β淀粉樣蛋白的人源化抗體的制作方法
【專利說明】(3淀粉樣蛋白的人源化抗體
[0001] 本申請是申請日為2008年6月12日的、發(fā)明名稱為淀粉樣蛋白的人源化抗 體"的中國專利申請200880103155. 0(PCT/US2008/007318)的分案申請。
[0002] 相關(guān)專利申請的交叉引用
[0003] 本申請要求2007年6月12日提交的美國臨時(shí)申請系列號(hào)No.60/943, 509的優(yōu)先 權(quán)，其并入本文作為參考。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 本發(fā)明涉及用于淀粉樣變性（一組與淀粉樣蛋白相關(guān)的紊亂和異常，如阿爾茨海 默?。┰\斷和治療的方法和組合物。
[0006] 淀粉樣變性不是單一的疾病實(shí)體，而是一廣類以蠟質(zhì)淀粉狀蛋白（稱為淀粉樣蛋 白，其在一種或多種器官或身體系統(tǒng)中積累）的細(xì)胞外組織沉積為特征的進(jìn)行性疾病過 程。隨著淀粉樣蛋白沉積物的積累，其開始干擾器官或身體系統(tǒng)的正常功能。有至少15種 不同類型的淀粉樣變性。主要形式是沒有已知前因的原發(fā)性淀粉樣變性，出現(xiàn)在一些其它 病癥之后的繼發(fā)性淀粉樣變性，和遺傳性淀粉樣變性。
[0007] 繼發(fā)性淀粉樣變性發(fā)生在慢性感染或炎性疾病，如結(jié)核病、稱為家族性地中海熱 的細(xì)菌感染、骨感染（骨髓炎）、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、小腸炎癥（肉芽腫性回腸炎）、霍奇金病 和麻風(fēng)病期間。
[0008] 淀粉樣蛋白沉積物包括淀粉樣蛋白P(五邊形）成分（AP)-一一種與正常血清淀 粉樣蛋白P(SAP)相關(guān)的糖蛋白，和硫酸鹽化的糖胺聚糖（GAG)-一結(jié)締組織的復(fù)雜糖。淀 粉樣蛋白原纖維（fibril)約占淀粉樣蛋白物質(zhì)的90%，包含數(shù)種不同類型的蛋白質(zhì)中的 一種。這些蛋白質(zhì)能夠折疊成所謂的折疊"片狀原纖維，這種獨(dú)特的蛋白質(zhì)構(gòu)型呈現(xiàn) 出對剛果紅（Congo red)的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致了淀粉樣蛋白的獨(dú)特的著色性質(zhì)。
[0009] 許多老年病基于淀粉樣蛋白樣蛋白（amyloid-like proteins)或與其相關(guān)，并且 部分地以促進(jìn)疾病發(fā)生和疾病發(fā)展的淀粉樣蛋白或淀粉樣蛋白樣物質(zhì)的細(xì)胞外沉積物的 聚集為特征。這些疾病包括但不限于神經(jīng)紊亂，如阿爾茨海默?。ˋD)、路易體癡呆（Lewy body dementia)、唐氏綜合征（Down's syndrome)、遺傳性腦出血伴淀粉樣變性（荷蘭型）； 關(guān)島帕金森-癡呆綜合征。其它基于淀粉樣蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病有進(jìn)行性核上性 麻痹、多發(fā)性硬化；克-雅二氏?。–reutzfeld Jacob disease)、帕金森氏病、HIV相關(guān)癡 呆、ALS(肌萎縮性側(cè)索硬化癥）、成年發(fā)病型糖尿病；老年性心臟淀粉樣變性；內(nèi)分泌腫瘤 以及其它疾病，包括黃斑變性。
