，用-11.0?-7.0°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:PX50，規(guī)格680*779mm)，使排放溫度達(dá)到-8.5?-6.5°C。開始懸液壓濾，控制過濾壓力為O?0.3MPa，過濾速度為20?90kg/min，濾出液溫度為-8.5?-6.5°C，上清直接經(jīng)過乙醇排放管路排放，當(dāng)組分V懸液罐重量低于200kg時，壓濾上清不再排放而直接進(jìn)入懸液罐從而形成一個循環(huán)管路以最大限度回收反應(yīng)罐及管路中的蛋白質(zhì)，循環(huán)1min后上清開始繼續(xù)經(jīng)過乙醇排放管路排放，待懸液全部壓濾完后，設(shè)定吹掃時間為30?150分鐘，用-11.0?-7.(TC預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，收集組分V沉淀；
[0044]所用的-9.0?-8.00C的42%乙醇配制方法為:每100kg注射用水加入_20°C以下的95%乙醇607.9kg，然后用_15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至-9.0?-8.0°C ；
[0045]步驟五:組分V沉淀溶解、過濾
[0046]將收集的組分V沉淀用沉淀重量5?7倍的0.0?4.0°C的注射用水溶解，在攪拌速率為50?10rpm下攪拌6小時以上至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)整pH值至4.50?4.70 ;用_15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至0.0?4.0°C ;繼續(xù)在攪拌速率為50?10rpm下攪拌反應(yīng)2?3小時得到溶解液，按每100kg溶解液加入娃藻土 1.0?2.0kg和珍珠巖1.0?2.0kg，然后在攪拌速率為50?10rpm下攪拌30分鐘，用0.0?4.0°C注射用水300?500kg對整個壓濾管道及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間10?30分鐘，用0.0?4.0°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:Steril S100，規(guī)格:349*384mm)，使排放溫度達(dá)到0.0?4.0°C，開始過濾，控制過濾壓力為O?0.3MPa，過濾速度為10?60kg/min，濾出液溫度為0.0?5.0°C，溶解液壓完設(shè)定吹掃時間10?30分鐘，用50?200kg 0.0?4.0°C注射用水對壓濾機(jī)進(jìn)行清洗回收，用0.0?4.0°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，回收液并入濾液罐，設(shè)定吹掃時間為10?30分鐘，用0.0?4.0°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，濾液用0.4mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.50?7.30，過濾沉淀高壓滅菌廢棄；
[0047]步驟六:超濾透析、濃縮
[0048]用膜規(guī)格為1KD超濾器將過濾液濃縮至蛋白質(zhì)含量為8?12% (m/v)，用4?6倍體積的2?8°C注射用水連續(xù)等體積透析，再用0.5mol/L氫氧化鈉溶液或pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)整制品pH值至6.60?6.90，用注射用水稀釋控制最終蛋白質(zhì)含量為20.0?50.0g/L ；
[0049]步驟七:加溫純化、過濾
[0050]將超濾后濃度為20.0?50.0g/L的蛋白溶液加溫至50.0?55.0°C，恒溫I?3小時，恒溫結(jié)束降溫至18?26°C，轉(zhuǎn)移至白蛋白精制罐，用pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)制品pH值至4.50?4.70，繼續(xù)降溫至0.0?0.5°C，用-20°C以下95%乙醇調(diào)節(jié)乙醇終濃度至11?13% (v/v)，用-15°C冷媒調(diào)節(jié)最終溫度至-3.5?-2.5°C，在攪拌速率為50?10rpm下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2小時以上，反應(yīng)完全后按每100kg懸液加入珍珠巖1.0?2.0kg,在攪拌速率為50?10rpm下攪拌30分鐘，用-4.0?-3.0°C的12% (v/v)乙醇300?500kg對整個壓濾管道及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間10?30分鐘，用-4.0?0.0°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:Steril S100，規(guī)格:349*384mm)，使排放溫度達(dá)到-3.5?-2.5°C，開始過濾，控制過濾壓力為O?0.2MPa，過濾速度為10?60kg/min，濾出液溫度為-3.4?-2.(TC，懸液壓濾完設(shè)定吹掃時間為10?30分鐘，用50?200kg 12%乙醇對壓濾機(jī)進(jìn)行清洗回收，回收液并入濾液罐，用-4.0?0.0°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(10?30分鐘)，用0.4mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)過濾上清液PH值至6.60?6.90，調(diào)節(jié)最終溫度至-3.0?-2.0°C ;
[0051]所用的-4.0?-3.00C的12%乙醇配制方法為:每100kg注射用水加入_20°C以下的95%乙醇122.1kg，用-15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至-4.0?-3.0°C ；
