延長家兔全血凝固時間的實(shí)驗(yàn)，從表1至表5的結(jié)果可知，該生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物 能顯著延長家兔體外凝血時間，抑制血液的凝固，具有顯著的抗凝血作用，因此可應(yīng)用于制 備抗凝血藥物。
[0024] 本發(fā)明常溫閃式提取生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，在常溫或者室溫下（20?50°C )，不加 熱，加水動力打漿式水溶出有效成分，無溫度破壞，既能溶解有效成分但又不破壞有效成 分；60°C減壓濃縮，不會破壞有效成分，特別是活性酶類物質(zhì)；為了不影響有關(guān)活性物質(zhì)， 本發(fā)明采用了真空冷凍干燥手段。
【具體實(shí)施方式】[0025] 實(shí)施例1 [0026]
[0027]
[0028]
[0029] 一種生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物，其制備方法包括如下步驟：
[0030] (1)取農(nóng)副產(chǎn)品麥麩650g、玉米面150g、谷糠70g、白糖8g，以及中藥材地龍粗粉 (地龍）250g，混勻，加入687. 5g水拌勻，既得菌絲體培養(yǎng)基，再裝瓶、滅菌，接入猴頭菌，在 20?27°C條件下菌絲體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)30?40天，取出生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，烘干，即得生物轉(zhuǎn)化 "菌絲體"；
[0031] (2)取生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，進(jìn)行第一次水常溫閃式提取，提取15分鐘，然后進(jìn)行第 二次水常溫閃式提取，提取15分鐘；第一次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化"菌絲 體"重量的4倍；第二次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"重量的2倍；水 常溫閃式提取的溫度為20?50°C ;
[0032] (3)將提取后獲得的提取液離心后得到的上清液在55°C條件下減壓濃縮，將減壓 濃縮所得的濃縮液在_55°C條件下真空冷凍干燥，即得生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物；離心條 件為：轉(zhuǎn)速3500?4500轉(zhuǎn)/分鐘，離心8分鐘。
[0033] 實(shí)施例2
[0034] 一種生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物，其制備方法包括如下步驟：
[0035] (1)取農(nóng)副產(chǎn)品麥麩700g、玉米面200g、谷糠90g、白糖10g，以及中藥材地龍粗粉 (地龍）666. 7g，混勻，加入IOOOg水拌勻，既得菌絲體培養(yǎng)基，再裝瓶、滅菌，接入猴頭菌，在 20?27°C條件下菌絲體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)30?40天，取出生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，烘干，即得生物轉(zhuǎn)化 "菌絲體"；
[0036] (2)取生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，進(jìn)行第一次水常溫閃式提取，提取20分鐘，然后進(jìn)行第 二次水常溫閃式提取，提取20分鐘；第一次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化"菌絲 體"重量的5倍；第二次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"重量的3倍；水 常溫閃式提取的溫度為20?50°C ;
[0037] (3)將提取后獲得的提取液離心后得到的上清液在60°C條件下減壓濃縮，將減壓 濃縮所得的濃縮液在_60°C條件下真空冷凍干燥，即得生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物；離心條 件為：轉(zhuǎn)速3500?4500轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘。
[0038] 實(shí)施例3
[0039] 一種生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物，其制備方法包括如下步驟：
[0040] (1)取農(nóng)副產(chǎn)品麥麩750g、玉米面250g、谷糠110g、白糖12g，以及中藥材地龍粗粉 (地龍）1500g，混勻，加入1500g水拌勻，既得菌絲體培養(yǎng)基，再裝瓶、滅菌，接入猴頭菌，在 20?27°C條件下菌絲體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)30?40天，取出生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，烘干，即得生物轉(zhuǎn)化 "菌絲體"；
[0041] (2)取生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"，進(jìn)行第一次水常溫閃式提取，提取25分鐘，然后進(jìn)行第 二次水常溫閃式提取，提取25分鐘；第一次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化"菌絲 體"重量的6倍；第二次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"重量的4倍；水 常溫閃式提取的溫度為20?50°C ;
