50mL搖瓶中，30°C、170r/min搖瓶培養(yǎng)18?24h，得到種子液；將種子液按體積比10%的接種量接入種子罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、180r/min發(fā)酵培養(yǎng)20?24h，獲得發(fā)酵種子液，然后將發(fā)酵種子液按體積比10%的接種量接入發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、180r/min發(fā)酵培養(yǎng)36?48h，得到發(fā)酵菌液；種子罐和發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基為牛肉膏5g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 5g/L，pH7.0，121°C實罐滅菌25min。膠凍樣芽胞桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)過程是:將活化后保存于斜面上的菌種接于裝有10mL硅酸鹽細(xì)菌培養(yǎng)基的250mL搖瓶中，30°C、170r/min搖瓶培養(yǎng)18?24h，得到種子液；將種子液按體積比10%的接種量接入種子罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、180r/min發(fā)酵培養(yǎng)22?24h，獲得發(fā)酵種子液，然后將發(fā)酵種子液按體積比10%的接種量接入發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、180r/min發(fā)酵培養(yǎng)36?48h，得到發(fā)酵菌液；種子罐和發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖10g/L，酵母膏0.4g/L，K2HPO40.5g/L，CaCO3 lg/L，MgSO4.7H20 0.2g/L，F(xiàn)eCl3 0.005g/L，pH7.0 ?7.2，121°C實罐滅菌25min。褐球固氮菌的發(fā)酵培養(yǎng)過程是:將活化后保存于斜面上的菌種接于裝有10mL固氮菌培養(yǎng)基的250mL搖瓶中，30°C、170r/min搖瓶培養(yǎng)16?24h，得到種子液；將種子液按體積比10%的接種量接入種子罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、180r/min發(fā)酵培養(yǎng)16?24h，獲得發(fā)酵種子液，然后將發(fā)酵種子液按體積比10%的接種量接入發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，30°C、180r/min發(fā)酵培養(yǎng)36?48h，得到發(fā)酵菌液；種子罐和發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖1g/L，K2HP04.3Η20 0.5g/L，NaCl 0.2g/L,CaCO3 lg/L，MgSO4.7Η20 0.2g/L，pH7.0 ?7.2，121°C實罐滅菌25min。
[0025]調(diào)節(jié)上述發(fā)酵好的各種發(fā)酵液中菌濃度達(dá)到I X 19?1X10 nCFU/mL，將各種發(fā)酵液在20?30°C，3500?7000rpm條件下離心20?40min，離心沉淀物用無菌水洗滌I?5次，再次離心，離心沉淀物即為各菌種的菌泥。
[0026]實施例2
稱取枯草芽孢桿菌菌泥50g、地衣芽孢桿菌菌泥50g，與娃藻土 150g、膨潤土 150g混合，攪拌器勻速攪拌均勻，置于15?50°C的無菌通風(fēng)室中通風(fēng)干燥，至含水量< 10%，得到I型微生物制劑，有效活菌數(shù)> 2X108CFU/g。
[0027]稱取膠凍樣芽孢桿菌菌泥50g、地衣芽孢桿菌菌泥75g，與娃藻土 175g、膨潤土200g混合，添加鈣鎂磷肥75g，攪拌器勻速攪拌均勻，置于15?50°C的無菌通風(fēng)室中通風(fēng)干燥，至含水量< 10%，得到II型微生物制劑，有效活菌數(shù)> 2X108CFU/g。
[0028]稱取褐球固氮菌菌泥25g、巨大芽孢桿菌菌泥25g、膠凍樣芽孢桿菌菌泥50g、賴氨酸芽孢桿菌菌泥25g，與秸桿粉150g、木肩100g、草炭土 125g混合，再添加鈣鎂磷肥85g，攪拌器勻速攪拌均勻，置于15?50°C的無菌通風(fēng)室中通風(fēng)干燥，至含水量< 10%，得到III型微生物制劑，有效活菌數(shù)> 2X108CFU/g。
[0029]實施例3
稱取枯草芽孢桿菌菌泥50g、地衣芽孢桿菌菌泥75g，與娃藻土 200g、膨潤土 175g混合，攪拌器勻速攪拌均勻，置于15?50°C的無菌通風(fēng)室中通風(fēng)干燥，至含水量< 10%，得到I型微生物制劑，有效活菌數(shù)> 2X 18 CFU/g。
[0030]稱取膠凍樣芽孢桿菌菌泥75g、地衣芽孢桿菌菌泥75g，與娃藻土 200g、膨潤土250g混合，添加鈣鎂磷肥90g，攪拌器勻速攪拌均勻，置于15?50°C的無菌通風(fēng)室中通風(fēng)干燥，至含水量< 10%，得到II型微生物制劑，有效活菌數(shù)> 2X108CFU/g。
[0031]稱取褐球固氮菌菌泥50g、巨大芽孢桿菌菌泥75g、膠凍樣芽孢桿菌菌泥125g、賴氨酸芽孢桿菌菌泥100g，與秸桿粉350g、木肩350g、草炭土 350g混合，再添加鈣鎂磷肥250g，攪拌器勻速攪拌均勻，置于15?50°C的無菌通風(fēng)室中通風(fēng)干燥，至含水量< 10%，得到III型微生物制劑，有效活菌數(shù)> 2X 108CFU/g。
[0032]應(yīng)用例I
矸石山堆放時，首先在最下部鋪設(shè)厚度為6m的第一矸石層，機(jī)械壓實后，鋪設(shè)一層20cm厚的由粘黃土與粉煤灰按1: 0.6的比例混合的覆土層，機(jī)械壓實，每畝撒施5kg實施例2的I型微生物制劑。上部再堆積厚度3m的第二矸石層，壓實后在矸石層上堆積20cm后的粉煤灰層，機(jī)械壓實后，每畝撒施6kg實施例2的II型微生物制劑。之后再覆蓋Im的細(xì)小顆粒矸石層，機(jī)械壓實，覆蓋80cm的疏松黃土層，黃土層上撒施或條施實施例2的III型微生物制劑，用量為每畝9kg，并種植農(nóng)作物。
[0033]應(yīng)用例2
