L/分鐘（線速度765cm/分 鐘），從濾液出口排出的初期過濾流量設(shè)為269mL/分鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為83%，過濾 時間為235s。
[0083] (實施例6)
[0084] 使用與實施例5相同的中空纖維組件。通液條件為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量 設(shè)為630mL/分鐘（線速度1071cm/分鐘），從濾液出口排出的初期過濾流量設(shè)為269mL/分 鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為88%，過濾時間為250s。
[0085] (比較例3)
[0086] 使用與實施例5相同的中空纖維組件。通液條件為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量 設(shè)為450mL/分鐘（線速度765cm/分鐘），從濾液出口排出的初期過濾流量設(shè)為120mL/分 鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為92%，過濾時間為500s。
[0087] (比較例4)
[0088] 使用聚醚砜中空纖維型分離膜組件[型號：M2-M02E-300-FlN、過濾面積0. 31m2、 中空纖維內(nèi)徑500 μπκ孔徑0.2 μπκ (Spectrum Laboratories公司制）]進(jìn)行細(xì)胞濃縮的 研宄。由實測的中空纖維的有效長度算出中空纖維型分離膜的總截面積為1.737cm 2。通液 條件為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量設(shè)為520mL/分鐘（線速度299cm/分鐘），從濾液出口 排出的初期過濾流量設(shè)為265mL/分鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為53%，過濾時間為230s。
[0089] (比較例5)
[0090] 使用與比較例4相同的中空纖維組件。通液條件為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量 設(shè)為1020mL/分鐘（線速度587cm/分鐘），從濾液出口排出的初期過濾流量設(shè)為566mL/分 鐘。結(jié)果，細(xì)胞回收率為72%，過濾時間為106s。
[0091] (實施例7)
[0092] 使用纖維素酯中空纖維型分離膜[型號：M22M-100-01N、內(nèi)側(cè)膜面積0. 079m2、中 空纖維內(nèi)徑600 μπκ孔徑0· 2 μπκ (Spectrum Laboratories公司制）]進(jìn)行細(xì)胞濃縮的研 宄。由實測的中空纖維的有效長度算出中空纖維型分離膜的總截面積為0.531cm 2。通液條 件為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量設(shè)為440mL/分鐘（線速度829cm/分鐘），從濾液出口排 出的初期過濾流量設(shè)為188mL/分鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為96%，過濾時間為330s。
[0093] (比較例6)
[0094] 使用纖維素酯中空纖維型分離膜[型號：M22M-300-01N、內(nèi)側(cè)膜面積0. 25m2、中空 纖維內(nèi)徑600 μm、孔徑0· 2 μm、（Spectrum Laboratories公司制）]進(jìn)行細(xì)胞濃縮的研宄。 由實測的中空纖維的有效長度算出中空纖維型分離膜的總截面積為1.681cm 2。通液條件 為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量設(shè)為420mL/分鐘（線速度250cm/分鐘），從濾液出口排出 的初期過濾流量設(shè)為222mL/分鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為45%，過濾時間為275s。
[0095] (比較例7)
[0096] 使用纖維素酯中空纖維型分離膜[型號：M22M-301-01N、內(nèi)側(cè)膜面積0. 2m2、中空 纖維內(nèi)徑1000 μ m、孔徑0· 2 μ m、（Spectrum Laboratories公司制）]進(jìn)行細(xì)胞濃縮的研宄。 由實測的中空纖維的有效長度算出中空纖維型分離膜的總截面積為2. 24cm2。通液條件為： 流入細(xì)胞懸浮液入口的流量設(shè)為420mL/分鐘（線速度188cm/分鐘），從濾液出口排出的初 期過濾流量設(shè)為200mL/分鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為36%，過濾時間為300s。
