應(yīng)釜中進行， 并且其中反應(yīng)條件相較蒸汽爆破的方法降低了高溫高壓反應(yīng)釜的溫度及壓強，有助于降低 能耗；并且增加了微藻多糖的產(chǎn)率，過程方法容易，利于實現(xiàn)微藻油脂和多糖多聯(lián)產(chǎn)過程的 放大應(yīng)用。
[0048] 實施例3
[0049] 一種同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0050] 步驟一、將小球藻用纖維素酶進行處理獲得小球藻預處理物；其中，所述纖維素酶 的添加量占所述微藻的質(zhì)量百分比為〇. 6 % ;將微藻用纖維素酶進行混合處理的pH值為 5. 6,反應(yīng)溫度為30°C，反應(yīng)3. 5h ;
[0051] 步驟二、將所述小球藻預處理物在溫度為100°C和壓強為0. 15MPa的條件下處理 30min獲得小球藻二級預處理物，將所述小球藻二級預處理物用于提取微藻油脂及微藻多 糖；
[0052] 步驟三、向所述小球藻二級預處理物中添加入氯仿進行萃取微藻油脂，分
[0053] 離出富含有微藻多糖的小球藻多糖液；
[0054] 步驟四、將所述小球藻多糖液過濾去除小球藻細胞殘渣；
[0055] 步驟五、向所述小球藻多糖液中添加三氯乙酸沉淀去除蛋白及核酸雜質(zhì)獲得二級 小球藻多糖液；
[0056] 步驟六、將所述二級小球藻多糖液離心、收集上清，之后向其中加入體積分數(shù)為 80 %的乙醇反應(yīng)至沉淀不再增加為止，獲得微藻粗多糖。
[0057] 在上述方案中，微藻可直接使用微藻液或者濕藻泥進行微藻胞內(nèi)多糖和油脂的提 取，減少了微藻生物質(zhì)干燥環(huán)節(jié)，降低了提取成本；步驟二可以在高溫高壓反應(yīng)釜中進行， 并且其中反應(yīng)條件相較蒸汽爆破的方法降低了高溫高壓反應(yīng)釜的溫度及壓強，有助于降低 能耗；并且增加了微藻多糖的產(chǎn)率，過程方法容易，利于實現(xiàn)微藻油脂和多糖多聯(lián)產(chǎn)過程的 放大應(yīng)用。
[0058] 實施例4
[0059] -種同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0060] 步驟一、將斜生柵藻用植物細胞壁降解酶進行處理獲得斜生柵藻預處理物；其中， 所述植物細胞壁降解酶的添加量占所述微藻的質(zhì)量百分比為0. 8% ;將微藻用植物細胞壁 降解酶進行混合處理的PH值為5. 8,反應(yīng)溫度為35°C，反應(yīng)4h ;
[0061] 步驟二、將所述斜生柵藻預處理物在溫度為110°C和壓強為0. 20MPa的條件下處 理30min獲得斜生柵藻二級預處理物，將所述斜生柵藻二級預處理物用于提取微藻油脂及 微藻多糖；
[0062] 步驟三、向所述斜生柵藻二級預處理物中添加入有機萃取劑進行萃取微藻油脂， 分離出富含有微藻多糖的斜生柵藻多糖液；
[0063] 步驟四、將所述斜生柵藻多糖液過濾去除斜生柵藻細胞殘渣；
[0064] 步驟五、向所述斜生柵藻多糖液中添加三氯乙酸沉淀去除蛋白及核酸雜質(zhì)獲得二 級斜生柵藻多糖液；
[0065] 步驟六、將所述二級斜生柵藻多糖液離心、收集上清，之后向其中加入體積分數(shù)為 100 %的乙醇反應(yīng)至沉淀不再增加為止，獲得微藻粗多糖。
[0066] 在上述方案中，微藻可直接使用微藻液或者濕藻泥進行微藻胞內(nèi)多糖和油脂的提 取，減少了微藻生物質(zhì)干燥環(huán)節(jié)，降低了提取成本；步驟二可以在高溫高壓反應(yīng)釜中進行， 并且其中反應(yīng)條件相較蒸汽爆破的方法降低了高溫高壓反應(yīng)釜的溫度及壓強，有助于降低 能耗；并且增加了微藻多糖的產(chǎn)率，過程方法容易，利于實現(xiàn)微藻油脂和多糖多聯(lián)產(chǎn)過程的 放大應(yīng)用。
[0067] 實施例5
[0068] -種同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0069] 步驟一、將杜氏鹽藻用溶壁酶進行處理獲得杜氏鹽藻預處理物；其中，所述溶壁酶 的添加量占所述微藻的質(zhì)量百分比為1 %;將微藻用溶壁酶進行混合處理的PH值為6. 0,反 應(yīng)溫度為35°C，反應(yīng)5h ;
[0070] 步驟二、將所述杜氏鹽藻預處理物在溫度為80°C和壓強為0. 25MPa的條件下處理 20min獲得杜氏鹽藻二級預處理物，將所述杜氏鹽藻二級預處理物用于提取微藻油脂及微 藻多糖；
[0071] 步驟三、向所述杜氏鹽藻二級預處理物中添加入有機萃取劑進行萃取微藻油脂， 分離出富含有微藻多糖的杜氏鹽藻多糖液；
[0072] 步驟四、將所述杜氏鹽藻多糖液過濾去除杜氏鹽藻細胞殘渣；
[0073] 步驟五、向所述杜氏鹽藻多糖液中添加三氯乙酸沉淀去除蛋白及核酸雜質(zhì)獲得二 級杜氏鹽藻多糖液；
[0074] 步驟六、將所述二級杜氏鹽藻多糖液離心、收集上清，之后向其中加入體積分數(shù)為 80 %的乙醇反應(yīng)至沉淀不再增加為止，獲得微藻粗多糖。
[0075] 在上述方案中，微藻可直接使用微藻液或者濕藻泥進行微藻胞內(nèi)多糖和油脂的提 取，減少了微藻生物質(zhì)干燥環(huán)節(jié)，降低了提取成本；步驟二可以在高溫高壓反應(yīng)釜中進行， 并且其中反應(yīng)條件相較蒸汽爆破的方法降低了高溫高壓反應(yīng)釜的溫度及壓強，有助于降低 能耗；并且增加了微藻多糖的產(chǎn)率，過程方法容易，利于實現(xiàn)微藻油脂和多糖多聯(lián)產(chǎn)過程的 放大應(yīng)用。
[0076] 應(yīng)用本發(fā)明方法在實驗室條件下進行微藻多糖及微藻油脂的提取，方法步驟如 下：