矸石山堆放時，首先在最下部鋪設(shè)厚度為Sm的第一矸石層，機(jī)械壓實后，鋪設(shè)一層30cm厚的由粘黃土與粉煤灰按1:1的比例混合的覆土層，機(jī)械壓實，每畝撒施8kg實施例3的I型微生物制劑。上部再堆積厚度5m的第二矸石層，壓實后在矸石層上堆積30cm后的粉煤灰層，機(jī)械壓實后，每畝撒施1kg實施例3的II型微生物制劑。之后再覆蓋2m的細(xì)小顆粒矸石層，機(jī)械壓實，覆蓋60cm的疏松黃土層，黃土層上撒施或條施實施例3的III型微生物制劑，用量為每畝10kg，并種植農(nóng)作物。
【主權(quán)項】
1.一種矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑，由各自獨立使用的I型微生物制劑、II型微生物制劑和III型微生物制劑三種微生物制劑構(gòu)成，其中: I型微生物制劑由吸附載體和吸附于所述吸附載體上的有效活菌組成，所述有效活菌由枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌構(gòu)成，所述枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的有效活菌數(shù)比例為1:1?1.5 ; II型微生物制劑由吸附載體、活性添加劑和吸附于所述吸附載體上的有效活菌組成，所述有效活菌由膠凍樣芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌構(gòu)成，所述膠凍樣芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的有效活菌數(shù)比例為1:1?1.5，所述活性添加劑為鈣鎂磷肥，添加量占II型微生物制劑總量的8?15wt% ； III型微生物制劑由吸附載體、活性添加劑和吸附于所述吸附載體上的有效活菌組成，所述有效活菌由褐球固氮菌、巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和賴氨酸芽孢桿菌構(gòu)成，所述褐球固氮菌、巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌與賴氨酸芽孢桿菌的有效活菌數(shù)比例為1:1?1.5: 2?2.5:1?2，所述活性添加劑為鈣鎂磷肥，添加量占III型微生物制劑總量的8?15wt% ； 以上所述三種微生物制劑中，每克微生物制劑中含有的有效活菌總數(shù)為(2?200) X 108CFU。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑，其特征是所述吸附于吸附載體上的有效活菌是由所述微生物菌種發(fā)酵液離心沉淀得到的菌泥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑，其特征是所述的吸附載體為硅藻土、膨潤土、秸桿粉、木肩或草炭土中的一種，或幾種的任意比例混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑，其特征是所述I型微生物制劑和II型微生物制劑中的吸附載體為硅藻土和/或膨潤土。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑，其特征是所述III型微生物制劑中的吸附載體為秸桿粉、木肩或草炭土中的一種，或幾種的任意比例混合物。
6.利用權(quán)利要求1所述矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑復(fù)墾煤矸石土壤的方法，是將矸石山分層覆土，并在所述覆土層中撒施所述微生物制劑，所述復(fù)墾煤矸石土壤從下向上依次為第一矸石層、粘黃土與粉煤灰混合覆土層、第二矸石層、粉煤灰覆土層、細(xì)小顆粒矸石層、黃土覆土層，在所述粘黃土與粉煤灰混合覆土層撒施I型微生物制劑，所述粉煤灰覆土層撒施II型微生物制劑，所述黃土覆土層撒施III型微生物制劑，農(nóng)作物種植在黃土覆土層上。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)墾煤矸石土壤的方法，其特征是所述I型、II型和III型微生物制劑在各自覆土層上的撒施量均為每畝施用5?10kg。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)墾煤矸石土壤的方法，其特征是所述的粘黃土、粉煤灰覆土層是由粘黃土與粉煤灰按照1: 0.6?I的質(zhì)量比混合構(gòu)成，所述覆土層厚度20?40cm。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)墾煤矸石土壤的方法，其特征是所述的粉煤灰覆土層厚度20 ?40cm。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的復(fù)墾煤矸石土壤的方法，其特征是所述的黃土覆土層由40?80cm厚的黃土構(gòu)成。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種矸石山復(fù)墾土壤用微生物制劑，由各自獨立使用的三種微生物制劑構(gòu)成，其中Ⅰ型微生物制劑中含有枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，Ⅱ型微生物制劑中含有凍膠樣芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，Ⅲ型微生物制劑中含有褐球固氮菌、巨大芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌和賴氨酸芽孢桿菌，每克微生物制劑中含有有效活菌總數(shù)(2～200)×108CFU。使用上述微生物制劑分層覆土復(fù)墾煤矸石土壤，從下向上依次布置第一矸石層、粘黃土與粉煤灰混合覆土層、第二矸石層、粉煤灰覆土層、細(xì)小顆粒矸石層和黃土覆土層，在粘黃土與粉煤灰混合覆土層撒施Ⅰ型微生物制劑，粉煤灰覆土層撒施Ⅱ型微生物制劑，黃土覆土層撒施Ⅲ型微生物制劑，農(nóng)作物種植在黃土覆土層上。
【IPC分類】C12R1-10, C12R1-125, C12N1-20, C12R1-07, C12R1-11, C05G3-00
【公開號】CN104630109
【申請?zhí)枴緾N201510062643
【發(fā)明人】郜春花, 李建華, 張強(qiáng), 靳東升, 盧朝東, 盧晉晶, 董云中
【申請人】山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境與資源研究所
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月6日