甲基苯丙胺核酸適體、檢測試劑盒及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術領域和刑事鑒定技術領域。具體地，本發(fā)明提供了甲基苯丙 胺核酸適體、檢測試劑盒及其應用，尤其在毒物檢測中的應用。
【背景技術】
[0002] 毒品已經(jīng)成為愈來愈嚴重的社會問題。針對緝毒工作的實際需求，需要開發(fā)靈敏 度高、選擇性好、便攜式、能耗低、易操作的毒品快速檢測技術，以便能夠在現(xiàn)場實現(xiàn)靈敏、 快速的檢測。
[0003]目前國內(nèi)外正對吸毒人員快速現(xiàn)場篩查和液體中毒品檢測的主要技術是各種基 于免疫反應的產(chǎn)品，主要有酶免疫分析和免疫膠體金技術。
[0004]酶免疫分析涉及酶反應，檢測步驟繁瑣，穩(wěn)定性差。
[0005]免疫膠體金技術雖然檢測簡便，快速，但靈敏度低、誤判率較高，往往只能進行定 性測試。此外，受制于抗體的特性，質(zhì)量控制難度較大，即使是同一批生產(chǎn)的試劑，也很難保 證每個試劑的同一性。
[0006] 甲基苯丙胺（methamphetamine，MA)俗稱冰毒，是一種依賴性極高的精神活性物 質(zhì)，是國家嚴控的一類精神藥品和麻醉藥品。目前，國際上苯丙胺類物質(zhì)的濫用呈不斷上升 趨勢。專家們預測，苯丙胺類興奮劑將成為21世紀最廣泛濫用的藥物之一。
[0007] 隨著與甲基苯丙胺相關的刑事案件逐年上升和國家對甲基苯丙胺管理的日趨嚴 格，本領域?qū)谆奖泛蜑E用毒品者生物標本中甲基苯丙胺的檢測提出了更高的要求。
[0008]目前，甲基苯丙胺的檢測主要是基于色譜分析方法，例如氣質(zhì)聯(lián)用色譜分析 (GC-MS)和高效液相色譜分析（HPLC)。這些色譜方法具有很好的靈敏度和特異性，但操作 繁瑣，需要昂貴的儀器設備，且耗時長。
[0009] 特定的結合反應，例如抗原-抗體反應，已經(jīng)廣泛用于檢測生物樣品中存在的各 種物質(zhì)的免疫測試中。其中，膠體金免疫層析技術是近年來發(fā)展起來的一種獨特的免疫診 斷技術，具有免疫反應和色譜層析的特定，與GC-MS比較，膠體金層析技術具有特異性強、 靈敏度高、簡單快速、易于操作、結果容易判讀、無需任何儀器設備等優(yōu)點。
[0010] 相對于抗體，適體近年來成為關注的焦點。適體（aptamer)是一類功能性生物分 子。目前，大多數(shù)適體是從至少約1〇14個隨機序列的DNA或RNA庫中，通過指數(shù)富集的系 統(tǒng)分子進化方法（SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEnrichment，簡稱 SELEX)篩選出來的。
[0011] 適體能夠特異性地與靶標分子結合，從而特異性地識別靶標分子。理論上，適體可 用于各自不同物質(zhì)的檢測，其中包括蛋白質(zhì)、小分子、重金屬離子、細胞和病毒，因此具有極 大的應用前景。
[0012] 綜上所述，目前甲基苯丙胺的檢測技術尚難以令人滿意，因此，本領域迫切需要開 發(fā)新的可現(xiàn)場快速檢測甲基苯丙胺的技術。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的即在于提供一種可靠方便、操作簡單、成本低廉、快速靈敏的甲基苯 丙胺檢測技術、相關物質(zhì)及其應用。
[0014] 在本發(fā)明第一方面，提供了一種核酸適體，所述的適體特異性結合于甲基苯丙胺。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的特異性結合指所述適體結合于甲基苯丙胺但不結合于以 下任何一種物質(zhì)：苯丙胺、可卡因、嗎啡、可待因、海洛因、福爾可定、單乙酰嗎啡、二氫可待 因、二氫埃托菲、雷米替丁、哌替啶、芬太尼、曲馬多、右丙氧芬、納洛酮、納曲酮、烯丙嗎啡、 可樂寧、洛非西丁、東莨菪堿、益安口服液、正通寧片、撲熱息痛、阿斯匹林、布洛芬、阿米替 林、丙米嗪、氯丙嗪、異丙嗪、水合氯醛、安定、三唑侖、阿普唑侖、苯巴比妥、速可眠、異戊巴 比妥、咖啡因、氟哌酸、先鋒IV、黃連素、乳糖、普魯卡因、康復新膠囊、水合氯醒、奧復沙星、 非那西丁、去痛片、氯胺酮、去甲基氯胺酮、美沙酮、度冷丁、麻黃素、左旋麻黃素、右旋麻黃 素、蒂巴因、四氫大麻酚、利多卡因、那可丁、丁丙諾啡、苯丙醇胺和苯乙胺。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體是通過SELEX技術，從ssDNA文庫中篩選獲得的單鏈 核酸分子。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體包括DNA、RNA、或DNA/RNA雜合分子。