一種用乙酰水楊酸提高三角褐指藻巖藻黃素含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)，尤其是涉及一種用乙酰水楊酸提高三角褐指藻巖藻 黃素含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 巖藻黃素（Fucoxanthin)是一類在葉綠體類囊體中參與光合作用光化學(xué)系統(tǒng)的 類胡蘿卜素，廣泛存在于褐藻中。在葉綠體中，巖藻黃素是以巖藻黃素葉綠體蛋白質(zhì)復(fù)合體 (FCPS)存在的。該復(fù)合物是由巖藻黃素、葉綠素a和幾種蛋白質(zhì)所組成的。近年來，由于巖 藻黃素具有抗氧化、抗癌、抗肥胖等有重要的作用，因此受到了廣泛的關(guān)注。巖藻黃素通過 調(diào)控細胞凋亡和細胞周期來實現(xiàn)，它能夠誘導(dǎo)細胞周期停滯和增強細胞間通訊來抑制癌細 胞的增殖。如今，由于缺少運動以及攝入大量的脂肪、糖類和高能量的物質(zhì)，肥胖已經(jīng)成為 普遍的現(xiàn)象。巖藻黃素在肥胖的治療中同樣有重要的作用。Hayato等研宄了巖藻黃素在肥 胖中作用的機理，認為巖藻黃素是通過激活UCP1蛋白（線粒體解偶聯(lián)蛋白），一方面促進 脂肪的分解，而另一方面則是在肝臟中生成DHA，從而降低膽固醇的含量。誘導(dǎo)子能夠?qū)υ?加次生代謝產(chǎn)物，通過對誘導(dǎo)子濃度的選擇可以調(diào)控次級代謝以及生物合成作用。乙酰水 楊酸就屬于內(nèi)源性誘導(dǎo)子，在植物防衛(wèi)反應(yīng)中起著信號作用。三角褐指藻（Phaeodactylum tricornutum)中不僅含有豐富的油脂，同樣含有巖藻黃素。
[0003]阿司匹林也叫乙酰水楊酸，是一種歷史悠久的解熱鎮(zhèn)痛藥，誕生于1899年3月6日。用于治感冒、發(fā)熱、頭痛、牙痛、關(guān)節(jié)痛、風(fēng)濕病，還能抑制血小板聚集，用于預(yù)防和治療 缺血性心臟病、心絞痛、心肺梗塞、腦血栓形成，也可提高植物的出芽率，應(yīng)用于血管形成術(shù) 及旁路移植術(shù)也有效。
[0004]本申請通過利用不同濃度的乙酰水楊酸處理三角褐指藻，來研宄三角褐指藻的生 長狀況，分離和提取三角褐指藻中的巖藻黃素并且利用HPLC對不同濃度的乙酰水楊酸處 理下的三角褐指藻中巖藻黃素含量的測定。進而得出最適乙酰水楊酸的濃度，提高巖藻黃 素的含量。為提高巖藻黃素含量提供有力的實驗依據(jù)和實驗手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種用乙酰水楊酸提高三角褐指藻巖藻黃素含量的方法。 該方法對提高三角褐指藻中的巖藻黃素含量效果顯著，操作簡單方便，費用低，生產(chǎn)周期 短，適于批量處理和工廠化生產(chǎn)。
[0006]本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0007]-種用乙酰水楊酸提高三角褐指藻巖藻黃素含量的方法，包括以下步驟：
[0008] 1)將滅菌海水與MAD母液混合得營養(yǎng)液；
[0009] 2)在營養(yǎng)液中加入三角褐指藻母液培養(yǎng)；
[0010] 3)培養(yǎng)2天后，加入乙酰水楊酸；
[0011] 4)繼續(xù)培養(yǎng)6天后手機藻液，離心分離，棄上清，收集藻體；
[0012] 5)將藻體冷凍干燥處理2天，研磨備用。
[0013] 本發(fā)明所述的MAD母液的配方為：KN03:10g，KH2P04:lg，F(xiàn)eS04.7H20 :0? 25g，MnS04: 0. 025g，EDTANa2:lg，V B1:0. 0006g，dH 20 :100ml。
[0014] 本發(fā)明所述的培養(yǎng)條件為：62. 5ymolphotons/ (m2 ?s)，25°C。
[0015] 所述的滅菌海水與MAD母液的體積比為1:1000。
[0016] 所述的營養(yǎng)液與三角褐指藻母液的體積比為1 : 10。
[0017] 步驟⑶中培養(yǎng)液加入乙酰水楊酸后乙酰水楊酸的濃度為10mg/L?25mg/L，優(yōu)選 的乙酰水楊酸的濃度為l〇mg/L。
[0018]步驟（5)冷凍干燥條件為：溫度_70°C，壓強999Pa。
[0019] 本發(fā)明的優(yōu)點在于：發(fā)明首次公開了從三角褐指藻中提取巖藻黃素，為提高巖藻 黃素含量還利用不同濃度的乙酰水楊酸處理三角褐指藻，尋找最適合的乙酰水楊酸處理濃 度，通過該濃度對三角褐指藻的誘導(dǎo)處理，其巖藻黃素的含量增加顯著。該發(fā)明操作簡單方 便，費用低，生產(chǎn)周期短，適于批量處理和工廠化生產(chǎn)。由于巖藻黃素對抗癌，高血糖，心血 管疾病，糖尿病都有顯著地功效，提高巖藻黃素的含量將滿足人們治病的需要，并且能夠提 高經(jīng)濟效益。
【附圖說明】
[0020] 圖1是是實施例利用不同濃度乙酰水楊酸處理三角褐指藻后生長曲線；
[0021] 圖2是是實施例不同濃度乙酰水楊酸處理三角褐指藻后巖藻黃素含量變化。
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，以下所述，僅是對本發(fā)明的較佳實施 例而已，并非對本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明 的技術(shù)實質(zhì)對以下實施例所做的任何簡單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0023] 一、實驗方法
[0024] 1、三角褐指藻的培養(yǎng)
[0025] 三角褐指藻由寧波大學(xué)海洋生物工程重點實驗室微藻室提供。取過濾且高溫滅菌 的海水，加入1:1000滅菌MAV母液。MAD母液的配方為：KN03:10g，KH2P04:lg，F(xiàn)eS04*7H20: 0? 25g，MnS04:0.0 2 5g，EDTANa2:lg，VB1 :0? 0006, dH20 :100ml。以1:10比例接入藻液，并 在62. 5 ymol photons/(m2，s)，25°C，12h/12h(黑暗/光照）條件下培養(yǎng)。每天分三個時 間段（8:00,12:00, 20:00)均勻搖藻體。
[0026] 2、三角褐指藻光密度回歸方程和生長曲線測定
[0027] 取1ml藻液，倍比稀釋，利用紫外可見分光光度計（6800型雙光束，英國bibby科 技有限公司）測定每組稀釋液的〇D_值，并且用血球計數(shù)法對各組樣品計數(shù)。將所得數(shù)據(jù) 建立三角褐指藻光密度回歸方程。每天同一時段分別取lml經(jīng)不同濃度乙酰水楊酸處理的 三角褐指藻并測定〇D_值，每組均設(shè)3個平行。根據(jù)光密度回歸方程得出各樣品的細胞密 度，建立經(jīng)不同濃度乙酰水楊酸處理三角褐指藻后的生長曲線。
[0028] 3、巖藻黃素的提取
[0029] 分別取80ml的處理三角褐指藻，分別作3個平行對其進行巖藻黃素的提取。將各 組藻體在4°C，52000g，離心lOmin，棄上清，收集藻體。冷凍干燥2d，稱重。研磨