一種香蕉皮多糖提取及其純化方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及成分提取技術(shù)領域，特別涉及一種香蕉皮多糖提取及其純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]香蕉，作為中國最主要的經(jīng)濟作物之一，種植歷史悠久且年產(chǎn)量大。人們大多重視果肉，忽略了香蕉皮帶給人們的價值。香蕉皮大約占其果實的30%左右，目前，絕大多數(shù)香蕉皮直接作為廢棄物處理，不僅浪費資源而且污染環(huán)境。若能開發(fā)利用香蕉皮中的各種功能性成分，將是解決香蕉皮處理的新途徑，又能提高香蕉皮的經(jīng)濟價值。近年來研宄表明，香蕉皮中含有黃酮類、酚類、有機酸類及植物多糖等化合物。
[0003]研宄表明，香蕉多糖既具有治療作用又具有保健價值，如:在臨床上有抗病毒、抗癌、降血壓、美容、乳化等作用。同時能有效地提升人體免疫力，又是細胞和細胞器結(jié)構(gòu)的重要部分，是人體細胞或細胞器維系正常功能不可或缺的主要成分，而且對人乳細胞有明顯的抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點與不足，提供一種香蕉皮多糖提取及其純化方法。
[0005]本發(fā)明的另一目的在于提供由上述提取及其純化方法得到的香蕉皮多糖。
[0006]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn):一種香蕉皮多糖提取及其純化方法(超聲波-微波協(xié)同提取法)，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80°C浸泡30-90min后，超聲波開關(guān)開，微波輻射功率60-100W，超聲波-微波協(xié)同提取30_60min，離心，取上清液；將濾渣重復提取，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt%三氯乙酸進行萃取，振蕩后離心，取上清液，重復萃取操作，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積10wt% H2O2，振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作至濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀，得到香蕉皮多糖；1克香蕉皮樣品加入10-20毫升純凈水。
[0007]所述的香蕉皮樣品優(yōu)選采用如下方法進行處理:將香蕉皮清洗干凈，于60°C烘干至恒質(zhì)量，取出后自然陰干，粉碎，過80目篩，依次用石油醚、80被％乙醇處理，干燥至恒重，得到香蕉皮樣品。
[0008]所述的離心為于4000r/min離心15min。
[0009]所述的重復提取的次數(shù)優(yōu)選為1-2次。
[0010]所述的振蕩后離心優(yōu)選采用如下方法進行操作:振蕩20min后，3000r/min離心30mino
[0011]所述的重復萃取操作的次數(shù)優(yōu)選為2-3次。
[0012]所述的重復操作的次數(shù)優(yōu)選為2-3次。
[0013]優(yōu)選的，一種香蕉皮多糖提取及其純化方法(超聲波-微波協(xié)同提取法)，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80°C浸泡60min后，超聲波開關(guān)開，于10W微波輻射提取30min，離心，取上清液；將濾渣重復提取，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt %三氯乙酸進行萃取，振蕩后離心，取上清液，重復萃取操作，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積1wt % H2O2,振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作至濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀，得到香蕉皮多糖；1克香蕉皮樣品加入20毫升純凈水。
[0014]所述的香蕉皮優(yōu)選為經(jīng)過脫脂、粉碎的香蕉皮。
[0015]一種香蕉皮多糖，由上述提取及其純化方法得到。
[0016]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點及效果:本發(fā)明采用超聲波-微波協(xié)同提取香蕉皮中的多糖，其提取率明顯高于傳統(tǒng)回流提取法和單獨使用超聲波法或單獨使用微波法，且超聲波-微波協(xié)同提取法具有選擇性好，效率高，提取時間短、試劑用量少，傳熱時間快、節(jié)能、操作簡便，安全性好，過程容易控制等優(yōu)點。除了超聲波產(chǎn)生的空化效應、熱效應和機械作用外，微波還具有波動性、高頻性的特性，強化了傳遞過程，熱量通過微波轉(zhuǎn)換得到而不存在傳遞的問題，從而實現(xiàn)高強度的均勻加熱，而質(zhì)量的傳遞由于分子的高速擺動及溫度的升高而得到強化。同時植物內(nèi)介電系數(shù)較大的極性分子吸收微波產(chǎn)生熱量，發(fā)生汽化或膨脹，內(nèi)滲透壓增加而破壞植物的細胞結(jié)構(gòu)，使擴散孔道變大，縮短了破碎時間，加強了細胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴散和溶解，從而顯著提高提取效率。
【附圖說明】
[0017]圖1為葡糖糖的標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0018]下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。
[0019]實驗材料與試劑:
[0020]市場上購買新鮮成熟的香蕉，剝?nèi)「蓛魺o腐爛的香蕉皮，將香蕉皮洗凈，在60°C恒溫干燥箱中烘干至恒重，取出自然晾干，粉碎，過80目篩，依次用石油醚處理2次，除去脂類，再用80wt%Z醇處理2次，除去單糖等物質(zhì)，干燥至恒定質(zhì)量，備用。
[0021]葡萄糖標品(色譜純，上海譜振生物科技有限公司)，甲醇(AR)，無水乙醇(AR)，正丁醇(AR)，氯仿(AR)，濃硫酸(AR)，苯酚(AR)，H2O2 (AR)，三氯乙酸(AR)。以上試劑均為國內(nèi)產(chǎn)。