[0052]步驟八:超濾透析、濃縮、配制
[0053]將pH調(diào)節(jié)后的蛋白液經(jīng)超濾濃縮至蛋白質(zhì)含量為10?14% (m/v)(進(jìn)口壓力(4.0bar,回流壓力彡2.0bar)，然后依次用2?8°C的4?6倍濃縮后制品重量的0.9%NaCl溶液和4?6倍濃縮后制品重量的0.5% NaCl溶液進(jìn)行連續(xù)等量透析，濃縮蛋白濃度至20.0?21.0% (m/v)，按每克蛋白質(zhì)加入0.168mmol (即27.92mg)辛酸鈉的比例加入辛酸鈉，用0.5mol/L鹽酸溶液或0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整最終pH值至6.50?7.30，再進(jìn)行59.5?60.5°C恒溫10小時巴氏病毒滅活和除菌分裝，即可得到人血白蛋白半成品。
[0054]所生產(chǎn)的人血白蛋白半成品，其質(zhì)量符合以下標(biāo)準(zhǔn)【2010年版《中國藥典》(三部)】:
[0055]①蛋白質(zhì)含量應(yīng)彡20%;
[0056]②純度應(yīng)不低于蛋白質(zhì)總量的96.0% ;
[0057]③pH值應(yīng)為6.5?7.3 ;
[0058]④殘余乙醇含量應(yīng)不高于0.025g/100ml ；
[0059]實施例1
[0060]本實施例提供了一種從組分IV-2沉淀中提取人血白蛋白的方法，包括以下步驟:[0061 ] 步驟一:溶解組分IV-2沉淀
[0062]將105kg的組分IV-2沉淀用1.5°C的含8.03kg氯化鈉和含6.62kg枸櫞酸鈉的水溶液945kg攪拌6小時以上至完全溶解；
[0063]步驟二:分離組分IV-1沉淀
[0064]用pH4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液(醋酸-醋酸鈉緩沖液配制方法為:稱取1088.6g三水合醋酸鈉，倒入1L大立瓶中，用適量注射用水溶解，搖溶后，量取2288ml冰醋酸，加入到溶液中，加注射用水至邊L，混勻即得，下同)1.6kg調(diào)節(jié)步驟一的組分IV-2沉淀的溶解液pH值至6.10，用-15°C冷媒將溫度降至-0.9°C，加入-21.8°C的95% (v/v)乙醇501.7kg，用0.5mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至6.25，用_15°C冷媒調(diào)節(jié)懸液溫度至-4.7 V，在攪拌速度為82rpm下攪拌反應(yīng)3小時，用40%平衡液1039Kg對整個壓濾管路及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間32分鐘，用-4.8°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:PX50，規(guī)格680*779mm)，使排放溫度達(dá)到_4.4°C。開始懸液壓濾，控制過濾壓力為0.22MPa，過濾速度為68kg/min，濾出液溫度為-4.2°C，懸液壓完設(shè)定吹掃時間42分鐘，用預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，用40%平衡液879Kg對壓濾機(jī)進(jìn)行清洗回收，回收液并入上清液罐，設(shè)定吹掃時間95分鐘，再使用-5.6°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣進(jìn)行吹干，收集組分IV-1上清液2357.7kg，組分IV-1沉淀89.3kg高壓滅菌后廢棄；
[0065]所用的40%平衡液配制方法為:每100kg注射用水加入_20°C以下的95% (v/v)乙醇563.3kg得到40% (v/v)的乙醇；然后在每1000kg 40% (v/v)乙醇中加入枸櫞酸鈉3.66kg和氯化鈉4.18kg ;用pH4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH值至6.95 ;用_15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至-5.(TC ;
[0066]步驟三:分離組分IV-2沉淀
[0067]用pH4.0的醋酸-醋酸鈉緩沖液2.8kg調(diào)節(jié)組分IV-1上清液pH值至5.81，加入-20.70C的95% (v/v)乙醇74.7kg，加完乙醇后用0.5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)整pH值至5.83，用-15°C冷媒調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度至-6.5°C，在攪拌速度為71rpm下攪拌反應(yīng)2小時，反應(yīng)完全后加入娃藻土 6.1kg和珍珠巖6.1kg，以攪拌速度為71rpm攪拌反應(yīng)30分鐘，用42%平衡液1llKg對整個壓濾管路及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間31分鐘，用-5.(TC預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:PX50，規(guī)格680*779mm)，使排放溫度達(dá)到-4.8°C，開始懸液壓濾，控制過濾壓力為0.2MPa，過濾速度為62kg/min，濾出液溫度為-4.7°C，懸液壓完設(shè)定吹掃時間46分鐘，用預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，用42%平衡液871Kg對壓濾機(jī)進(jìn)行清洗回收，回收液并入壓濾上清液罐，設(shè)定吹掃時間80分鐘，再使用-4.9°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣進(jìn)行吹干，收集組分IV-2上清液3289.2kg，組分IV-2沉淀29.2kg高壓滅菌廢棄；
