 0.05g和蒸飽水100mL混合均勾制成；
(2)制備沼澤紅假單胞菌繁殖種子培養(yǎng)基:將白玉米面1.8?2.2g、甘油0.9?1.lg、酵母膏0.9?1.lg、磷酸氫二鉀0.18?0.22g和蒸飽水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勾，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值為6.8?7.2，成沼澤紅假單胞菌繁殖種子培養(yǎng)基；
(3)制備沼澤紅假單胞菌發(fā)酵培養(yǎng)基:將白玉米面1.0?3.0g、酵母膏0.5?1.5g和蒸餾水100mL混合在一起，攪拌均勻，成沼澤紅假單胞菌發(fā)酵培養(yǎng)基；
(4)沼澤紅假單胞菌斜面培養(yǎng):將沼澤紅假單胞菌斜面保藏培養(yǎng)基中接種沼澤紅假單胞菌，接種量為培養(yǎng)基重量的3?5%。，28?30°C，照射，厭氧靜置培養(yǎng)5?7d,得到包括斜面保藏培養(yǎng)基的斜面菌種；
(5)沼澤紅假單胞菌擴(kuò)大培養(yǎng):將包括斜面保藏培養(yǎng)基的斜面菌種接種于沼澤紅假單胞菌繁殖種子培養(yǎng)基中，接種量為沼澤紅假單胞菌繁殖種子培養(yǎng)基重量的3?5%，28?30°C在轉(zhuǎn)動(dòng)下培養(yǎng)60?72h，得到擴(kuò)大培養(yǎng)的種子，革蘭氏染色陰性，鏡檢無雜菌；
(6)沼澤紅假單胞菌發(fā)酵培養(yǎng):將得到的擴(kuò)大培養(yǎng)的種子接種于沼澤紅假單胞菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為沼澤紅假單胞菌發(fā)酵培養(yǎng)基重量的6?8%，置入發(fā)酵罐中，罐壓0.03?
0.05Mpa，以1.5NL/min的流量通入無菌空氣，28?30°C在轉(zhuǎn)動(dòng)下發(fā)酵72?96h，質(zhì)檢沼澤紅假單胞菌菌數(shù)多5.0X 18個(gè)/mL，鏡檢無雜菌，終止發(fā)酵，即得沼澤紅假單胞菌發(fā)酵液；
B、制備枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis) ASl.108發(fā)酵液:
(O制備枯草芽孢桿菌斜面保藏培養(yǎng)基:將蛋白胨9?llg、牛肉膏2.5?3.5g、氯化鈉4?6g、瓊脂14?16g和蒸飽水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勾，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值為6.8?7.2，成枯草芽孢桿菌斜面保藏培養(yǎng)基；
(2)制備枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基:將蛋白胨9?llg、牛肉膏2.5?3.5g、氯化鈉4?6g和蒸飽水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勾，成枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基；
(3)制備枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基:將蛋白胨1.0?3.0g、葡萄糖2.0?4.0g、豆柏粉5.0 ?10.0g、K2HPO4 0.6 ?0.8g、MgSO4.7Η20 0.25 ?0.35g、CaCO3 0.09 ?0.llg、植物油
1.3?1.7 mL和蒸飽水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勾，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值為6.8?7.2，成枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基；
(4)枯草芽孢桿菌斜面培養(yǎng):將枯草芽孢桿菌斜面保藏培養(yǎng)基中接種枯草芽孢桿菌，接種量為培養(yǎng)基重量的3?5%。，30?32°C，靜置培養(yǎng)24?36h，得到包括斜面保藏培養(yǎng)基的斜面枯草芽孢桿菌種；
(5)枯草芽孢桿菌擴(kuò)大培養(yǎng):將包括斜面保藏培養(yǎng)基的斜面枯草芽孢桿菌種接種于枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基中，接種量為枯草芽孢桿菌種子培養(yǎng)基重量的3?5%，30?32°C在轉(zhuǎn)動(dòng)下培養(yǎng)18?24h，得到擴(kuò)大培養(yǎng)的種子，鏡檢無雜菌；
(6)枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng):將得到的擴(kuò)大培養(yǎng)的種子接種于枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為枯草芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基重量的3?5%，置入發(fā)酵罐中，罐壓0.03?0.05Mpa，以12.0NL/min的流量通入無菌空氣，30?32°C在轉(zhuǎn)動(dòng)下發(fā)酵24?32h，質(zhì)檢枯草芽孢桿菌菌數(shù)多3.0 X 19個(gè)/mL，芽孢形成率多85%，鏡檢無雜菌，終止發(fā)酵，得枯草芽孢桿菌發(fā)酵液；
C、制備德氏乳桿菌(Lactobacillusdelbrueckii) ASl.2624 發(fā)酵液:
(1)制備德氏乳桿菌斜面保藏培養(yǎng)基:將蛋白胨9?lig、牛肉膏9?lig、酵母膏4.5?5.5g、乙酸鈉4.5?5.5g、梓檬酸二胺1.8?2.2g、磷酸氫二鉀1.8?2.2g、乙酸鈉4.5?5.5g、葡萄糖 4.5 ?5.5g、吐溫-80 0.9 ?1.lg、MgSO4*7H20 0.18 ?0.22g、MnS04.H200.04?0.06g、CaC03 18?22g、瓊脂14?16g和蒸餾水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勻，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值為6.8?7.2 ;
(2)制備德氏乳桿菌種子培養(yǎng)基:將蛋白胨9?llg、牛肉膏9?llg、酵母膏4.5?5.5g、乙酸鈉4.5?5.5g、梓檬酸二胺1.8?2.2g、磷酸氫二鉀1.8?2.2g、乙酸鈉4.5?
5.5g、葡萄糖 4.5 ?5.5g、吐溫-80 0.9 ?1.lg、MgSO4*7H20 0.18 ?0.22g、MnS04.H200.04?0.06g、CaC03 18?22g和蒸飽水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勾，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值為6.8?7.2 ;
(3)制備德氏乳桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基:將酵母膏3.0?5.0g、葡萄糖10.0?30.0g、蛋白胨 3.0 ?5.0g、磷酸氫二鉀 0.18 ?0.22g、MgSO4.7Η20 0.04 ?0.06g、乙酸鈉 4.5 ?5.5g、CaCO3 20?25g和蒸餾水lOOOmL，混合在一起，攪拌均勻，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值為
6.8 ?7.2 ;
(4)德氏乳桿菌斜面培養(yǎng):將德氏乳桿菌斜面保藏培養(yǎng)基中接種德氏乳桿菌，接種量為培養(yǎng)基重量的3?5%。，35?37°C，靜置培養(yǎng)36?40h，得到包括斜面保藏培養(yǎng)基的斜面德氏乳桿菌種；
(5)德氏乳桿菌擴(kuò)大培養(yǎng):將包括斜面保藏培養(yǎng)基的斜面德氏乳桿菌種接種于德氏乳桿菌種子培養(yǎng)基中，接種量為德氏乳桿菌種子