體種子液以100mL/kg的比例接種至固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，攪拌均勻， 淺盤遮蓋（留有l(wèi)cm的縫隙），50°C發(fā)酵5d。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基配方（W% )為小米99. 42%、 KN030. 1 %、K2HP040. 05 %、MgS04 ? 7H20 0.05%、NaCl0.05%、CaC030. 33 %，pH7. 2，小米按 I. 8mL/g的比例加水浸泡24h后121°C滅菌20min再與其它成分混合。
[0038] 3、灰略紅鏈霉菌經(jīng)搖瓶擴大培養(yǎng)、固態(tài)發(fā)酵5d后其有效活菌數(shù)達約0. 33億/g， pH 6. 6,水分 14. 5%。
[0039] 4、收集灰略紅鏈霉菌菌體及其發(fā)酵產(chǎn)物，用粉碎機粉碎成粉劑（不超過10s)，將 粉劑密封備用。
[0040] 實施例4腐熟菌劑的制備
[0041] 按照實施例1~3的制備方法中的步驟1的方法得到各菌體的營養(yǎng)種子液，將各 菌體的營養(yǎng)種子液按照一定比例接種到固態(tài)培養(yǎng)基中，按如下方法培養(yǎng)，分別得到粉劑A、 粉劑B、粉劑C。
[0042] 1、枯草芽孢桿菌，在固態(tài)培養(yǎng)基中30°C恒溫發(fā)酵4d，收集其菌體及發(fā)酵產(chǎn)物，將 其粉碎制成粉劑A。
[0043] 2、長枝木霉，在固態(tài)培養(yǎng)基中30°C恒溫發(fā)酵5d，收集其菌體及發(fā)酵產(chǎn)物，將其粉 碎制成粉劑B。
[0044] 3、灰略紅鏈霉菌，在固態(tài)培養(yǎng)基中50°C恒溫發(fā)酵3d，收集其菌體及發(fā)酵產(chǎn)物，將 其粉碎制成粉劑C。
[0045] 4、將上述粉劑A、B、C混合均勻，制備獲得秸桿腐熟菌劑，在陰涼干燥處保存。該腐 熟菌劑由以下質(zhì)量百分比組成：枯草芽孢桿菌粉劑5%，長枝木霉粉劑60%，灰略紅鏈霉菌 粉劑35%。該腐熟菌劑有效活菌數(shù)達約30. 75億/g，纖維素酶活為240U/g，pH 6. 48,水分 11%，細度 81%。
[0046] 實施例5本發(fā)明秸桿腐熟菌劑田間試驗1
[0047] 1試驗地點
[0048] 本實驗的樣品取自銅川耀州區(qū)董家河鎮(zhèn)王家貶村當年收獲的小麥秸桿，試驗所 在農(nóng)田為董家河鎮(zhèn)王家貶村，農(nóng)田指標狀況為土壤容重1. 45g/cm3、全氮1. 12g/kg、有機質(zhì) II. 5g/kg、堿解氮 41mg/kg、有效磷 15.8mg/kg、速效鉀 148mg/kg、pH 8. 1、水分 40%。
[0049] 2試驗方法
[0050] 2. 1秸桿抗拉強度法
[0051] 設(shè)5組處理，包括未還田1組、還田未施用腐熟菌劑2組（20d、30d)、還田且施用腐 熟菌劑2組（20d、30d)，每組處理設(shè)5個重復(fù)。樣品處理方法如下：選取粗細與長度接近的 小麥秸桿中下部，裁取節(jié)間秸桿10~15cm，用尼龍網(wǎng)袋分裝，每袋50根，即為一個重復(fù)。
[0052] 2. 2秸桿失重率法
[0053] 試驗設(shè)7組處理，包括未還田1組、還田未施用腐熟菌劑3組（10(1、20(1、30(1)、還田 且施用腐熟菌劑3組（10d、20d、30d)，每個處理設(shè)5個重復(fù)。樣品處理方法如下：選取粗細 與長度接近的小麥秸桿，裁成3~5cm小段，用尼龍網(wǎng)袋分裝，每袋10g，即為一個重復(fù)。
[0054] 將秸桿分散埋入距農(nóng)田土表5~10cm的土層中，對于還田且施用腐熟菌劑組的秸 桿，利用含有〇. 5%腐熟菌劑和0. 5%尿素的水溶液進行噴灑；對于還田未使用腐熟菌劑組 的樣品，利用含有0.5%尿素的水溶液進行噴灑，完成后用農(nóng)田土進行覆蓋，并做好標記。
[0055] 3取樣檢測