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體的長度為30-100個堿基。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體為單鏈或雙鏈。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體帶有可檢測標記物。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體是分離的或純化的。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體的純度彡90%，較佳地彡95%，更佳地彡99%。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述的適體的序列如SEQIDN0. : 1、2、3、4或5所示。
[0024] 在本發(fā)明的第二方面，提供了一種偶聯(lián)物，所述偶聯(lián)物包括本發(fā)明第一方面所述 的核酸適體以及與所述核酸適體相連的可檢測標記物。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測標記物包括生物素、化學發(fā)光基團、化學熒光基 團、熒光蛋白、酶、膠體金、放射性同位素、乳膠顆粒、抗體、配體、抗原、受體、或其組合。
[0026] 在本發(fā)明的第三方面，提供了一種復合物，所述的復合物是（a)本發(fā)明第一方面 所述的核酸適體或本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物與（b)甲基苯丙胺所形成的復合物。
[0027] 在本發(fā)明的第四方面，提供了一種檢測制品，所述檢測制品含有本發(fā)明第一方面 所述的核酸適體或本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測制品包括：檢測試劑、側(cè)流片、芯片、測試條、檢測板。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測制品用于檢測甲基苯丙胺。
[0030] 在本發(fā)明的第五方面，提供了一種檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包含本發(fā)明第一 方面所述的核酸適體，本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物和/或本發(fā)明第四方面所述的檢測制 品。
[0031] 在本發(fā)明的第六方面，提供了如本發(fā)明第一方面所述的核酸適體或本發(fā)明第二方 面所述偶聯(lián)物的用途，用于制備檢測甲基苯丙胺的檢測制品或試劑盒。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測制品包括：檢測試劑、側(cè)流片、芯片、測試條、檢測板。
[0033] 在本發(fā)明的第七方面，提供了一種檢測甲基苯丙胺的方法，包括以下步驟：
[0034] (a)提供待檢測的樣品；
[0035] (b)將該樣品與本發(fā)明第一方面所述的核酸適體或本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物 混合，形成混合物；
[0036] (c)檢測所述混合物中"甲基苯丙胺-核酸適體復合物"的存在與否，其中如果存 在所述復合物，則表明所述樣品中存在甲基苯丙胺；如果不存在所述復合物，則表明所述樣 品中不存在甲基苯丙胺。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測包括定性檢測和定量檢測。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，在步驟（c)中，包括與標準品或標準曲線進行比較，從而確定在 所述混合物中是否存在復合物，和/或所述復合物的數(shù)量。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述方法用于毒品檢測、藥物檢測或食品安全檢測，更優(yōu)選的， 所述方法用于毒品檢測。
[0040] 在本發(fā)明的第八方面，提供了 一種核酸序列，所述核酸序列是序列如SEQID NO. : 1-5所示序列的反義序列。
[0041] 在本發(fā)明的第九方面，提供了一種組合物，所述的組合物含有（i)載體以及（ii) 本發(fā)明第一方面所述的核酸適體、本發(fā)明第二方面所述的偶聯(lián)物。
[0042] 應理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術特征和在下文（如實施例）中