visiae，并已存活。保藏地址均為北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學院微生物研宄所，郵政編碼100101，電話010-64807355。其中一株釀酒酵母為 Saccharomyces cerevisiae YYJ003 其保藏編號為CGMCC N0.2757ο 另一株釀酒酵母為 Saccharomyces cerevisiae SyBE005，其保藏編號為CGMCC N0.6634。
[0031]實施例1:
[0032]—種抑制劑存在下混菌發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，包括如下步驟:
[0033](I)將玉米秸桿按質量比為1:5的比例浸于質量分數(shù)為2.0%稀硫酸中，在185°C，進行浸泡預處理4min，得到固液混合物，分離，得到預處理后的底物；
[0034](2)將底物、纖維素水解酶和水按比例為50g: 15FPU:50g混合，調節(jié)pH至4.5，進行酶解，酶解48h ；
[0035](3)分兩組進行實驗:
[0036]第一組:
[0037]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為2.5g/L，發(fā)酵溫度34°C，發(fā)酵72h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；第二組:
[0038]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為2.5g/L。在發(fā)酵開始Oh后，向混合液中接種保藏編號為CGMCC N0.6634的釀酒酵母，接種濃度為7.5g/L，發(fā)酵溫度34°C，發(fā)酵72h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；
[0039]其中第一組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為36.4g/L，最終剩余木糖濃度為28.9g/Lo第二組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為45.8g/L，最終剩余木糖濃度為10.9g/L。
[0040]實施例2:
[0041]—種抑制劑存在下混菌發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，包括如下步驟:
[0042](I)將小麥秸桿按質量比為1:2的比例浸于質量分數(shù)為2.5%稀硫酸中，在170°C，進行浸泡預處理3min，得到固液混合物，分離，得到預處理后的底物；
[0043](2)將底物、纖維素水解酶和水按比例為50g:20FPU:50g混合，調節(jié)pH至4.5，進行酶解，酶解12h ；
[0044](3)分兩組進行實驗:
[0045]第一組:
[0046]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為7.5g/L，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵144h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；第二組:
[0047]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為7.5g/L，發(fā)酵溫度30°C，在發(fā)酵開始8h后，向混合液中接種保藏編號為CGMCC N0.6634的釀酒酵母，接種濃度為5.0g/L，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵144h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；
[0048]其中第一組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為36.8g/L，最終剩余木糖濃度為30.9g/Lo第二組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為42.3g/L，最終剩余木糖濃度為18.4g/L。
[0049]實施例3:
[0050]一種抑制劑存在下混菌發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，包括如下步驟:
[0051](I)將水稻秸桿按質量比為1:7的比例浸于質量分數(shù)為1.5%稀硫酸中，在190°C，進行浸泡預處理5min，得到固液混合物，分離，得到預處理后的底物；
[0052](2)將底物、纖維素水解酶和水按比例為45g: 18FPU:55g混合，調節(jié)pH至4.8，進行酶解，酶解48h ；
[0053](3)分兩組進行實驗:
[0054]第一組:
[0055]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為5.0g/L，發(fā)酵溫度33°C，發(fā)酵96h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；第二組:
[0056]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為5.0g/L,發(fā)酵溫度33°C，在發(fā)酵開始4h后，向混合液中接種保藏編號為CGMCC N0.6634的釀酒酵母，接種濃度為6.5g/L，發(fā)酵溫度33°C，發(fā)酵96h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；