[0022]實驗儀器:
[0023]XH-300A微波催化合成/萃取儀(北京祥鵠科技發(fā)展有限公司)，UV-2450型紫外可見分光光度計(日本島津)，12E-5299型恒溫水浴鍋(亞興泰機電設備有限公司)，SH-1II型循環(huán)水真空泵(鞏義市英峪高科儀器廠)，80-3臺式低速離心機，F(xiàn)W-177型中草藥粉碎機(天津泰斯特)，RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，L-S電子天平(0.lmg，梅特勒-托利多儀器公司)。
[0024]實施例1
[0025](一)一種香蕉皮多糖提取及其純化方法，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80 °C浸泡60min后，超聲波開，于100W微波提取30min，于4000r/min離心15min，取上清液；將濾渣重復提取I次，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt%三氯乙酸進行萃取，振蕩20min后，3000r/min離心30min，取上清液，重復萃取操作2次，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積1wt % H2O2,振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作2次，濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀(得到香蕉皮多糖)，用80°C純凈水溶解，將溶液全部轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中后定容，作為供試液樣品；1克香蕉皮樣品加入20毫升純凈水。香蕉皮多糖的收率為96.7%。
[0026]( 二)香蕉皮多糖的含量測定:
[0027]以苯酚-硫酸法檢測香蕉皮多糖的含量。準確移取供試液樣品1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，用純凈水補至2.0mL，順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL，振搖均勻，靜置20min，用UV-2450型紫外可見分光光度計在波長為300_600nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在490nm處有最大吸收峰，證明有多糖存在。
[0028](I)標準曲線的建立
[0029]取葡萄糖標品于烘箱(105°C )內(nèi)烘干至恒定質(zhì)量，精確稱取lOOmg，加純凈水溶解并定容至10mL，配置成質(zhì)量濃度為lOmg/mL的標準溶液。分別精確移取葡萄糖標準液0.00、0.20,0.40,0.60,0.80,1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，各以純凈水補至2.0mL,順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL,振搖均勻，靜置20min，依次配制成質(zhì)量濃度分別為0.00,0.08,0.16,0.24,0.32,0.40mg 系列溶液，以試劑空白為參比，在490nm波長下測定吸光度，以吸光度為橫坐標(A)，相對應的葡萄糖含量為縱坐標(C)，繪制標準曲線如圖1所示，標準曲線方程為:A = 0.4061C-0.002，R2= 0.9987，表明葡萄糖標準品在0.01?0.40ng.ml/1之間，與吸光度具有良好地線性關(guān)系。
[0030](2)多糖含量的測定
[0031 ] 準確移取供試液樣品0.1mL于25mL容量瓶中，按照制作標準曲線溶液的方法配制樣品溶液并定容至25mL，用UV-2450型紫外可見光分光光度計，測定波長490nm處樣品的吸光度；經(jīng)計算，香蕉皮多糖的含量為7.61 % (η = 3)。
[0032]多糖的提取量(g.mL—1)=多糖質(zhì)量濃度(mg.mL—1) X 10_3X稀釋倍數(shù)
[0033]多糖含量)=多糖提取量X 10mL/香蕉皮樣品質(zhì)量
[0034]實施例2
[0035](一)一種香蕉皮多糖提取及其純化方法，包括如下步驟:取香蕉皮樣品，加入純凈水后搖勻，80°C浸泡30min后，超聲波開，于60W微波提取40min，于4000r/min離心15min，取上清液；將濾渣重復提取2次，合并上清液，減壓濃縮；取濃縮液，加入5wt%三氯乙酸進行萃取，振蕩20min后，3000r/min離心30min，取上清液，重復萃取操作2次，直至無明顯沉淀，將上清液合并，加入0.3倍體積1wt % H2O2,振蕩后靜置，過濾，取濾液，重復操作3次，濾液淡黃色至無色，得到香蕉皮濾液，加入3倍體積的95wt%乙醇，4°C沉淀后于9000r/min離心lOmin，取沉淀(得到香蕉皮多糖)，用80°C純凈水溶解，將溶液全部轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中后定容，作為供試液樣品；1克香蕉皮樣品加入10毫升純凈水。香蕉皮多糖的收率為93.6%。
[0036]( 二)香蕉皮多糖的含量測定:
[0037]以苯酚-硫酸法檢測香蕉皮多糖的含量。準確移取供試液樣品1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，用純凈水補至2.0mL，順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL，振搖均勻，靜置20min，用UV-2450型紫外可見分光光度計在波長為300_600nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在490nm處有最大吸收峰，證明有多糖存在。
[0038](I)標準曲線的建立
[0039]取葡萄糖標品于烘箱(105°C )內(nèi)烘干至恒定質(zhì)量，精確稱取lOOmg，加純凈水溶解并定容至10mL，配置成質(zhì)量濃度為lOmg/mL的標準溶液。分別精確移取葡萄糖標準液0.00、0.20,0.40,0.60,0.80,1.0OmL于25mL具塞刻度試管中，各以純凈水補至2.0mL,順序加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸5.0mL,振搖均勻，靜置20min，依次配制成質(zhì)量濃