用于預(yù)測兒童青春期持續(xù)肥胖的試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及用于預(yù)測兒童青春期持續(xù)肥胖的試劑盒及其 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肥胖是當前全球性的重大公共衛(wèi)生問題，近三十年來，無論是發(fā)達國家還是發(fā)展 中國家，也無論男女老幼，超重和肥胖的發(fā)生率均呈現(xiàn)持續(xù)升高的趨勢（Lancet. 2014 Aug 30 ;384(9945) :766-81)。肥胖是公認會提高心血管疾?。ㄈ绻谛牟『椭酗L(fēng)）、糖尿病、腎病、 腫瘤（尤其是腸道腫瘤）的發(fā)病率和致死率的重要危險因素（1^1^的2011;377:1085 -95 ；Lancet Diabetes Endocrinol. 2014 Aug ；2 (8):634-47 ；Lancet Oncology 2015 Jan； 16(1) :36-46)，兒童及青少年肥胖則往往會發(fā)展為成人肥胖、并促使上述相關(guān)疾病的發(fā)病 年齡提前（N Engl J Med 2011 ;364:1315-1325)。因此，更有效的檢測肥胖的發(fā)生、預(yù)測肥 胖相關(guān)疾病的發(fā)病風(fēng)險，對于提高公共健康具有重要的意義。
[0003] 各國定義肥胖的標準不盡相同，主要依據(jù)是身體脂肪含量與疾病發(fā)病率和死亡率 的相關(guān)性，因此篩查肥胖的方法均是圍繞著測定體脂含量而進行的。常用的肥胖篩查方法 有：水下稱重法，生物電阻抗法，雙能X線吸收法，皮下脂肪厚度直接測定、皮下脂肪厚度超 聲波測量法，腰圍、臀圍法，身高體重比值法（BMI =體重/身高2,單位分別是公斤和米）（參 考文獻：中國學(xué)校衛(wèi)生2008年10月第29卷第10期，966-968頁）。
[0004] 上述方法中，水下稱重法復(fù)雜且受場地條件限制，生物電阻抗法的重復(fù)性和準確 性易受調(diào)查現(xiàn)場的干擾，雙能X線吸收法的射線儀和掃描儀價格昂貴、還要配備相應(yīng)的軟 件系統(tǒng)評價身體組成，而皮下脂肪測定、腰圍臀圍測定等人體測量方法往往需要聯(lián)合使用 才能獲得較好的準確性和參考價值。因此這些方法都存在自身固有的缺陷。能夠較好符合 體重變化、且受身高影響較小的方法是BMI法，這也是目前流行病學(xué)調(diào)查最常用的方法。
[0005] 兒童肥胖的篩查類似于成人肥胖，也是采用上述的方法，以BMI法最為常用。但 是，不同于成人肥胖標準的制定有相應(yīng)的疾病發(fā)病率和死亡率可以作為參考依據(jù)，兒童期 的肥胖往往不會導(dǎo)致明顯的臨床癥狀，更很少會導(dǎo)致死亡，兒童期肥胖的危害在于其遠期 影響，即導(dǎo)致兒童成年后的持續(xù)肥胖和罹患相關(guān)疾病，但這種遠期影響的概率、機制都尚不 清楚。因此兒童超重、肥胖標準是根據(jù)某國家、地區(qū)兒童生長發(fā)育指標的統(tǒng)計學(xué)分布來確定 的。這就意味著兒童超重和肥胖的標準，除了各種篩查方法固有的缺陷外，標準自身也不一 定能準確反映某個肥胖兒童個體是否真正是肥胖，更無法協(xié)助預(yù)測該肥胖兒童將來是否會 繼續(xù)保持肥胖、甚至有所發(fā)展。
[0006] 腸道菌群是共生于人體腸道內(nèi)的細菌的總合，已知它們具有輔助消化食物成分、 調(diào)節(jié)人體從食物中攝入氨基酸、維生素和能量物質(zhì)、刺激人體免疫細胞的分化和成熟等功 能，被認為是人體的又一"器官"。近年來，隨著第二代測序技術(shù)的發(fā)展，對腸道菌群的研宄 也更加廣泛和深入。目前的研宄結(jié)果證實，腸道菌群通過調(diào)節(jié)食物中的能量和脂質(zhì)攝入，參 與肥胖的發(fā)生；同時腸道菌群在代謝及免疫方面的作用又參與了糖尿病、動脈粥樣硬化、月中 瘤等肥胖相關(guān)疾病的發(fā)生。
[0007] 鑒于腸道菌群的具體構(gòu)成，包括細菌的種屬類型和各種細菌所占的豐度，受飲食 習(xí)慣、生活環(huán)境、年齡、種族、用藥等諸多因素的影響，既往研宄也證實，不同國家和地區(qū)的 人群具有明顯不同的腸道菌群結(jié)構(gòu)，因此對于我國兒童肥胖的腸道菌群特征需要做具體分 析，而不能照搬國外的分析結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的一個目的是提供檢測待測兒童腸道菌群中目的菌豐度的物質(zhì)的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供了檢測待測兒童腸道菌群中目的菌豐度的物質(zhì)在制備用于預(yù)測兒童 在青春期發(fā)生肥胖或持續(xù)肥胖的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述目的菌為Firmicutes、Clostridia、 Clostridiales、 Clostridiaceae、 Clostridium、 Bacteroidetes、 Bacteroidia、 Bacteroidales、Bacteroidaceae、Bacteroides、Oscillospira、Coriobacteriaceae 和 Collinsella 中任一種。
