點是在plinl基因序列第八外顯子的第49位為A或T的堿基多態(tài)性位 點，表現(xiàn)為AA、AT或TT三種基因型，其中TT型為肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記標(biāo) 的。實驗發(fā)現(xiàn):AA、AT或TT三種基因型的雞在產(chǎn)肉率以及肉質(zhì)優(yōu)化等方面都有很大差別，TT 型雞屠宰性狀（產(chǎn)肉率以及肉質(zhì)）明顯優(yōu)于AA、AT兩種類型，所以該基因型的雛雞可以作 為具備優(yōu)良屠宰性狀的種雞來培育，這也肯定了基因型為TT的雞可以作為種雞來培育具 有優(yōu)良屠宰性狀的品種雞的可實施性。本發(fā)明應(yīng)用方法簡單、快速、低成本、便于推廣應(yīng)用， 可廣泛應(yīng)用于雞的輔助選擇和分子育種中，將為培育出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)肉性狀的優(yōu)良品種提供支 持。
【附圖說明】
[0019] 圖1為本發(fā)明所述肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記的實際應(yīng)用流程示意圖。
[0020] 圖2為本發(fā)明擴(kuò)增的雞的plinl編碼基因結(jié)構(gòu)示意圖與第八外顯子序列。
[0021] 其中，第八外顯子的49位核苷酸用下劃線及黑體放大字母示意。在野生基因中， 第49位核苷酸為A，突變基因中為T。
[0022] 圖3為本發(fā)明中部分樣品PCR產(chǎn)物經(jīng)特異性酶切篩查到的雞plinl基因序列瓊脂 糖凝膠電泳結(jié)果圖。
[0023] 其中，AA為未突變型，AT為雜合突變型，TT為純合突變型。
【具體實施方式】
[0024]本發(fā)明首先根據(jù)雞plinl基因的保守序列設(shè)計引物，以不同品種雞基因組DNA為 模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測序。然后，進(jìn)行特異性酶切，并將酶切結(jié)果的瓊脂糖凝膠電泳圖和序 列比對篩查出不同品種雞plinl基因SNP位點。然后，根據(jù)在群體中檢測到的基因型，進(jìn)行 群體遺傳統(tǒng)計分析和生長性狀的關(guān)聯(lián)分析，篩選出與雞生長性狀密切相關(guān)的分子標(biāo)記。最 后，利用獲得的分子遺傳標(biāo)記在輔助篩選或預(yù)測具備優(yōu)良屠宰性狀的肉食雞品種中應(yīng)用， 將篩選到的擁有與雞優(yōu)異屠宰性狀相關(guān)分子標(biāo)記的雞作為種雞進(jìn)行培養(yǎng)，以期繁殖更多的 優(yōu)質(zhì)雞。下面對本發(fā)明做詳細(xì)說明，所述內(nèi)容是對本發(fā)明的解釋而不是限定。
[0025] 實施例1:不同品種雞plinl基因部分DNA序列的克隆
[0026] 1、雞血的采集及處理：隨機(jī)抽取無病健康雞，包括1478只魯禽1號雞、616只魯禽 3號雞以及68只石歧雜雞，由翅下靜脈采血，EDTA做抗凝處理。
[0027] 2、基因組DNA的提?。豪肨iangen血液DNA提取試劑盒提取DNA。使用200yL 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，加入20yL蛋白酶K溶液，混勻；然后加入200yL緩 沖液GB，混勻后70°C放置10分鐘；加入200yL無水乙醇，充分振蕩混勻，此時會出現(xiàn)絮狀 沉淀；將所得溶液和絮狀沉淀全部轉(zhuǎn)移到放入收集管中的吸附柱CB3中，12000rpm離心30 秒并棄廢液；加入500yL緩沖液⑶，12000rpm離心30秒并棄廢液；加入700yL漂洗液 PW(使用前加入無水乙醇），12000rpm離心30秒并棄廢液，并重復(fù)該步驟兩次；徹底除盡吸 附材料中的漂洗液之后，使用水或洗脫液TE將所得DNA產(chǎn)物盡可能的洗脫下來。
[0028] 3、擴(kuò)增引物設(shè)計：根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)雞的 GenBank登錄號為：NM-001127439的plinl基因的外顯子序列，以該基因序列保守區(qū)序列為 參考設(shè)計PCR引物對，其引物對序列如下：
[0029]上游引物：CATAAAGGCGAGGCAAAGGITC
[0030]下游引物：CACGGATGGACAGATGGACAA
[0031] 該引物擴(kuò)增了plinl基因第八外顯子702bp序列。
