酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ace抑制肽和免疫活性肽的工藝方法
【專利說(shuō)明】
[0001]一、
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及的是雜糧深加工領(lǐng)域，具體涉及的是酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和免疫活性肽的工藝方法。
[0002]二、
【背景技術(shù)】
心腦血管疾病、癌癥、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、阿爾茨海莫氏病和自身免疫缺陷等慢性病的發(fā)生已成為危害人類健康的殺手，尤其是心腦血管疾病和自身免疫缺陷等疾病的發(fā)生，僅2013年我國(guó)成年人高血壓患病率就高達(dá)19.3%，因自身免疫疾病而導(dǎo)致的癌癥、關(guān)節(jié)炎、肺部疾病等患病率約為2.7%。目前對(duì)于高血壓疾病的治療多采用合成藥物，這些合成藥物需要長(zhǎng)期服用，存在明顯的副作用，還會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生藥物依賴性；另外，在現(xiàn)代生活中，各種應(yīng)激所致的免疫力降低是目前人類普遍處于免疫力低下的“亞健康”狀態(tài)，因此如何預(yù)防和治療高血壓、提高機(jī)體免疫調(diào)節(jié)能力已成為全社會(huì)共同關(guān)注的焦點(diǎn)。目前科學(xué)家們正在積極尋求和研究天然、安全的保證身體健康、降壓效果好、以及調(diào)節(jié)人體疲勞、增強(qiáng)免疫力的保健功能食品。
[0003]綠豆為藥食兩用的豆科植物種子，其含有豐富蛋白質(zhì)、淀粉、礦物質(zhì)、維生素及人體必需氨基酸，其蛋白質(zhì)含量達(dá)19.5%-33.1%，主要是球蛋白。綠豆具有清熱解毒、消暑止渴、利尿消腫、解毒保肝等功效，具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫、降血脂等作用，因此具有良好的食用和藥用價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)綠豆中的蛋白質(zhì)內(nèi)服可保護(hù)胃腸粘膜，綠豆蛋白還可與有機(jī)磷農(nóng)藥、汞、砷、鉛化合物結(jié)合形成沉淀物，使之減少或失去毒性。但是目前我國(guó)對(duì)于綠豆的加工，大多數(shù)生產(chǎn)廠家都側(cè)重于綠豆淀粉的生產(chǎn)加工，而忽略綠豆蛋白的開(kāi)發(fā)，把它作為生產(chǎn)廢料或牲畜飼料，造成綠豆資源的浪費(fèi)，增加了綠豆淀粉的生產(chǎn)成本。
[0004]肽是蛋白質(zhì)的酶解產(chǎn)物，肽在原蛋白序列中沒(méi)有生物活性，在食品加工過(guò)程或胃腸消化過(guò)程中這部分肽被釋放出來(lái)后顯示出一定的生物活性。有關(guān)研究表明蛋白質(zhì)經(jīng)可控酶解作用可制備出具有促進(jìn)鈣吸收、降血壓、降膽固醇、抗氧化等作用的功能肽，而且食物源蛋白質(zhì)制備得到的肽具有天然、安全的特點(diǎn)。Gardner (1978)等人的研究表明在機(jī)體中小分子肽能夠在腸道被大量吸收，吸收后能夠更容易、更快的被人體利用合成所需的蛋白質(zhì)。因此對(duì)于生物活性肽的開(kāi)發(fā)是當(dāng)前國(guó)際食品界最熱門的研究課題和極具發(fā)展前景的項(xiàng)目。
[0005]在目前報(bào)道中，采用生物酶法作用于綠豆蛋白質(zhì)生產(chǎn)功能肽是目前應(yīng)用較多的方法，而且隨著對(duì)不同功能生物活性肽的制備方法、機(jī)理方面研究的深入，綠豆生物活性肽的開(kāi)發(fā)已逐步顯現(xiàn)出了極大的應(yīng)用前景。但目前對(duì)于綠豆生物活性肽的開(kāi)發(fā)多是局限于具有某一種功能的活性肽的生產(chǎn)，生產(chǎn)工藝單一，這對(duì)原料和能源造成了極大的浪費(fèi)。目前沒(méi)有同時(shí)生產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和免疫活性肽的報(bào)道。
[0006]三、

