的所述部分來源于具有表1中顯示 的氨基酸序列的人FGFl的直系同源物。
[0059] 表 1:
[0060]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種嵌合蛋白，其包含： 偶連于C末端的N末端，其中所述N末端包含旁分泌成纖維細(xì)胞生長因子（"FGF"）的 一部分并且所述C末端包含F(xiàn)GF21分子的C末端部分，以及其中所述旁分泌FGF的所述部分 被修飾來相較于不具有所述修飾的部分，減小針對肝素和/或硫酸類肝素的結(jié)合親和力。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述旁分泌FGF為FGFl或FGF2。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述旁分泌FGF的所述部分包含始于SEQ ID NO: 1的殘基1至25的任一個(gè)并終于殘基150至155的任一個(gè)的氨基酸序列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述旁分泌FGF的所述部分包括始于SEQ ID NO: 121的殘基1至25的任一個(gè)并終于殘基151至155的任一個(gè)的氨基酸序列。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的嵌合蛋白，其中所述旁分泌FGF的所述部分包括SEQ ID N0:1 的氨基酸殘基 1-150、1-151、1-152、1-153、1-154、1-155、2-150、2-151、2-152、2-153、 2-154、2-155、3-150、3-151、3-152、3-153、3-154、3-155、4-150、4-151、4-152、4-153、 4- 154、4-155、5-150、5-151、5-152、5-153、5-154、5-155、6-150、6-151、6-152、6-153、 6- 154、6-155、7-150、7-151、7-152、7-153、7-154、7-155、8-150、8-151、8-152、8-153、 8-154、8-155、9-150、9-151、9-152、9-153、9-154、9-155、10-150、10-151、10-152、10-153、 10-154、10-155、11-150、11-151、11-152、1卜153、11-154、11-155、12-150、12-151、12-152、 12-153、12-154、12-155、13-150、13-151、13-152、13-153、13-154、13-155、14-150、14-151、 14-152、14-153、14-154、14-155、15-150、15-151、15-152、15-153、15-154、15-155、16-150、 16-151、16-152、16-153、16-154、16-155、17-150、17-151、17-152、17-153、17-154、17-155、 18- 150、18-151、18-152、18-153、18-154、18-155、19-150、19-151、19-152、19-153、19-154、 19- 155、20-150、20-151、20-152、20-153、20-154、21-150、21-155、21-151、21-152、21-153、 21-154、21-155、22-150、22-151、22-152、22-153、22-154、22-155、23-150、23-151、23-152、 23-153、23-154、23-155、24-150、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、25-150、25-151、 25-152、25-153、25-154 或 25-155。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的嵌合蛋白，其中所述旁分泌FGF的所述部分包括SEQ ID N0:121 的氨基酸殘基 1-151、1-152、1-153、1-154、1-155、2-151、2-152、2-153、2-154、 2-155、3-151、3-152、3-153、3-154、3-155、4-151、4-152、4-153、4-154、4-155、5-151、 5- 152、5-153、5-154、5-155、6-151、6-152、6-153、6-154、6-155、7-151、7-152、7-153、 7- 154、7-155、8-151、8-152、8-153、8-154、8-155、9-151、9-152、9-153、9-154、9-155、 10-151、10-152、10-153、10-154、10-155、11-151、11-152、11-153、11-154、11-155、12-151、 12-152、12-153、12-154、12-155、13-151、13-152、13-153、13-154、13-155、14-151、14-152、 14-153、14-154、14-155、15-151、15-152、15-153、15-154、15-155、16-151、16-152、16-153、 16-154、16-155、17-151、17-152、17-153、17-154、17-155、18-151、18-152、18-153、18-154、 18-155、19-151、19-152、19-153、19-154、19-155、20-151、20-152、20-153、20-154、21-155、 21-151、21-152、21-153、21-154、21-155、22-151、22-152、22-153、22-154、22-155、23-151、 23-152、23-153、23-154、23-155、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、25-151、25-152、 25-153、25-154 或 25-155。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的嵌合蛋白，其中所述修飾包含位于SEQ ID NO: 1的一個(gè)或 多個(gè)氨基酸殘基上的一個(gè)或多個(gè)置換，所述氨基酸殘基選自N33、K127、K128、N129、K133、 R134、R137、Q142、K143 及其組合。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的嵌合蛋白，其中所述一個(gè)或多個(gè)置換選自N33T、K127D、 K128Q、N129T、K133V、R134L、R137H、Q142M、K143T/L/I 及其組合。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的嵌合蛋白，其中所述修飾包含位于SEQ ID NO: 121的一個(gè)或 多個(gè)氨基酸殘基上的一個(gè)或多個(gè)置換，所述氨基酸殘基選自N36、K128、R129、K134、K138、 Q143、K144、C78、C96 及其組合。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的嵌合蛋白，其中所述一個(gè)或多個(gè)置換選自N36T、K128D、 R129Q、K134V、K138H、Q143M、K144T/L/I、C78S、C96S 及其組合。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述C末端部分包含0 -Klotho共受體結(jié)合 結(jié)構(gòu)域。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合蛋白，其中所述C末端部分包含SEQ ID NO: 233的氨基 酸殘基168-209。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的嵌合蛋白，其中所述C末端部分還包含一個(gè)或多個(gè)缺失或 置換，同時(shí)保持結(jié)合0 -Klotho的能力。