[0032] 4、PCR擴(kuò)增雞plinl基因外顯子：以雞的DNA為模版，用上述設(shè)計的引物對進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，PCR總反應(yīng)體系為30yL，見表1 ;PCR總反應(yīng)程序，見表2。
[0033] 表1PCR反應(yīng)體系
[0034]
【主權(quán)項】
1. 一種肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記，該標(biāo)記是雞plinl基因單核苷酸多態(tài)性 序列上的多態(tài)性位點，其特征在于：所述雞plinl基因單核苷酸多態(tài)性序列的多態(tài)性位點 是在plinl基因序列第八外顯子的第49位為A或T的堿基多態(tài)性位點，表現(xiàn)為AA、AT或TT 三種基因型，其中TT型為肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記。
2. 權(quán)利要求1所述肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記在輔助篩選或預(yù)測具備優(yōu)良 屠宰性狀的肉食雞品種中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，方法是：以待檢測雞plinl基因組DNA為模板，以引物 對plinlE8F/E8R進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增完成后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，然后使用特定的限制性 核酸內(nèi)切酶對擴(kuò)增出的目的片段進(jìn)行酶切；之后對酶切產(chǎn)物再一次進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳， 來檢測酶切產(chǎn)物的片段大小，分析確定雞plinl基因的堿基多態(tài)性位點，當(dāng)plinl基因序列 第八外顯子的第49位為A或T，且基因型為TT型時，即可判定待檢測雞品種為具有優(yōu)良屠 宰性狀的品種雞； 其特征在于： 所述引物對plinlE8F/E8R的核苷酸序列為： plinlE8F：CATAAAGGCGAGGCAAAGGTTC； plinlE8R：CACGGATGGACAGATGGACAA； 所述PCR擴(kuò)增的反應(yīng)程序為：95 °C預(yù)變性4-5min ;94 °C變性30-35s，55-61 °C退火 30-35s，72°C延伸lmin，28-35個循環(huán)，最后72°C延伸lOmin，并置于4°C保存； 所述特定的限制性核酸內(nèi)切酶為：NspI、BstNSI、NspHI、PauAI或PunAII，其酶切作用 位點為擴(kuò)增出目的基因中的以下序列：5'…RCATG1 Y…3'或3'?Yt GTACR…5'。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：對于plinlE8F/E8R引物對來說，PCR擴(kuò) 增程序為：95°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，55°C退火30s，72°C延伸lmin，35個循環(huán)，最后 72°C延伸lOmin，并置于4°C保存。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：所述特定的限制性核酸內(nèi)切酶為：NspI、 BstNSI 或 NspHI。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記，是雞plin1基因單核苷酸多態(tài)性序列上的多態(tài)性位點，該位點是在plin1基因序列第八外顯子的第49位為A或T的堿基多態(tài)性位點，表現(xiàn)為AA、AT或TT三種基因型，其中TT型為肉食雞的優(yōu)良屠宰性狀分子遺傳標(biāo)記。本發(fā)明還公開了所述標(biāo)記在輔助篩選或預(yù)測具備優(yōu)良屠宰性狀的肉食雞品種中的應(yīng)用。實驗證實：特異型酶切位點的多態(tài)性與生產(chǎn)性能之間具備相關(guān)性，基因型為TT的個體各項測量指標(biāo)均高于基因型為AA和AT的個體，提示基因型為TT的個體可以作為種雞來培育具有優(yōu)良屠宰性狀的品種雞。
【IPC分類】C12Q1-68, C12N15-11
【公開號】CN104593363
【申請?zhí)枴緾N201510015900
【發(fā)明人】林浴霜, 王丹丹, 胡瑋, 曹頂國, 周艷, 雷秋霞
【申請人】山東大學(xué)
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年1月13日