[0010] 上述應(yīng)用中，所述待測兒童腸道菌群中目的菌豐度為待測兒童腸道菌群中目的菌 在所述待測兒童腸道菌群中的含量。
[0011] 所述待測兒童腸道菌群中目的菌在所述待測兒童腸道菌群中的含量為所述待測 兒童腸道菌群中目的菌16S核糖體RNA基因的第3可變區(qū)-第5可變區(qū)（V3-V5)區(qū)間擴增 產(chǎn)物的DNA片段個數(shù)與所述待測兒童腸道菌群所有細菌16S核糖體RNA基因的V3-V5區(qū)間 擴增產(chǎn)物的DNA片段個數(shù)的百分比。
[0012] 上述應(yīng)用中，所述待測兒童為中國7-10歲的肥胖兒童和/或中國7-10歲的正常 體重兒童；所述青春期為12-18歲。
[0013] 上述應(yīng)用中，所述檢測待測兒童腸道菌群中目的菌豐度的物質(zhì)包括由序列表中序 列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對。
[0014] 本發(fā)明的另一個目的是提供檢測待測兒童腸道菌群中目的菌豐度的物質(zhì)。
[0015] 本發(fā)明提供的物質(zhì)，其為預(yù)測兒童在青春期發(fā)生肥胖或持續(xù)肥胖的產(chǎn)品。
[0016] 上述檢測待測兒童腸道菌群中目的菌豐度的物質(zhì)為1)或2):
[0017] 1)由序列表中序列1所示的單鏈DNA分子和序列表中序列2所示的單鏈DNA分子 組成的引物對；
[0018] 2)含有所述引物對的試劑盒。
[0019] 上述物質(zhì)中，所述待測兒童為中國7-10歲的肥胖兒童和/或中國7-10歲的正常 體重兒童；
[0020] 所述青春期為12-18歲。
[0021] 上述物質(zhì)中，所述待測兒童為中國7-10歲的肥胖兒童，所述試劑盒還包括記載在 可讀載體上的如下條件：
[0022] 1)若待測兒童腸道菌群滿足如下A-D至少一種條件，則該待測兒童將會在青春期 發(fā)生肥胖或持續(xù)肥胖：
[0023] A. Firmicutes (厚壁菌門）連續(xù)兩年的豐度均高于0· 81且小于1，且 Clostridia (梭菌綱）或Clostridiales (梭菌目）連續(xù)兩年的豐度均高于0.785且小于 1 ;
[0024] B. Bacteroidetes (擬桿菌門）、Bacteroidia (擬桿菌綱）或 Bacteroidales (擬 桿菌目）連續(xù)兩年的豐度均低于〇. 167且大于0,同時Bacteroidaceae (擬桿菌科）或 Bacteroides (擬桿菌屬）連續(xù)兩年的豐度均低于0. 153且大于0 ;
[0025] C. Oscillospira (顫螺菌屬）連續(xù)兩年的豐度均低于0· 0035且大于0 ;
[0026] D. Coriobacteriaceae (紅疇菌科）或Collinsella (柯林斯氏菌屬）連續(xù)兩年的 豐度均為〇-〇. 05,且第二年比第一年豐度高1倍以上（1-3倍，甚至可以達到10倍以上）；
[0027] 2)若待測兒童腸道菌群不滿足1)中任一條件，則該待測兒童將不會在青春期發(fā) 生肥胖或持續(xù)肥胖。
[0028] 上述物質(zhì)中，所述待測兒童為中國7-10歲的肥胖兒童和中國7-10歲的正常體重 兒童，所述試劑盒還包括記載在可讀載體上的如下條件：
[0029] 1)若所述待測7-10歲的中國肥胖兒童腸道菌群滿足如下A-D至少一種條件，則該 待測7-10歲的中國肥胖兒童將會在青春期發(fā)生肥胖或持續(xù)肥胖：
[0030] A. Firmicutes連續(xù)兩年的豐度均高于0· 81且小于1，且Clostridia或 Clostridiales連續(xù)兩年的豐度均高于0. 785且小于1 ;
[0031] B. Bacteroidetes、Bacteroidia 或 Bacteroidales 連續(xù)兩年的豐度均低于 0· 167 且大于0,同時Bacteroidaceae或Bacteroides連續(xù)兩年的豐度均低于0. 153且大于0 ;
[0032] C. Oscillospira連續(xù)兩年的豐度均低于0· 0035且大于0 ;
[0033] D. Coriobacteriaceae 或 Collinsell