14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的嵌合蛋白，其中所述FGF21的C末端部分還包含一個(gè)或多 個(gè)置換、添加或缺失來相較于不具有所述修飾的C末端部分，增強(qiáng)針對-Klotho的結(jié)合親 和力。
15. -種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1所述的嵌合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其還包含： 一種或多種選自抗炎劑、抗纖維化劑、抗高血壓劑、抗糖尿病劑、降甘油三酯劑和降膽 固醇劑的試劑。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其還包含向器官靶向劑。
18. -種用于治療患有病癥的受試者的方法，所述方法包括： 選擇患有所述病癥的受試者； 提供嵌合成纖維細(xì)胞生長因子（"FGF"）蛋白，其中所述嵌合FGF蛋白包含偶連于C末 端的N末端，其中所述N末端包含旁分泌FGF的一部分并且所述C末端包含F(xiàn)GF21的C末 端部分，以及其中所述旁分泌FGF的所述部分被修飾來相較于不具有所述修飾的部分，減 小針對肝素和/或硫酸類肝素的結(jié)合親和力；和 在對于治療所述病癥是有效的條件下給選擇的受試者施用治療有效量的嵌合FGF蛋 白。
19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述旁分泌FGF為FGFl或FGF2。
20. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述旁分泌FGF的所述部分包含始于SEQ ID NO: 1的殘基1至25的任一個(gè)并終于殘基150至155的任一個(gè)的氨基酸序列。
21. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述旁分泌FGF的所述部分包含始于SEQ ID NO: 121的殘基1至25的任一個(gè)并終于殘基151至155的任一個(gè)的氨基酸序列。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述旁分泌FGF的所述部分包含SEQ ID NO: 1的 氨基酸殘基 1-150、1-151、1-152、1-153、1-154、1-155、2-150、2-151、2-152、2-153、2-154、 2-155、3-150、3-151、3-152、3-153、3-154、3-155、4-150、4-151、4-152、4-153、4-154、 4-155、5-150、5-151、5-152、5-153、5-154、5-155、6-150、6-151、6-152、6-153、6-154、 6- 155、7-150、7-151、7-152、7-153、7-154、7-155、8-150、8-151、8-152、8-153、8-154、 8-155、9-150、9-151、9-152、9-153、9-154、9-155、10-150、10-151、10-152、10-153、10-154、 10-155、11-150、11-151、11-152、11-153、11-154、11-155、12-150、12-151、12-152、12-153、 12-154、12-155、13-150、13-151、13-152、13-153、13-154、13-155、14-150、14-151、14-152、 14-153、14-154、14-155、15-150、15-151、15-152、15-153、15-154、15-155、16-150、16-151、 16-152、16-153、16-154、16-155、17-150、17-151、17-152、17-153、17-154、17-155、18-150、 18- 151、18-152、18-153、18-154、18-155、19-150、19-151、19-152、19-153、19-154、19-155、 20- 150、20-151、20-152、20-153、20-154、21-150、21-155、21-151、21-152、21-153、21-154、 21- 155、22-150、22-151、22-152、22-153、22-154、22-155、23-150、23-151、23-152、23-153、 23-154、23-155、24-150、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、25-150、25-151、25-152、 25-153、25-154 或 25-155。
23. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述旁分泌FGF的所述部分包含SEQ ID NO: 121 的氨基酸殘基 1-151、1_152、1-153、1-154、1-155、2-151、2-152、2-153、2-154、2-155、 3-151、3-152、3-153、3-154、3-155、4-151、4-152、4-153、4-154、4-155、5-151、5-152、 5-153、5-154、5-155、6-151、6-152、6-153、6-154、6-155、7-151、7-152、7-153、7-154、 7- 155、8-151、8-152、8-153、8-154、8-155、9-151、9-152、9-153、9-154、9-155、10-151、 10-152、10-153、10-154、10-155、11-151、1卜152、11-153、11-154、11-155、12-151、12-152、 12-153、12-154、12-155、13-151、13-152、13-153、13-154、13-155、14-151、14-152、14-153、 14-154、14-155、15-151、15-152、15-153、15-154、15-155、16-151、16-152、16-153、16-154、 16-155、17-151、17-152、17-153、17-154、17-155、18-151、18-152、18-153、18-154、18-155、 19- 151、19-152、19-153、19-154、19-155、20-151、20-152、20-153、20-154、21-155、21-151、 21-152、21-153、21-154、21-155、22-151、22-152、22-153、22-154、22-155、23-151、23-152、 23-153、23-154、23-155、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、25-151、25-152、25-153、 25-154 或 25-155。
24. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述修飾包含位于SEQ ID NO: 1的一個(gè)或多個(gè) 氨基酸殘基上的一個(gè)或多個(gè)置換，所述氨基酸殘基選自N33、K127、K128、N129、K133、R134、 R137、Q142、K143 及其組合。
25. 根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)置換選自N33T、K127D、K128Q、 N129T、K133V、R134L、R137H、Q142M、K143T/L/I 及其組合。
26. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述修飾包含位于SEQ ID NO: 121的一個(gè)或 多個(gè)氨基酸殘基上的一個(gè)或多個(gè)置換，所述氨基酸殘基選自N36、K128、R129、K134、K138、 Q143、K144、C78、C96 及其組合。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)置換選自N36T、K128D、R129Q、 K134V、K138H、Q143M、K144T/L/I、C78S、C96S 及其組合。
28. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述C末端部分包含0 -Klotho共受體結(jié)合結(jié) 構(gòu)域。
29. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述C末端部分包含SEQ ID NO: 233的氨基酸 殘基 168-209。
30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中FGF21的C末端部分還包含一個(gè)或多個(gè)置換、添 加或缺失，同時(shí)保持結(jié)合0 -Klotho的能力。
31. 根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中FGF21的C末端部分還包含一個(gè)或多個(gè)置換、添 加或缺失來相較于不具有所述修飾的C末端部分，增強(qiáng)針對0 -Klotho的結(jié)合親和力。
32. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述病癥選自糖尿病、肥胖癥和代謝綜合征。
33. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述病癥是II型糖尿病、妊娠糖尿病或藥物引 起的糖尿病。
34. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述病癥是I型糖尿病。
35. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述病癥是肥胖癥。
36. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述病癥是代謝綜合征。
37. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述施用通過胃腸外、皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜 內(nèi)途徑，通過鼻內(nèi)滴注，通過植入，通過腔內(nèi)或膀胱內(nèi)滴注、眼內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、病變內(nèi)、經(jīng)皮膚途 徑，或通過對粘膜的敷用來進(jìn)行。
38. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中將所述嵌合FGF蛋白與藥學(xué)上可接受的載體一 起施用。
39. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述選擇的受試者為哺乳動(dòng)物。
40. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述選擇的受試者為人。
41. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中將所述嵌合FGF與一種或多種試劑共施用，所述 試劑選自抗炎劑、抗纖維化劑、抗高血壓劑、抗糖尿病劑、降甘油三酯劑和降膽固醇劑。
42. -種產(chǎn)生具有增強(qiáng)的內(nèi)分泌活性的嵌合成纖維細(xì)胞生長因子（"FGF"）蛋白的方 法，所述方法包括： 將一個(gè)或多個(gè)修飾引入FGF蛋白，其中所述修飾減小所述FGF蛋白針對肝素和/或硫 酸類肝素的親和力；和 將Klotho共受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域偶連于所述修飾FGF蛋白的C末端，由此產(chǎn)生具有增強(qiáng)的 內(nèi)分泌活性的嵌合FGF蛋白。
43. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其還包括： 在所述偶連之前，選擇Klotho共受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中所述Klotho共受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域 被選擇來靶向內(nèi)分泌FGF靶組織。
44. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述嵌合FGF蛋白具有比具有所述Klotho共受 體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的天然內(nèi)分泌FGF配體更大的針對FGF受體（"FGFR"）的結(jié)合親和力。
45. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述FGF蛋白為旁分泌FGF。
46. 根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述FGF蛋白為FGFl或FGF2。
47. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述FGF蛋白包含始于SEQ ID NO: 1的殘基1 至25的任一個(gè)并終于殘基150至155的任一個(gè)的氨基酸序列。
48. 根據(jù)權(quán)利要求42所述的方法，其中所述FGF蛋白包含始于