[0056] 對于秸桿抗拉強度法，在相應(yīng)時間點，每組取出全部5個重復(fù)，從每個重復(fù)中隨機 選取10根秸桿段，先用自來水輕柔沖洗秸桿段，直至滴下的水無色，即已將泥土等異物沖 洗干凈，再用自來水浸泡4~5h，使其充分潤濕。然后將秸桿段對折，用拉力計鉤住并用力 向外拉使其斷裂，記錄每根秸桿斷裂時拉力計上顯示的拉力數(shù)值。秸桿斷裂拉力下降率計 算方法如下：先計算未還田組平均拉力值隊、還田未施用腐熟菌劑組N CK、還田且施用腐熟 菌劑組Nx，再計算還田未施用腐熟菌劑組秸桿斷裂拉力下降率CCK= (N。一Nck)/NqX100%、 還田且施用腐熟菌劑組(^= (Nd-Nj/XXlOO%。對于還田樣品，不同取樣時間點的參數(shù) 分開計算，即NCK可分為N CK2°d、NCK3° d，Nx可分為N x2°d、Nx3° d〇
[0057] 對于秸桿失重率法，在相應(yīng)時間點，每組取出全部5個重復(fù)，用自來水輕柔沖洗秸 桿段，直至滴下的水無色，即已將泥土等異物沖洗干凈。然后將秸桿段置于烘箱中85°C烘干 6h，取出用天平稱重。秸桿失重率計算方法如下：先計算未還田組平均干重值凡，還田未施 用腐熟菌劑組MCK、還田且施用腐熟菌劑組M x，再計算還田未施用腐熟菌劑組秸桿失重率WCK =(MQ-MCK)/MQX100%、還田且施用腐熟菌劑組％= (M。一Mx)/MQX100%。對于還田組， 進而可計算各組失重率平均值，包括W eK1(ld、W。/'以及未施用腐熟菌劑 組的平均失重率 WeKAVE= (W /3、施用腐熟菌劑組 WXAVE= (W x1(ld+Wx2°d+W x3°d) /3。
[0058] 4結(jié)果與分析
[0059] 4. 1施用稻桿腐熟菌劑對小麥稻桿抗拉強度的影響
[0060] 從表1可知，施用秸桿腐熟菌劑組20d后與未施用秸桿腐熟菌劑相比斷裂拉力下 降率差值為19. 7 %，30d后下降率差值為23. 4 %，根據(jù)農(nóng)業(yè)部微生物肥料和食用菌菌種質(zhì) 量監(jiān)督檢驗測試中心相關(guān)規(guī)定，對于還田樣品，施用腐熟菌劑組與未施用腐熟菌劑組的秸 桿斷裂拉力下降率差值大于10%，可判定所用腐熟菌劑具有腐熟效果。本發(fā)明的斷裂拉力 下降率差值均大于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的數(shù)值，特別是秸桿腐熟后期，下降率差值更大，說明本發(fā)明 的秸桿腐熟菌劑能明顯加速秸桿腐熟。
[0061] 表1小麥秸桿斷裂拉力檢測結(jié)果
[0062]
【主權(quán)項】
1. 一種秸桿腐熟菌劑，其特征在于由枯草芽孢桿菌粉劑、長枝木霉粉劑和灰略紅鏈 霉菌粉劑復(fù)配組成，按質(zhì)量百分比的組成為枯草芽孢桿菌粉劑5%~15%、長枝木霉粉劑 50 %~70 %、灰略紅鏈霉菌粉劑25 %~45% ; 枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)三炬-07、長枝木霉（Trichoderma Iongibrachiatum)三炬-08 和灰略紅鏈霉菌（Streptomyces griseorubens)三炬-09 均 已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心登記入冊編號分別為 CGMCC No. 10248、CGMCC No. 10144、CGMCC No. 10247。
2. 如權(quán)利要求1所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于其具體步驟如下： 通過固態(tài)發(fā)酵法分別制備枯草芽孢桿菌、長枝木霉、灰略紅鏈霉菌的發(fā)酵菌體及其產(chǎn) 物，干燥后粉碎成枯草芽孢桿菌粉劑、長枝木霉粉劑和灰略紅鏈霉菌粉劑，混合后即得秸桿 腐熟菌劑。
3. 如權(quán)利要求2所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于通過固態(tài)發(fā)酵法制備 枯草芽孢桿菌的發(fā)酵菌體及其產(chǎn)物所采用的液體種子培養(yǎng)基的組成為：葡萄糖20.0 g/L、 蛋白胨16. 7g/L、NaCl 5. 3g/L、牛肉膏5. 3g/L，pH 7. 0 ;固態(tài)培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的組成為 麩皮 93. 97 %、豆柏粉 4. 94%、MgSO4 · 7H20 0· 05 %、NH4SO40.0 5 %、CaCO3O. 99 %，加入培養(yǎng) 料總質(zhì)量50%的水后混勻121°C滅菌lh。