[0097] (實施例8)
[0098] 使用聚乙烯的中空纖維型分離膜[品名：Sulfrax FP02、內(nèi)側(cè)膜面積0. 2m2、中空纖 維內(nèi)徑350 μπκ孔徑0. 3 μπκ (Kaneka公司制）]進(jìn)行細(xì)胞濃縮的研宄。由實測的中空纖維 的有效長度算出中空纖維型分離膜的總截面積為I. 206cm2。通液條件為：流入細(xì)胞懸浮液 入口的流量設(shè)為710mL/分鐘（線速度589cm/分鐘），從濾液出口排出的初期過濾流量設(shè)為 333mL/分鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為81%，過濾時間為190s。
[0099] (比較例8)
[0100] 使用與實施例8相同的中空纖維組件。通液條件為：流入細(xì)胞懸浮液入口的流量 設(shè)為415mL/分鐘（線速度344cm/分鐘），從濾液出口排出的初期過濾流量設(shè)為222mL/分 鐘。結(jié)果是細(xì)胞回收率為59%，過濾時間為275s。
[0101]
【主權(quán)項】
1. 一種細(xì)胞濃縮液的制造方法，該方法使用內(nèi)壓過濾方式的細(xì)胞懸浮液處理器， 所述細(xì)胞懸浮液處理器具備：細(xì)胞懸浮液入口、濾液出口、細(xì)胞懸浮液出口、及配置于 該細(xì)胞懸浮液入口和細(xì)胞懸浮液出口之間的中空纖維型分離膜，其中， 該中空纖維型分離膜的總截面積為0. 5cm2?1. 5cm2， 該中空纖維型分離膜的內(nèi)側(cè)膜面積為0. 2m2以下， 流過該中空纖維型分離膜內(nèi)側(cè)的線速度為500cm/分鐘?1200cm/分鐘， 從濾液出口排出的初期過濾流量除以流入細(xì)胞懸浮液入口的流量所得的值為0. 4? 0? 7〇
2. 如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞濃縮液的制造方法，其中， 該中空纖維型分離膜的內(nèi)徑為300ym?1000ym。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的細(xì)胞濃縮液的制造方法，其中， 該中空纖維型分離膜的平均孔徑為0. 1um以上。
4. 如權(quán)利要求1?3中任一項所述的細(xì)胞濃縮液的制造方法，其中， 該中空纖維型分離膜由聚砜類、聚烯烴類或纖維素類的材料制成。
5. 如權(quán)利要求1?4中任一項所述的細(xì)胞濃縮液的制造方法，其中， 該中空纖維型分離膜由聚醚砜制成。
6. 如權(quán)利要求1?5中任一項所述的細(xì)胞濃縮液的制造方法，其中， 細(xì)胞懸浮液為免疫細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液。
7. -種細(xì)胞濃縮液的制造方法，該方法包括： 將根據(jù)權(quán)利要求1?6中任一項所述的制造方法得到的細(xì)胞濃縮液通過反復(fù)稀釋和濃 縮而進(jìn)行清洗的工序，所述稀釋利用不含細(xì)胞的液體進(jìn)行；及 進(jìn)一步濃縮的工序。
8. -種細(xì)胞的冷凍保存方法，該方法包括：將根據(jù)權(quán)利要求1?7中任一項所述的制 造方法得到的細(xì)胞濃縮液用液氮進(jìn)行冷凍保存的工序。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種以簡便的方法在短時間內(nèi)不損耗細(xì)胞且不給予細(xì)胞過多的負(fù)荷的情況下制造細(xì)胞濃縮液(其中，不包括人血液)的方法。本發(fā)明提供一種細(xì)胞濃縮液的制造方法，該方法使用內(nèi)壓過濾方式的細(xì)胞懸浮液處理器，所述細(xì)胞懸浮液處理器具備：細(xì)胞懸浮液入口、濾液出口、細(xì)胞懸浮液出口、及配置于該細(xì)胞懸浮液入口和細(xì)胞懸浮液出口之間的中空纖維型分離膜，其中，該中空纖維型分離膜的總截面積為0.5cm2～1.5cm2，該中空纖維型分離膜的內(nèi)側(cè)膜面積為0.2m2以下，流過該中空纖維型分離膜內(nèi)側(cè)的線速度為500cm/分鐘～1200cm/分鐘，從濾液出口排出的初期過濾流量除以流入細(xì)胞懸浮液入口的流量所得的值為0.4～0.7。
【IPC分類】B01D61-14, C12N1-00, C12N5-078, B01D63-02, B01D71-68, B01D71-10, B01D69-08
【公開號】CN104603258
【申請?zhí)枴緾N201380044565
【發(fā)明人】谷口修平
【申請人】株式會社鐘化
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2013年8月19日
【公告號】EP2891710A1, US20150204767, WO2014034456A1...