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是提供酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和免疫活性肽的工藝方法，這種酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和免疫活性肽的工藝方法用于解決現(xiàn)有技術(shù)中綠豆生物活性肽的開(kāi)發(fā)只局限于以生產(chǎn)某一種功能活性肽為目標(biāo)，生產(chǎn)工藝單一，資源和能源浪費(fèi)大的問(wèn)題。
[0007]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:這種酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和免疫活性肽的工藝方法:
(1)將綠豆蛋白粉溶解于小分子活化水，配置成質(zhì)量百分比濃度為7%-40%的蛋白溶液；將蛋白溶液置于90°C恒溫水浴鍋中預(yù)熱10~15 min后再冷卻至40°C -50°C ；
(2)綠?蛋白的酶解:將冷卻后的綠?蛋白溶液用lmol/LNaOH調(diào)節(jié)，使pH值在8.0~9.5 ;加入酶用量與底物蛋白質(zhì)量之比為1% - 3%的堿性蛋白酶，堿性蛋白酶的酶活力200000U,于45°C ~55°C水浴下水解2_4h，反應(yīng)過(guò)程中不斷加入I mol/L的NaOH，使pH保持恒定，待水解結(jié)束后調(diào)節(jié)PH到7.0, 950C ~100°C滅活lOmin，移出上清液；
(3)綠豆降血壓肽的制備:將步驟(2)制備的綠豆肽采用截留分子量分別為IkDa和3kDa的超濾膜進(jìn)行處理，將截留后的lkDa-3kDa的濾過(guò)液經(jīng)冷凍干燥即得綠豆ACE抑制肽粉末產(chǎn)品；
(4)綠豆免疫活性肽的制備:將步驟(3)處理后的剩余溶液采用中性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶繼續(xù)進(jìn)行水解2~3h，移出上清液；中性蛋白酶與風(fēng)味蛋白酶的質(zhì)量比為1:2 ；
(5)將步驟(4)制備得到的上清液采用IkDa的超濾膜截留分子量小于IkDa的綠豆肽，采用納濾膜進(jìn)行脫鹽處理，將處理后的濾液經(jīng)冷凍干燥即可得到綠豆免疫活性肽。
[0008]上述方案步驟(4)中的中性蛋白酶的酶用量與底物蛋白質(zhì)量之比為0.5%~1.5%,風(fēng)味蛋白酶的酶用量與底物蛋白質(zhì)量之比為1%~2%。
[0009]上述方案中步驟(4)得到的綠豆ACE抑制肽得率為47.14%。
[0010]上述方案中步驟(5)得到的綠豆免疫肽得率為32.8%。
[0011]有益效果:
1、本發(fā)明以綠豆淀粉生產(chǎn)的副產(chǎn)物綠豆蛋白為原料，分別采用不同蛋白酶先后進(jìn)行水解，一套工藝條件下制備出具有不同生物功能的綠豆肽，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、高效，資源利用率高，達(dá)到了真正意義上的節(jié)能減排。
[0012]2、本發(fā)明中的溶劑采用的是小分子活化水，可提高綠豆肽的得率。小分子活化水作用于綠豆蛋白，可改變綠豆蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)，從而使連接氨基酸的肽鍵結(jié)構(gòu)發(fā)生重組，也使得蛋白質(zhì)大分子長(zhǎng)肽鏈結(jié)構(gòu)變?yōu)樾》肿佣屉逆?，多肽鏈的氨基酸分子由?shù)目大的結(jié)構(gòu)變?yōu)閿?shù)目小的短鍵。
[0013]3、本發(fā)明得到的綠豆ACE抑制肽ACE活性抑制率高，采用ACE抑制活性的測(cè)定方法測(cè)定綠豆肽的ACE活性抑制率，圖2說(shuō)明，ACE活性抑制率越高說(shuō)明綠豆肽的降血壓效果越好。
[0014]四、【附圖說(shuō)明】:
圖1是本發(fā)明提供的酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和綠豆免疫活性肽的工藝方法流程圖； 圖2是不同級(jí)分綠豆肽的ACE抑制活性；
圖3是不同級(jí)分綠豆免疫活性肽的活性。
[0015]五、
【具體實(shí)施方式】
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明:
實(shí)施例1:
如圖1所示，這種酶法聯(lián)產(chǎn)綠豆ACE抑制肽和免疫活性肽的工藝方法，具體步驟如下:
(I)綠豆蛋白粉溶解于小分子活化水，配置成20%的蛋白溶液；將蛋白溶液置于90°C恒溫水浴鍋中預(yù)熱10 min ;將預(yù)熱后的綠豆蛋白溶液冷卻至50°C。
[0016](2)綠豆蛋白的酶解。將冷卻后的綠豆蛋白溶液用lmo