4. 如權(quán)利要求2所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于通過固態(tài)發(fā)酵法制 備長枝木霉的發(fā)酵菌體及其產(chǎn)物所采用的液體種子培養(yǎng)基的組成為：馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基 粉劑33. 3g/L，pH自然；固態(tài)培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比的組成為麩皮93. 97%、豆柏粉4. 94%、 MgSO4 ·7Η20 0· 05%、NH4S040 . 05%、CaC030 . 99%，加入培養(yǎng)料總質(zhì)量 50%的水后混勻 121°C 滅菌lh〇
5. 如權(quán)利要求2所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于通過固態(tài)發(fā)酵法制 備灰略紅鏈霉菌的發(fā)酵菌體及其產(chǎn)物所采用的液體種子培養(yǎng)基的組成為：小米20.0 g/ L、KNO3L 0g/L、K2HPO4O. 5g/L、MgSO4 · 7H20 0· 5g/L、NaCl 0· 5g/L，pH 7. 2 ;固態(tài)培養(yǎng)基按 質(zhì)量百分比的組成為小米 99. 42%、KNO3O. 1%、K2HPO40.0 5%、MgSO4 · 7H20 (λ 05%、NaCl 0· 05%、CaCO3O. 33%，pH為L 2,小米按L 8mL/g的比例加水浸泡24h后121°C滅菌20min 再與其它成分混合。
6. 如權(quán)利要求2所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于所述固態(tài)發(fā)酵的條件 及其要求如下： 枯草芽孢桿菌液體種子以lOOmL/kg的比例接種至固態(tài)培養(yǎng)基中，于30°C恒溫發(fā)酵4~ 8d，發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵物水分< 21 %，有效活菌數(shù)為多50億/g。
7. 如權(quán)利要求2所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于所述固態(tài)發(fā)酵的條件 及其要求如下： 長枝木霉液體種子以lOOmL/kg的比例接種至固態(tài)培養(yǎng)基中，于30°C恒溫發(fā)酵4~9d， 發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵物水分< 20 %，有效活菌數(shù)為多1. 5億/g。
8. 如權(quán)利要求2所述一種秸桿腐熟菌劑的制備方法，其特征在于所述固態(tài)發(fā)酵的條件 及其要求如下： 灰略紅鏈霉菌液體種子以lOOmL/kg的比例接種至固態(tài)培養(yǎng)基中，于50°C發(fā)酵2~5d， 發(fā)酵結(jié)束時發(fā)酵物水分< 15 %，有效活菌數(shù)為多0. 2億/g。
9.如權(quán)利要求1所述秸桿腐熟菌劑在制備秸桿腐熟降解劑中應(yīng)用。
【專利摘要】一種秸稈腐熟菌劑及其制備方法和應(yīng)用，涉及腐熟菌劑。所述秸稈腐熟菌劑由枯草芽孢桿菌粉劑、長枝木霉粉劑和灰略紅鏈霉菌粉劑復(fù)配組成，枯草芽孢桿菌粉劑5％～15％、長枝木霉粉劑50％～70％、灰略紅鏈霉菌粉劑25％～45％。通過固態(tài)發(fā)酵法分別制備枯草芽孢桿菌、長枝木霉、灰略紅鏈霉菌的發(fā)酵菌體及其產(chǎn)物，干燥后粉碎成枯草芽孢桿菌粉劑、長枝木霉粉劑和灰略紅鏈霉菌粉劑，混合后即得秸稈腐熟菌劑。所述秸稈腐熟菌劑可在制備秸稈腐熟降解劑中應(yīng)用。CGMCC No.1024820141229 CGMCC No.1014420141229 CGMCC No.1024720141229
【IPC分類】C05F11-08, C12N1-14, C12N1-20, C12R1-125, C12R1-885, C12R1-465
【公開號】CN104651277
【申請?zhí)枴緾N201510067182
【發(fā)明人】余勁聰, 林克明
【申請人】福建三炬生物科技股份有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月9日