一種金龜子綠僵菌菌株在制備殺稻葉蟬的藥劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種金龜子綠僵菌菌株的新應(yīng)用，具體涉及一種金龜子綠僵菌菌株在 制備殺稻葉蟬的藥劑中的應(yīng)用及其制劑，屬于生物農(nóng)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 稻葉蟬俗稱浮沉子，是我國水稻的重要害蟲，廣泛分布于各稻區(qū)，除直接取食危害 外，還傳播水稻病毒病，后者的危害常超過直接吸食。國內(nèi)常見的稻田葉蟬有10多種，以黑 尾葉蟬、大青葉蟬發(fā)生最普遍。稻葉蟬在稻區(qū)主要危害水稻，北方無稻地區(qū)主要危害小麥， 此外，還危害菱白、甘蔗等禾本科植物，嚴(yán)重的威脅著我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。目前，主要施用廣譜性 化學(xué)農(nóng)藥控制稻葉蟬，不僅直接影響人體健康和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的安全，而且由于稻葉蟬產(chǎn)生 抗藥性和化學(xué)農(nóng)藥大量殺傷稻葉蟬天敵，破壞稻田生態(tài)平衡，嚴(yán)重削弱田間自然控制能力， 容易導(dǎo)致稻葉蟬的再猖獗、難以控制。采用安全的微生物制劑替代化學(xué)農(nóng)藥成為稻葉蟬控 制的重要發(fā)展方向。
[0003] 昆蟲病原真菌是最重要的殺蟲微生物類群，具有安全、持續(xù)控制和昆蟲不易產(chǎn)生 抗藥性的優(yōu)點(diǎn)。綠僵菌（Metarhizium)是最早用于防治害蟲的昆蟲病原真菌之一，能感 染全世界約有200多種昆蟲。利用它來防治害蟲的研宄與實(shí)踐已愈百年，但尚未控制稻葉 蟬登記的綠僵菌制劑，主要原因是缺乏高毒力殺蟲真菌菌株和相應(yīng)制劑。金龜子綠僵菌 CQMa421是一株從自然感染的稻縱卷葉螟僵蟲上分離篩選出的一株生產(chǎn)性狀好、對(duì)稻縱卷 葉螟具有高毒力殺蟲真菌，已在中國專利CN102212483中公開，該菌株于2011年02月25 日，在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)、中國科學(xué)院微生物研宄所的中國微生物菌種保藏 管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏編號(hào)：CGMCCN0. 4609,分類命名：金龜子綠 僵菌小抱變種Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae?該菌株及其制劑對(duì)稻葉蝴的毒 力與防治效果未見報(bào)道。
[0004] 可濕性粉劑是一種最基本的農(nóng)藥劑型，可制成懸濁液，進(jìn)行噴霧。殺蟲真菌可濕性 粉劑是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性劑和填充料，通過過篩制成。由于真菌孢子 活性受潤濕劑的影響，制劑中往往減少表面活性劑的用量，導(dǎo)致濕潤分散效果差，同時(shí)產(chǎn)品 貯存期仍較短，防效受紫外影響大。因此，篩選馴化高毒力菌株和研制濕潤分散特性良好、 防效穩(wěn)定的真菌殺蟲劑可濕性粉劑，延長(zhǎng)其貯存穩(wěn)定性，從而促進(jìn)真菌殺蟲劑在防治稻葉 蟬中的應(yīng)用，有利于減少水稻生產(chǎn)中化學(xué)農(nóng)藥的用量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種金龜子綠僵菌菌株在殺稻葉蟬中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明第二目的在于提供一種金龜子綠僵菌制劑，該制劑耐紫外照射、保存期長(zhǎng)、 防效好。
[0007] 本發(fā)明第三目的在于提供一種增強(qiáng)金龜子綠僵菌毒力，而不影響其產(chǎn)孢和耐熱特 性和對(duì)稻縱卷葉螟的毒力的方法。
[0008] 本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 金龜子綠僵菌CQMa421菌株在制備預(yù)防或防治稻葉蟬的藥劑中的應(yīng)用，該菌株對(duì)稻葉 蟬具有侵染作用，致死率可達(dá)到56. 9%。
[0009] 不同的綠僵菌菌株對(duì)不同的蟲害有防治作用，如公開報(bào)道：金龜子綠僵菌 FI-1045菌株能侵染甘鹿賂螬（Anoplophoraglabripennis)，金龜子綠僵菌AESALQ818菌 株能侵染埃及斑蚊（Aedesaegypti)，金龜子綠僵菌EAMb09/01-Su菌株能侵染地中海果 實(shí)幡，金龜子綠僵菌H3RL526菌株能侵染蘿卜財(cái)（Lipaphiserysimi)，金龜子綠僵菌M2菌 株能侵染螺旋粉虱（AleurodicusdispersusRussell)，金龜子綠僵菌ICIPE-30菌株能侵 染岡比亞按蚊（anophelesgambiae)，金龜子綠僵菌ESC1菌株能侵染白蟻，金龜子綠僵 菌ATCC62146能侵染甜菜根蛆（sugarbeetrootmaggot)，金龜子綠僵菌M105菌株能侵 染蟲皇蟲，金龜子綠僵菌廣譜菌株F-52能侵染賂螬（Anoplophoraglabripennis)、核桃象 甲、光滑足距小蠹（Xylosandrusgermanus)，金龜子綠僵菌廣譜菌株549能侵染煙草天蛾 (Manducasexta)、埃及斑蚊（Aedesaegypti)，羅伯茨綠僵菌廣譜菌株ARSEF23能侵染蟲皇 蟲、鱗翅目幼蟲、甲蟲等。