[0077] 實施例6 :
[0078] 1)將75mL杜氏鹽藻用NaAc調(diào)節(jié)pH至6. 0 ;
[0079] 2)實驗組加入微藻2. 0%溶壁酶（T. harzianum L1412)，37°C處理2h為實驗組① 和37°C處理6h為實驗組②；對照組不添加；
[0080] 3)將實驗組和對照組分別置于高溫高壓反應(yīng)釜中，其中，實驗組①反應(yīng)溫度為 120°C，實驗組②反應(yīng)溫度為95°C，對照組反應(yīng)溫度為160°C，以上三組均處理30min ;
[0081] 4)將上述實驗獲得的藻漿加入150mL氯仿，37°C 120rpm搖床60min，離心收集油 相和水相；
[0082] 5)將油相利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，回收重復利用氯仿，獲得微藻粗脂，稱重；
[0083] 6)將水相中加入80 % TCA三氯乙酸至濃度為10 %，4°C靜置過夜，離心收集上清 液；
[0084] 7)上清液添加3倍體積的無水乙醇沉淀上清液，離心，取沉淀物為多糖提取物。
[0085] 結(jié)果如下表1所示：
[0086]
【主權(quán)項】
1. 一種同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟一、將微藻用植物細胞壁降解酶進行處理獲得微藻預處理物； 步驟二、將所述微藻預處理物在溫度為80-120°C和壓強為0. 05-0. 25MPa的條件下處 理10-30min獲得微藻二級預處理物，將所述微藻二級預處理物用于提取微藻油脂及微藻 多糖。
2. 如權(quán)利要求1所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述步 驟二中將所述微藻預處理物在溫度為110_120°C和壓強為0. 13-0. 15MPa的條件下處理 10-30min獲得微藻預處理產(chǎn)物。
3. 如權(quán)利要求2所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述步驟 二中將所述微藻預處理物在溫度為120°C和壓強為0. 15MPa的條件下處理10-30min獲得微 藻預處理產(chǎn)物。
4. 如權(quán)利要求1所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述步驟 一種所述植物細胞壁降解酶的添加量占所述微藻的質(zhì)量百分比為0. 2-1 %。
5. 如權(quán)利要求1所述同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述步驟一 中將微藻用植物細胞壁降解酶進行混合處理的pH值為5. 2-6. 0,反應(yīng)溫度為20-35 °C，反應(yīng) 2-5h〇
6. 如權(quán)利要求1-5中任一項所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在 于，所述植物細胞壁降解酶包括纖維素酶和溶壁酶。
7. 如權(quán)利要求6所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，還包括以 下步驟： 步驟三、向所述微藻二級預處理物中添加入有機萃取劑進行萃取微藻油脂，分離出富 含有微藻多糖的微藻多糖液； 步驟四、將所述微藻多糖液過濾去除微藻細胞殘渣； 步驟五、向所述微藻多糖液中添加三氯乙酸沉淀去除蛋白及核酸雜質(zhì)獲得二級微藻多 糖液； 步驟六、將所述二級微藻多糖液離心、收集上清，之后向其中加入體積分數(shù)為80 %的乙 醇反應(yīng)至沉淀不再增加為止，獲得微藻粗多糖。
8. 如權(quán)利要求7所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述有機 萃取劑為氯仿或者乙醚。
9. 如權(quán)利要求7所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述微藻 包括杜氏鹽藻、微擬球藻、小球藻或斜生柵藻中的一種或幾種。
10. 如權(quán)利要求7所述的同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，其特征在于，所述步驟 六、將所述二級微藻多糖液離心、收集上清，之后向其中加入體積分數(shù)為100%的乙醇反應(yīng) 至沉淀不再增加為止，獲得微藻粗多糖。
【專利摘要】本發(fā)明涉及微藻生物煉制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種同時提取微藻油脂及微藻多糖的方法，包括以下步驟：步驟一、將微藻用植物細胞壁降解酶進行處理獲得微藻預處理物；步驟二、將所述微藻預處理物在溫度為80-120℃和壓強為0.05-0.25MPa的條件下處理10-30min獲得微藻二級預處理物，將所述微藻二級預處理物用于提取微藻油脂及微藻多糖。本發(fā)明方法改善了提取微藻油脂及微藻多糖的反應(yīng)條件，最大程度充分利用微藻原料，提取出其中盡量多的微藻多糖以及微藻油脂，降低生產(chǎn)成本，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【IPC分類】C11B1-04, C11B1-00, C08B37-04, C11B1-10
【公開號】CN104560357
【申請?zhí)枴緾N201410754045
【發(fā)明人】侯余勇, 陳方見, 劉智永, 趙玥, 劉晨風, 陳樹林
【申請人】中國科學院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月10日