[0057]其中第一組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為35.8g/L，最終剩余木糖濃度為31.4g/Lo第二組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為44.6g/L，最終剩余木糖濃度為14.7g/L。
[0058]實施例4:
[0059]—種抑制劑存在下混菌發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，包括如下步驟:
[0060](I)將高粱秸桿按質量比為1:10的比例浸于質量分數(shù)為1.0%稀硫酸中，在200 °C，進行浸泡預處理6min，得到固液混合物，分離，得到預處理后的底物；
[0061](2)將底物、纖維素水解酶和水按比例為40g: 15FPU:60g混合，調節(jié)pH至5.5，進行酶解，酶解48h ；
[0062](3)分兩組進行實驗:
[0063]第一組:
[0064]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為7.5g/L，發(fā)酵溫度30°C，發(fā)酵120h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；第二組:
[0065]向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC N0.2757的釀酒酵母，接種濃度為5.0g/L,發(fā)酵溫度30°C，在發(fā)酵開始6h后，向混合液中接種保藏編號為CGMCC N0.6634的釀酒酵母，接種濃度為5.0g/L，發(fā)酵溫度34°C，發(fā)酵120h，得到富含乙醇的發(fā)酵液體；
[0066]其中第一組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為35.6g/L，最終剩余木糖濃度為29.7g/Lo第二組發(fā)酵實驗得到最終乙醇濃度為40.9g/L，最終剩余木糖濃度為16.6g/L。
【主權項】
1.一種抑制劑存在下混菌生產(chǎn)乙醇的方法，包括如下步驟: (1)將秸桿進行預處理，得到固液混合物，分離，得到預處理后的底物； (2)向底物中加入纖維素酶和水，調節(jié)pH，酶解； (3)先向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCCN0.2757的釀酒酵母進行第一發(fā)酵，然后接種保藏編號為CGMCC N0.6634的釀酒酵母進行第二發(fā)酵，發(fā)酵完成后進行固液分離，得到富含乙醇的發(fā)酵液體。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，步驟(I)所述預處理為將秸桿浸于稀硫酸。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，步驟(2)所述底物、纖維素水解酶和水的比例為40g-50g:15FPU-20FPU:50g-60go
4.根據(jù)權利要求1-3任意一項所述的方法，步驟(2)所述酶解的pH值為4.5-5.5，酶解溫度為50°C，酶解時間為12h-48h。
5.根據(jù)權利要求1-4任意一項所述的方法，步驟(3)所述保藏編號為CGMCCN0.2757的釀酒酵母的接種密度為2.5g/L-7.5g/L。
6.根據(jù)權利要求1-5任意一項所述的方法，步驟(3)所述第一發(fā)酵的發(fā)酵時間為0h-8ho
7.根據(jù)權利要求1-6任意一項所述的方法，步驟(3)所述保藏編號為CGMCCN0.6634的釀酒酵母的接種密度為2.5g/L-7.5g/L。
8.根據(jù)權利要求1-7任意一項所述的方法，步驟(3)所述第二發(fā)酵的發(fā)酵時間為72h-144ho
9.根據(jù)權利要求1-8任意一項所述的方法，步驟(3)所述第一發(fā)酵和第二發(fā)酵的溫度為 30 0C -34 0C ο
10.根據(jù)權利要求1-9任意一項所述的方法，其特征是所述秸桿為玉米秸桿、小麥秸桿、尚粱稻桿或水稻稻桿。
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物質新能源技術領域，公開了一種在抑制劑存在的條件下混菌發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的方法，包括如下步驟：(1)將秸稈進行預處理，得到固液混合物，分離，得到預處理后的底物；(2)向底物中加入纖維素酶和水，調節(jié)pH，酶解；(3)先向步驟(2)獲得的混合液接種保藏編號為CGMCC No.2757的釀酒酵母進行第一發(fā)酵，然后接種保藏編號為CGMCC No.6634的釀酒酵母進行第二發(fā)酵，發(fā)酵完成后進行固液分離，得到富含乙醇的發(fā)酵液體。發(fā)明所述方法使得預處理后的秸稈不經(jīng)過任何脫毒的過程即可進入下一步的發(fā)酵過程，在抑制劑的存在下顯著改善木糖的利用，實現(xiàn)葡萄糖和木糖的共同利用提高乙醇產(chǎn)量。
【IPC分類】C12P7-10, C12R1-865
【公開號】CN104561132
【申請?zhí)枴緾N201510081638
【發(fā)明人】元英進, 朱家慶, 李炳志, 秦磊, 李文超
【申請人】天津大學
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年2月15日