[0010] 優(yōu)選地，上述防治稻葉蟬的藥劑由綠僵菌CQMa421干孢子粉35-52%、硅藻土 40-50%、納米硅1-2%、羧甲基纖維素鈉3-5%、0-30 2-4%和HEL-40 2-4%組成，均以重量百 分比。
[0011] -種金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由娃藻土 40-50%、納米娃1-2%、羧甲基 纖維素鈉3-5%、0-30 2-4%、HEL-40 2-4%和綠僵菌CQMa421干孢子粉35-52%組成，均以重 量百分比。
[0012] 上述各組分均為本領(lǐng)域明確的組分，0-30為平平加-30 (脂肪醇聚氧乙烯醚)， HEL-40為氫化蓖麻油與環(huán)氧乙烷縮合物，綠僵菌CQMa421在中國專利CN102212483中公開、 該菌株于2011年02月25日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC)保 藏、保藏編號(hào)：CGMCCN0. 4609 ;納米娃為粒徑為納米級(jí)的娃等。
[0013] 上述0-30和HEL-40優(yōu)選純度>95%的0-30和HEL-40;上述羧甲基纖維素鈉 (CMC)優(yōu)選純度大于95% ;上述硅藻土優(yōu)選為白色至淺褐色疏松粉末，純度大于85%，含水量 小于1% ;上述納米硅優(yōu)選為粒徑小于50nm。上述綠僵菌CQMa421干孢子粉為純孢子粉，含 孢量多150億孢子/克，含水量< 5% ;以上均以質(zhì)量百分含量計(jì)。
[0014] 上述金龜子綠僵菌制劑中納米娃為惰性材料，通過疏水作用附著在真菌孢子疏水 表面，有效阻隔了制劑中高濃度（2-4wt%) 0-30和HEL-40的不良影響，有效保證了孢子的 生物活性。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由娃藻土 40-45%、納 米硅1.3-1.7%、羧甲基纖維素鈉3-5%、〇-30 2-4%、冊(cè)1-40 2-4%和綠僵菌0〇1&1421干孢子 粉40-50%組成，均以重量百分比。
[0016] 上述綠僵菌CQMa421干孢子粉優(yōu)選采用強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉，所 述強(qiáng)毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：將金龜子綠僵菌CQMa421接種于 稻葉蟬幼蟲，接種后在28°C、濕度50-70%的條件下飼養(yǎng)，將最先感病死亡的稻葉蟬，放入 28°C、濕度為50-70%培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)3-5天，使其昆蟲表面生長(zhǎng)出新鮮孢子，如上所述循 環(huán)接種14次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無菌條件下，用接種環(huán)挑取 馴化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨芐青霉素的1/4SDA培養(yǎng)基平板上劃線；將劃線好 的培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)放置于28°C恒溫箱中培養(yǎng)；3-4日后挑選長(zhǎng)出的典型而無雜菌的菌落，在菌 落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養(yǎng)基一小塊，轉(zhuǎn)入試管斜面培養(yǎng)基中央，28°C恒溫培養(yǎng) 10-15天得到強(qiáng)毒力的金龜子綠僵菌CQMa421母種，將CQMa421菌株母種接種在1/4SDA平 板上，28°C培養(yǎng)15天，收集成熟分生孢子制得綠僵菌CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龜子綠僵菌制劑的制備方法，是先將綠僵菌CQMa421干孢子粉和納米硅在 混合機(jī)中混勻，再依次加入硅藻土、羧甲基纖維素鈉、0-30 2-4%和HEL-40 2-4%，邊加入邊 攪拌，直至各組分完全混合均勻制得。
[0018] 一種增強(qiáng)金龜子綠僵菌毒力的方法，其特征在于：將金龜子綠僵菌CQMa421循環(huán) 接種于稻葉蟬2-3齡幼蟲，接種后在28°C、濕度50-70%的條件下飼養(yǎng)，將最先感病死亡的 稻葉蟬，放入28°C、濕度為50-70%培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)3-5天，使其昆蟲表面生長(zhǎng)出新鮮孢 子，如上所述循環(huán)接種14次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無菌條件下， 用接種環(huán)挑取馴化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨節(jié)青霉素的1/4SDA培養(yǎng)基平板上 劃線，將劃線好的培養(yǎng)皿翻轉(zhuǎn)放置于28°C恒溫箱中培養(yǎng)；3 - 4日后挑選長(zhǎng)出的典型而無雜 菌的菌落，在菌落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養(yǎng)基一小塊，轉(zhuǎn)