[0042] (3)將提取后獲得的提取液離心后得到的上清液在60°C條件下減壓濃縮，將減壓 濃縮所得的濃縮液在_60°C條件下真空冷凍干燥，即得生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"提取物；離心條 件為：轉(zhuǎn)速3500?4500轉(zhuǎn)/分鐘，離心15分鐘。
[0043] 實(shí)施例4
[0044] 生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"的提取物抗凝血試驗(yàn)
[0045] I. 1實(shí)驗(yàn)動物
[0046] 表1:實(shí)驗(yàn)動物信息
[0047]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種生物轉(zhuǎn)化菌絲體的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括如下重量份的組分： 麥麩65?75 ;玉米面15?25 ;谷糠7?11 ;白糖0· 8?L 2 ;地龍25?150 ;水 68. 75 ?150。
2. 如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括如下重量份的組分： 麥麩70 ;玉米面20 ;谷糠9 ;白糖1 ;地龍25?150 ;水68. 75?150。
3. 如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)基，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括如下重量份的組分： 麥麩70 ;玉米面20 ;谷糠9 ;白糖1 ;地龍66. 67 ;水100。
4. 一種生物轉(zhuǎn)化菌絲體，其特征在于，所述生物轉(zhuǎn)化菌絲體是將猴頭菌接種至權(quán)利要 求1至3任一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基中，在20?27°C條件下菌絲體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)30?40天，取出生 物轉(zhuǎn)化菌絲體，烘干，即得。
5. -種生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物，其特征在于，所述提取物通過如下步驟制得： (1) 將權(quán)利要求3所述的生物轉(zhuǎn)化菌絲體進(jìn)行第一次水常溫閃式提取，提取15?25分 鐘，然后進(jìn)行第二次水常溫閃式提取，提取15?25分鐘；第一次水常溫閃式提取中，水的重 量為生物轉(zhuǎn)化菌絲體重量的4?6倍；第二次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化菌絲 體重量的2?4倍； (2) 將提取后獲得的提取液離心后得到的上清液在55?60°C條件下減壓濃縮，將減壓 濃縮所得的濃縮液在-60?_55°C條件下真空冷凍干燥，即得生物轉(zhuǎn)化菌絲體提取物。
6. 如權(quán)利要求5所述的生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物，其特征在于，生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提 取物制備方法步驟（1)所述水常溫閃式提取的溫度為20?50°C。
7. 如權(quán)利要求5所述的生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物，其特征在于，生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提 取物制備方法步驟（1)所述第一次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化菌絲體重量的 5倍；第二次水常溫閃式提取中，水的重量為生物轉(zhuǎn)化菌絲體重量的3倍。
8. 如權(quán)利要求5所述的生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物，其特征在于，生物轉(zhuǎn)化"菌絲體"的 提取物制備方法步驟（2)中所述提取液離心條件為：轉(zhuǎn)速3500?4500轉(zhuǎn)/分鐘，離心8? 15分鐘。
9. 如權(quán)利要求5至8任一項(xiàng)所述生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物在制備抗凝血藥物中的應(yīng) 用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物轉(zhuǎn)化菌絲體的培養(yǎng)基、生物轉(zhuǎn)化菌絲體、生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物，該生物轉(zhuǎn)化菌絲體的培養(yǎng)基是在農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基中加入中藥物質(zhì)地龍，該生物轉(zhuǎn)化菌絲體是將猴頭菌接入上述培養(yǎng)基經(jīng)菌絲體轉(zhuǎn)化培養(yǎng)所得的產(chǎn)物，該生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物是采用水提處理所得的產(chǎn)物。該生物轉(zhuǎn)化菌絲體的提取物具有抗凝血作用，作用明顯優(yōu)于猴頭菌絲體或地龍的抗凝血作用，可用于制備抗凝血藥物。
【IPC分類】A61P7-02, C12R1-645, A61K36-06, C12N1-14
【公開號】CN104611232
【申請?zhí)枴緾N201410782249
【發(fā)明人】何述金, 常耀臺, 周代俊, 張如
【申請人】湖南新匯制藥股份有限公司
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2014年12月16日