生物催化劑組合物中，可以進(jìn)一步包含使赤蘚糖醇的產(chǎn) 量或轉(zhuǎn)變率增加的成分。
[0077] 發(fā)明效果
[0078] 本發(fā)明提供將如葡萄糖母液和/或玉米浸漬液或其加工物之類的副產(chǎn)物用作微 生物發(fā)酵基質(zhì)來制造赤蘚糖醇的方法、以及包含如葡萄糖母液和/或玉米浸漬液或其加工 物之類的副產(chǎn)物的培養(yǎng)基組合物，并且提供適合于本發(fā)明的赤蘚糖醇制造方法且赤蘚糖醇 生產(chǎn)能力優(yōu)異的叢梗孢酵母SYC-ERY1菌株。由此，通過將葡萄糖母液和玉米浸漬液或其加 工物用作基質(zhì)，能夠非常廉價(jià)地生產(chǎn)赤蘚糖醇，如果使用上述菌株，則能夠使赤蘚糖醇的收 率及生產(chǎn)性增加，并且能夠縮短培養(yǎng)天數(shù)。
【附圖說明】
[0079] 圖1表示根據(jù)實(shí)驗(yàn)例8的加料（feeding)方法的OD值的變化。"常規(guī)加料 (conventionalfeeding) "表示實(shí)施例8的培養(yǎng)及加料條件1 連續(xù)加料（continuous feeding) "表示實(shí)施例8的培養(yǎng)及加料條件2 間歇加料（intermittentfeeding) "表示 實(shí)施例8的培養(yǎng)及加料條件3。
【具體實(shí)施方式】
[0080] 以下，依據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明。但，下述實(shí)施例僅用于例示本發(fā)明，本 發(fā)明并不限于下述實(shí)施例。
[0081] 實(shí)施例1.從挿孢酵母SYC-ERY1母菌株的分離
[0082] 本發(fā)明所使用的微生物依據(jù)以下方法分離。將蜂巢在包含35(w/v) %葡萄糖和 1.5(w/v) %酵母提取物的液體培養(yǎng)基中以30度、250rpm的條件培養(yǎng)6天。將培養(yǎng)的培養(yǎng)液 涂抹于相同組成的固體培養(yǎng)基，得到約5000個(gè)菌落（colony)。
[0083] 將通過菌株分離獲得的菌落接種于包含45(w/v) %葡萄糖、0.5(w/v) %酵母提 取物、0.35(w/v) %KN03、0.025(w/v) %KH2P04、5ppmMnS04、3ppm硫胺素（Thiamine)的 4 ml(試管）培養(yǎng)基（pH5.5)，并以30°C、200rpm培養(yǎng)6天。
[0084] 將培養(yǎng)6天的培養(yǎng)液在13,OOOrpm下進(jìn)行10分鐘離心分離，去除細(xì)胞而僅僅得到 培養(yǎng)上清液，利用薄層色譜（TLC)分析上清液，篩選赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株。
[0085]TLC分析條件如下。TLC板（plate)使用TLCSilicagel60F254,展開溶劑 是乙腈：乙酸乙醋：1_丙醇：水（water) = 85:20:20:15 (v/v/v/v)，展開后將板在堿性 (Alkaline)AgN03溶劑中浸泡5分鐘。之后，在甲醇（MeOH)溶液中浸泡30分鐘后，快速浸 泡于1. 5MNa2S203溶液并取出，完全干燥后確認(rèn)色點(diǎn)（spot)。
[0086] 通過TLC在5000個(gè)菌落中只篩選生產(chǎn)赤蘚糖醇的菌落，對于色點(diǎn)鮮明的樣品， 通過高效液相色譜（HPLC)的RI分析定量剩余葡萄糖和所生產(chǎn)的赤蘚糖醇的量。HPLC分 析條件如表1所示，之后的全部實(shí)施例均在相同條件下進(jìn)行分析。HPLC分析使用Aminex HPC-87H柱，流動(dòng)相溶劑使用0. 0025NH2S04，在65°C以0. 5ml/min的速度一邊流淌溶劑一 邊用RI檢測儀分析。
[0087][表1]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種制造赤蘚糖醇的方法，其包括在包含葡萄糖母液和玉米浸漬液或玉米浸漬液的 加工物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株的步驟。
2. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)基以培養(yǎng)基內(nèi)的葡萄糖濃度為 5至45 (w/v) %的方式包含葡萄糖母液。
3. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述葡萄糖母液包含700至900g/L的葡 萄糖。
4. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)基包含0. 5至5 (w/v) %的玉米 浸漬液或玉米浸漬液的加工物。
5. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述玉米浸漬液或玉米浸漬液的加工物 包含3至10 (w/v) %的氮。
6. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述玉米浸漬液的加工物是將通過對玉 米浸漬液進(jìn)行離心分離或沉淀而得的上清液與水以3:1至1:3的比率混合而成的。
7. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)步驟在30至35°C的溫度下實(shí) 施。
8. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)步驟在pH 5至6下實(shí)施。
9. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)步驟實(shí)施3至10天。
10. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)步驟是分批式、補(bǔ)料分批式或 連續(xù)式形式的培養(yǎng)。
11. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，在所述培養(yǎng)步驟中，如果培養(yǎng)時(shí)發(fā)酵槽 內(nèi)葡萄糖濃度變?yōu)?0g/L以下，則間歇性加料葡萄糖母液。
12. 如權(quán)利要求11所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述加料葡萄糖母液使所述發(fā)酵槽內(nèi) 葡萄糖濃度保持為10至l〇〇g/L。
13. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)基進(jìn)一步包含酵母提取物。
14. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述培養(yǎng)基包含大于0且小于或等于 0. 5 (w/v) %的酵母提取物。
15. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株是在所述培養(yǎng) 步驟前進(jìn)行種菌培養(yǎng)而得的。
16. 如權(quán)利要求15所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述種菌培養(yǎng)在包含選自由葡萄糖、 硝酸鉀KNO3、磷酸二氫鉀KH 2PO4、硫酸錳MnSO#硫胺素組成的組中的一種以上的培養(yǎng)基中 實(shí)施。
17. 如權(quán)利要求15所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述種菌培養(yǎng)在pH 5至6、以及溫度 28至32°C下實(shí)施1至3天。
18. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株為選自由叢 梗抱酵母（Moniliella pollinis)、Moniliella tomentosa var. pollinis、Moniliella acetoabutens、短梗霉屬（Aureobasidium sp. )、Trichosporonoides madida、木蘭假絲酵 母（Candida magnolia)、圓酵母屬（Torula sp.)、畢赤酵母屬（Pichia sp.)和Pseudozyma tsukubaensis組成的組中的一種以上。
19. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株是叢梗孢屬 (Moniliella sp.)〇
20. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株是叢梗孢酵母。
21. 如權(quán)利要求1所述的制造赤蘚糖醇的方法，所述赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株是保藏號為 KCTC12720BP 的叢梗孢酵母 SYC-ERYl (Moniliella pollinis SYC-ERY1)菌株。
22. -種用于生產(chǎn)赤蘚糖醇的赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株培養(yǎng)用培養(yǎng)基組合物，其包含葡萄糖 母液和玉米浸漬液或玉米浸漬液的加工物。
23. 如權(quán)利要求22所述的赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株培養(yǎng)用培養(yǎng)基組合物，所述赤蘚糖醇生產(chǎn) 菌株是保藏號為KCTC12720BP的叢梗孢酵母SYC-ERYl菌株。
24. -種保藏號為KCTC12720BP的叢梗孢酵母SYC-ERYl菌株，其具有赤蘚糖醇生產(chǎn)能 力。
25. -種赤蘚糖醇制造用生物催化劑組合物，其包含保藏號為KCTC12720BP的叢梗孢 酵母SYC-ERYl菌株。
【專利摘要】本發(fā)明提供赤蘚糖醇制造方法、叢梗孢酵母變異菌株及其用途。本發(fā)明提供包含葡萄糖母液和玉米浸漬液或玉米浸漬液的加工物的培養(yǎng)基組合物，以及利用該培養(yǎng)基組合物由赤蘚糖醇生產(chǎn)菌株制造赤蘚糖醇的方法。此外，本發(fā)明提供具有赤蘚糖醇生產(chǎn)能力的叢梗孢酵母SYC-ERY1菌株及包含其的赤蘚糖醇制造用生物催化劑組合物。KCTC 12720BP20131105
【IPC分類】C12P7-18, C12R1-645, C12R1-84, C12N1-16, C12R1-72
【公開號】CN104745644
【申請?zhí)枴緾N201410831742
【發(fā)明人】李尚熙, 吳百祿, 樸成原, 樸鐘辰, 李康杓
【申請人】株式會社三養(yǎng)吉尼克斯
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2014年12月26日