為IO4-IO7個酵母菌體。
[0027] 其中，所述酵母菌體的個數(shù)以菌落形成單位數(shù)計算。菌落形成單位數(shù)是在光學(xué)顯 微鏡下，用血球計數(shù)板計數(shù)保溫后的溶液中活菌的數(shù)目（使用臺盼藍染色法進行染色，死 菌染色，活菌不染色）。
[0028] 本發(fā)明中，所述乙醇發(fā)酵的條件可以為常規(guī)的乙醇發(fā)酵條件，例如可以包括：發(fā)酵 時間可以為36-75小時，發(fā)酵溫度可以為30-33. 5°C，pH值可以為4-5. 5。
[0029] 本發(fā)明中，所述酵母菌劑可以采用常規(guī)的方法接種，例如向乙醇發(fā)酵原液中加入 5-15體積％的種子液。所述種子液可以為所述酵母菌劑的水溶液或培養(yǎng)基溶液，也可以為 所述酵母菌劑的活化培養(yǎng)液。種子液的制備方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不再贅述。
[0030] 本發(fā)明中，所述乙醇發(fā)酵原液的選擇可以為乙醇發(fā)酵領(lǐng)域常規(guī)的選擇（如含葡萄 糖的培養(yǎng)液），例如，所述乙醇發(fā)酵原液可以為含淀粉的植物材料的酶解產(chǎn)物和/或含纖維 素的植物材料的酶解產(chǎn)物。所述含淀粉的植物材料可以為玉米、小麥、木薯和馬鈴薯等常規(guī) 的可用于乙醇發(fā)酵的植物材料。所述含纖維素的植物材料可以為玉米秸桿等。所述酶解產(chǎn) 物的制備方法可以為本領(lǐng)域常規(guī)的選擇，例如文獻（蘇小軍等，燃料乙醇發(fā)酵技術(shù)研究進 展，湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），第33卷第4期，第480頁）中記載的方法。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明提供的生產(chǎn)乙醇的方法，可以得到乙醇含量高的成熟發(fā)酵液。成熟發(fā) 酵液中的乙醇可以用常規(guī)的方法和步驟，根據(jù)不同工業(yè)產(chǎn)品的要求（比如燃料酒精要求乙 醇的純度達99%以上）分離并精制，比如蒸餾、濃縮、除水等步驟。
[0032] 以下將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述。以下實施例中的實驗和檢測方法，如 無特殊說明，均為常規(guī)方法；所使用儀器，如無特殊說明，均為常規(guī)檢測和操作儀器；所用 的實驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑公司購買得到的；以下實施例中的定量試 驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。實施例中采用的培養(yǎng)基等如下：
[0033] 釀酒酵母 S288C 購自 ATCC，貨號為ATCC* 204508D_5?。
[0034] 酸性種子培養(yǎng)基：葡萄糖20g/L，蛋白胨10g/L，酵母抽提物5g/L，乙酸l_3g/L， pH5. 0〇
[0035] 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖80g/L，蛋白胨5g/L，酵母抽提物3g/L，CaCl2 0. 25g/ L，MgCl2 0. 25g/L，KH2P04 2. 5g/L，pH 5. 5,根據(jù)需要單獨加入乙酸、糠醛等脅迫因子（抑制 成分）作為含有抑制成分的葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0036] 發(fā)酵液的成分采用高效液相色譜法測定：樣品經(jīng)準確稀釋后，先經(jīng)lOOOOr/min高 速離心lOmin，上清液經(jīng)0. 45 μ m微孔濾膜過濾后進樣測定。高效液相色譜條件為：Agilent 1260液相色譜儀，Hi-plex Η(8μπι，7. 7Χ30μπι)色譜柱，柱溫60°C，流動相為乙腈：水 (80:20)，流速 0. 5mL/min。
[0037] 糖利用率（％ )=(培養(yǎng)基中的糖含量-發(fā)酵液中殘?zhí)呛浚?培養(yǎng)基中糖含 量 X100%。
[0038] 乙醇產(chǎn)量（g/L)定義為每升發(fā)酵液中乙醇的含量，其值越高，表明菌株發(fā)酵產(chǎn)乙 醇的能力及乙醇耐受性越強。
[0039] 制備實施例1
[0040] 按照表1所示的配比制備酵母菌劑。
[0041] 表 1
[0042]
【主權(quán)項】
