低 的優(yōu)點。
[0026] 3.本發(fā)明所述試劑盒的操作簡單、安全，同時減少了 Cot-IDNA試劑、羅丹明抗-地 高辛抗體等昂貴試劑的使用，經(jīng)濟(jì)高效；
[0027] 4.與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述試劑盒的檢測方法，無需使用Cot-IDNA對樣本基 因進(jìn)行封閉，操作方便，檢測速度快，可在12-24小試內(nèi)完成雜交檢測實驗。
【附圖說明】
[0028] 圖1為信號計數(shù)指南-典型信號模式。
[0029] 圖2為信號計數(shù)指南-典型陽性細(xì)胞信號模式。
[0030] 圖3信號計數(shù)指南-典型陰性細(xì)胞信號模式。
【具體實施方式】
[0031] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合附圖、實施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā) 明的保護(hù)范圍不局限于下面的實施例。
[0032] 實施例1
[0033] 本實施例所述的檢測ALK基因重排檢測探針和試劑盒，其設(shè)計如下：
[0034] 一、設(shè)計擴(kuò)增引物
[0035] ALK基因位于2號染色體上（位置為2p23)，ALK基因重排的斷裂點位于外顯子19 和20之間，根據(jù)ALK基因的特點，分別設(shè)計兩組擴(kuò)增引物，分別為：針對斷裂點上游設(shè)計的 第一組擴(kuò)增引物，針對斷裂點下游設(shè)計的第二組擴(kuò)增引物，相應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物分別組成了第 一組探針庫和第二組探針庫。每組擴(kuò)增引物，得到的擴(kuò)增產(chǎn)物能作為重排的FISH探針，不 含有重復(fù)序列，能夠避免交叉反應(yīng)，與染色體中ALK目標(biāo)檢測片段進(jìn)行特異性識別雜交。
[0036] 人工合成如下引物，擴(kuò)增引物及其相應(yīng)的擴(kuò)增產(chǎn)物具體見表1(注：1F/1R為一 對引物，分別表示正向引物和反向引物；其他以此類推）。合成后的每條擴(kuò)增引物分別用 10mmol/L Tris Buffer 配制成 100pmol/mL 的存液。
[0037] 表1擴(kuò)增引物及擴(kuò)增產(chǎn)物
[0038]
【主權(quán)項】
1. ALK基因重排檢測試劑盒，其特征在于，包括有標(biāo)記熒光染料的、針對斷裂點上游的 第一組探針和針對斷裂點下游的第二組探針，所述第一組探針為選自SEQ ID NO. 41 - SEQ ID NO. 50中的至少一條探針，所述第二組探針為選自SEQ ID NO. 51 - SEQ ID NO. 60中的 至少一條探針；所述第一組探針與第二組探針?biāo)鶚?biāo)記的熒光染料顏色不一樣。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的ALK基因重排檢測試劑盒，其特征在于，所述第一組探針為 選自SEQ ID NO. 41 - SEQ ID NO. 50中的至少五條探針，所述第二組探針為選自SEQ ID NO. 51- SEQ ID NO. 60中的至少五條探針。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的ALK基因重排檢測試劑盒，其特征在于，所述第一組探針為 選自SEQ ID NO. 41 - SEQ ID NO. 50中的至少八條探針，所述第二組探針為選自SEQ ID NO. 51- SEQ ID NO. 60中的至少八條探針。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的ALK基因重排檢測試劑盒，其特征在于，所述第一組探針為 SEQ ID NO. 41 - SEQ ID NO. 50,所述第二組探針為 SEQ ID NO. 51 - SEQ ID NO. 60。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的ALK基因重排檢測試劑盒，其特征在于，所述SEQ ID NO. 41 - SEQ ID NO. 50依次分別由以下引物擴(kuò)增制備得到：SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2、 SEQ ID NO. 3 和 SEQ ID NO. 4、SEQ ID NO. 5 和 SEQ ID NO. 6、SEQ ID NO. 7 和 SEQ ID NO. 8、 SEQ ID NO. 9 和 SEQ ID NO. 10、SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID NO. 12、SEQ ID NO. 13 和 SEQ ID NO. 14、SEQ ID NO. 15 和 SEQ ID NO. 16、SEQ ID NO. 17 和 SEQ ID NO. 18、SEQ ID NO. 19 和 SEQ ID NO. 20 〇
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的ALK基因重排檢測試劑盒，其特征在于，所述SEQ ID NO. 51-SEQ ID NO. 60依次分別由以下引物擴(kuò)增制備得到：SEQ ID NO. 21和SEQ ID NO. 22、 SEQ ID NO. 23 和 SEQ ID NO. 24、SEQ ID NO. 25 和 SEQ ID NO. 26、SEQ ID NO. 27 和 SEQ ID NO. 28、SEQ ID NO. 29 和 SEQ ID NO. 30、SEQ ID NO. 31 和 SEQ ID NO. 32、SEQ ID NO. 33 和 SEQ ID NO. 34、SEQ ID NO. 35 和 SEQ ID NO. 36、SEQ ID NO. 37 和 SEQ ID NO. 38、SEQ ID NO. 39 和 SEQ ID NO. 40。 7. ALK基因重排檢測探針，其特征在于，針對斷裂點上游的第一組探針和針對斷裂點下 游的第二組探針，所述第一組探針為選自SEQ ID NO. 41 - SEQ ID NO. 50中的至少一條探 針，所述第二組探針為選自SEQ ID NO. 51 - SEQ ID NO. 60中的至少一條探針。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的ALK基因重排檢測探針，其特征在于，所述第一組探針為選自 SEQ ID NO. 41-SEQ ID NO. 50中的至少五條探針，所述第二組探針為選自SEQ ID NO. 51- SEQ ID NO. 60中的至少五條探針。
9. 一種ALK基因重排檢測方法，其特征在于，包括以下步驟： 待檢測樣品切片預(yù)處理； 利用權(quán)利要求1一6任一項所述ALK基因重排檢測試劑盒進(jìn)行雜交檢測； 復(fù)染后在顯微鏡下觀察突光信號。
【專利摘要】本發(fā)明公開了ALK基因重排檢測探針、試劑盒以及方法， 包括有標(biāo)記熒光染料的、針對斷裂點上游的第一組探針和針對斷裂點下游的第二組探針，所述第一組探針為選自SEQ?ID?NO.41— SEQ?ID?NO.50中的至少一條探針，所述第二組探針為選自SEQ?ID?NO.51—SEQ?ID?NO.60中的至少一條探針；上述兩組探針?biāo)?標(biāo)記的熒光染料顏色不一樣。本發(fā)明所提供的ALK基因重排檢測試劑盒中的FISH探針，不含有重復(fù)序列，能夠避免交叉反應(yīng)，與染色體中ALK目標(biāo)檢測片段 進(jìn)行識別雜交，具有準(zhǔn)確性高，特異性好、及假陽性低的優(yōu)點。
【IPC分類】C12N15-11, C12Q1-68
【公開號】CN104561356
【申請?zhí)枴緾N201510049974
【發(fā)明人】胡文暉, 吳詩揚, 廖傳榮, 黃萌
【申請人】益善生物技術(shù)股份有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月30日