[0068]所用的42%平衡液配制方法為??每1000kg注射用水加入_20°C以下的95%乙醇607.9kg，得到42% (v/v)的乙醇，然后在每1000kg 42%的乙醇中加入枸櫞酸鈉3.67kg和氯化鈉3.14kg ;用pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH值至5.77 ;用-15 °C冷媒調(diào)節(jié)溫度至-6.10C ；
[0069]步驟四:分離組分V沉淀
[0070]用4mol/L醋酸和95 %乙醇混合液(每10kg注射用水，加入28.9L冰醋酸和77.4kg乙醇)共49.3kg調(diào)節(jié)組分IV-2上清液的pH值至4.81，用_15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至-8.1°C，在攪拌速度為73rpm下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.3小時，用-8.3°C的42% (v/v)乙醇1435kg對整個壓濾管路及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間30分鐘，用-9.6°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:PX50，規(guī)格680*779mm)，使排放溫度達(dá)到-7.20C。開始懸液壓濾，控制過濾壓力為0.2IMPa,過濾速度為80kg/min，濾出液溫度為-7.10C，上清直接經(jīng)過乙醇排放管路排放，當(dāng)組分V懸液罐重量低于200kg時，壓濾上清不再排放而直接進(jìn)入懸液罐從而形成一個循環(huán)管路以最大限度回收反應(yīng)罐及管路中的蛋白質(zhì)，循環(huán)1min后上清開始繼續(xù)經(jīng)過乙醇排放管路排放，待懸液全部壓濾完后，設(shè)定吹掃時間為102分鐘，用-8.2°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，收集組分V沉淀31.7kg ；
[0071]所用的-8.30C的42%乙醇配制方法為??每1000kg注射用水加入-20°C以下的95%乙醇607.9kg，然后用_15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至-8.3°C ；
[0072]步驟五:組分V沉淀溶解、過濾
[0073]將收集的組分V沉淀用1.60C的注射用水190.3kg溶解，在攪拌速率為75rpm下攪拌6.9小時至沉淀完全溶解，用pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液1.4kg調(diào)整pH值至4.60 ；用_15°C冷媒調(diào)節(jié)溫度至1.00C ;繼續(xù)在攪拌速率為70rpm下攪拌反應(yīng)2.3小時得到溶解液，加入娃藻土 0.3kg和珍珠巖0.3kg，然后在攪拌速率為80rpm下攪拌30分鐘，用2.0°C注射用水364kg對整個壓濾管道及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間24分鐘，用1.8°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:Steril S100，規(guī)格:349*384mm)，使排放溫度達(dá)到2.5°C，開始過濾，控制過濾壓力為0.16MPa，過濾速度為25kg/min，濾出液溫度為2.6°C，溶解液壓完設(shè)定吹掃時間20分鐘，用123kg的1.7°C注射用水對壓濾機(jī)進(jìn)行清洗回收，用2.4°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，回收液并入濾液罐，設(shè)定吹掃時間為24分鐘，用2.3°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板，得到濾液346.4kg，用0.4mol/L的氫氧化鈉溶液38.1kg調(diào)節(jié)pH值至6.75，過濾沉淀高壓滅菌廢棄，得到過濾液，過濾液中蛋白質(zhì)含量為
1.65% (m/v)(即 6.34kg)；
[0074]步驟六:超濾透析、濃縮
[0075]用膜規(guī)格為1KD超濾器將步驟五的過濾液濃縮至蛋白質(zhì)含量為9.4% (m/v)，濃縮后重量為67.5kg，接著用337.5kg的4.5 °C注射用水連續(xù)等體積透析，再用pH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)整制品PH值至6.71，用注射用水稀釋至最終蛋白質(zhì)含量為3.2% (m/V)(即 198.3kg)；
[0076]步驟七:加溫純化、過濾
[0077]將步驟六超濾后的蛋白溶液加溫至52.9°C，恒溫1.9小時，恒溫結(jié)束降溫至22°C，轉(zhuǎn)移至白蛋白精制罐，用PH4.0醋酸-醋酸鈉緩沖液調(diào)節(jié)制品pH值至4.57，繼續(xù)降溫至0.2°C，用-21.0°C的95%乙醇24.2kg調(diào)節(jié)乙醇終濃度至12% (v/v)，加完乙醇后總重量為222.5kg，用-15 °C冷媒調(diào)節(jié)最終溫度至-3.4°C，在攪拌速率為64rpm下繼續(xù)攪拌反應(yīng)2.8小時，反應(yīng)完全后加入珍珠巖0.33kg，在攪拌速率為60rpm下攪拌30分鐘，用-3.4°C的12% (v/v)乙醇413kg對整個壓濾管道及壓濾機(jī)進(jìn)行平衡降溫，設(shè)定吹掃時間15分鐘，用-3.4°C預(yù)冷潔凈壓縮空氣吹干濾板(德國Begerow公司生產(chǎn)，型號:Steril S100，規(guī)格:349*384mm)，使排放溫度達(dá)到-2.7°C，開始過濾，控制過濾壓力為0.llMPa，過濾速度為30kg/min，濾出液溫度為-3.2°C，懸液壓濾完設(shè)定吹掃時間為20分鐘，用150kg的12%乙醇對