1. 一種酵母菌劑，其特征在于，該酵母菌劑含有釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) RIPP-06、釀酒酵母RIPP-01和釀酒酵母RIPP-07，其中，釀酒酵母RIPP-06的保 藏號為CGMCC No. 8203,釀酒酵母RIPP-Ol的保藏號為CGMCC No. 8201，釀酒酵母RIPP-07 的保藏號為CGMCC No. 8204。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母菌劑，其中，釀酒酵母RIPP-06的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的 10-45%、釀酒酵母RIPP-Ol的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-45%、釀酒酵母RIPP-07的活菌數(shù)為 總活菌數(shù)的10-45%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酵母菌劑，其中，釀酒酵母RIPP-06的活菌數(shù)為總活菌數(shù) 的20-40%、釀酒酵母RIPP-Ol的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20-40%、釀酒酵母RIPP-07的活菌 數(shù)為總活菌數(shù)的20-40%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的酵母菌劑，其中，所述酵母菌劑的制備方法為：將釀酒酵母 RIPP-06、釀酒酵母RIPP-Ol和釀酒酵母RIPP-07接種至酵母培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，相對于所 述酵母培養(yǎng)基中每克的總糖，釀酒酵母的總接種量優(yōu)選為IO 3-IO8個酵母菌體，釀酒酵母 RIPP-06、釀酒酵母RIPP-Ol和釀酒酵母RIPP-07的接種量之比優(yōu)選為1:0. 5-2:0. 5-2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的酵母菌劑，其中，所述培養(yǎng)的條件包括：培養(yǎng)的溫度為 28-33. 5°C，培養(yǎng)的時間為24-72小時。
6. 權(quán)利要求1-5中任意一項所述的酵母菌劑在生產(chǎn)乙醇中的用途。
7. -種生產(chǎn)乙醇的方法，該方法包括：用權(quán)利要求1-5中任意一項所述的酵母菌劑對 乙醇發(fā)酵原液進行乙醇發(fā)酵。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中，相對于所述乙醇發(fā)酵原液中每克的總糖，所述酵 母菌劑的接種量為IO3-IO 8個酵母菌體。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中，所述乙醇發(fā)酵的條件包括：發(fā)酵時間為 36-75小時，發(fā)酵溫度為30-33. 5°C，pH值為4-5. 5。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其中，所述乙醇發(fā)酵原液為含淀粉的植物材料的 酶解產(chǎn)物和/或含纖維素的植物材料的酶解產(chǎn)物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酵母菌劑，該酵母菌劑含有釀酒酵母RIPP-06、釀酒酵母RIPP-01和釀酒酵母RIPP-07，其中，釀酒酵母RIPP-06的保藏號為CGMCC？No.8203，釀酒酵母RIPP-01的保藏號為CGMCC？No.8201，釀酒酵母RIPP-07的保藏號為CGMCC？No.8204。本發(fā)明還公開了上述酵母菌劑在生產(chǎn)乙醇中的用途。此外，本發(fā)明還公開了一種生產(chǎn)乙醇的方法，該方法包括用上述酵母菌劑對乙醇發(fā)酵原液進行乙醇發(fā)酵。本發(fā)明的酵母菌劑具有高抗逆性和多重脅迫耐受性，且其遺傳性能穩(wěn)定，糖利用率和乙醇產(chǎn)量均較高，可應(yīng)用于目前的燃料乙醇生產(chǎn)工藝和木質(zhì)纖維素乙醇新工藝中，實用性較強。CGMCC No. 820120130924
【IPC分類】C12R1-865, C12P7-06, C12N1-18, C12P7-10
【公開號】CN104560750
【申請?zhí)枴緾N201410534367
【發(fā)明人】高嵐, 劉穎, 郭勇, 劉金勝, 李寶石, 藺建民
【申請人】中國石油化工股份有限公司, 中國石油化工股份有限公司石油化工科學(xué)研究院
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年10月11日