[0010] 盡管這些疾病的發(fā)病機(jī)理可能是不同的，但它們的特征性沉積物經(jīng)常含有許多共 同的分子成分。在顯著程度上，這可能歸因于促炎通路的局部激活，從而導(dǎo)致激活的補(bǔ)體成 分、急性期反應(yīng)物、免疫調(diào)節(jié)劑及其它炎性介質(zhì)的同時(shí)沉積（McGeer等人，1994)。
[0011] 阿爾茨海默?。ˋD)是一種神經(jīng)紊亂，其被認(rèn)為主要是由淀粉樣蛋白斑塊，即蛋白 質(zhì)異常沉積物在腦中的積累，引起的。在患病個(gè)體腦中發(fā)現(xiàn)的最常見的淀粉樣蛋白的類型 主要包含Af3原纖維。科學(xué)證據(jù)表明0淀粉樣蛋白在斑塊中的產(chǎn)生和累積的增加導(dǎo)致神經(jīng) 細(xì)胞死亡，這助長了 AD的發(fā)展和進(jìn)程。在關(guān)鍵腦區(qū)域中神經(jīng)細(xì)胞的損失進(jìn)而又導(dǎo)致神經(jīng)遞 質(zhì)的減少和記憶的減損。主要負(fù)責(zé)斑塊增大的蛋白質(zhì)包括淀粉樣蛋白前體蛋白（APP)和兩 種早老蛋白（早老蛋白I和早老蛋白II)。通過酶0和Y分泌酶相繼切割淀粉樣蛋白前 體蛋白（APP)(其在大多數(shù)細(xì)胞中組成型表達(dá)和代謝）導(dǎo)致39至43個(gè)氨基酸的Af3肽的 釋放。APP的降解很可能增加其在斑塊中聚集的傾向。特別是Af3 (1-42)片段由于其C-末 端的兩個(gè)極為疏水的氨基酸殘基，具有構(gòu)建聚集物的高傾向。因此認(rèn)為A 0 (1-42)片段主 要參與并造成AD中神經(jīng)炎斑塊形成的起始，并因此具有高病理學(xué)潛力。因此需要能阻止淀 粉樣蛋白斑塊形成以及在AD中散開已有的淀粉樣蛋白斑塊的藥劑。
[0012] AD的癥狀緩慢顯現(xiàn)，第一個(gè)癥狀可能僅僅是輕度健忘。在此階段，個(gè)體可能忘記新 近的事件、活動(dòng)、熟悉的人或事的名稱以及不能解決簡單的數(shù)學(xué)問題。隨著疾病進(jìn)展，癥狀 更易于被察覺并且變得足夠嚴(yán)重從而導(dǎo)致患有AD的人們或他們的家人尋求醫(yī)學(xué)幫助。AD 的中期癥狀包括忘記如何做諸如整理清潔的簡單任務(wù)，并且出現(xiàn)說話、理解、閱讀或書寫方 面的問題。后期的AD患者可能變得焦慮或具攻擊性，可能從家里走失以及最終需要全面護(hù) 理。
[0013] 目前，唯一的明確診斷AD的方法是在個(gè)體死亡后的尸體解剖中鑒別腦組織中的 斑塊和纏結(jié)。因此，當(dāng)人仍活著的時(shí)候，醫(yī)生只能作出"可能"或"很可能"患有AD的診斷。 應(yīng)用目前的方法，內(nèi)科醫(yī)師利用數(shù)種診斷"可能"AD的工具，至多可以在90%的時(shí)間正確診 斷AD。內(nèi)科醫(yī)師詢問個(gè)體的一般健康狀況、過往的醫(yī)療問題、以及在完成日常活動(dòng)時(shí)出現(xiàn)任 何困難的歷史。關(guān)于記憶、解決問題、注意力、計(jì)算和語言的行為測試提供認(rèn)知減退的有關(guān) 信息，而醫(yī)療檢驗(yàn)諸如血、尿或脊髓液的檢驗(yàn)和腦部掃描可以提供一些其它信息。
[0014] AD的管理由基于藥物的和基于非藥物的治療組成。以改變疾病潛在的過程（延緩 或逆轉(zhuǎn)進(jìn)程）為目的的治療迄今在很大程度上是不成功的。修補(bǔ)神經(jīng)細(xì)胞的化學(xué)信使（神 經(jīng)遞質(zhì)）不足（缺陷）或功能障礙的藥物，特別是膽堿酯酶抑制劑（ChEI)(如他克林和卡 巴拉?。╮ivastigmine))已顯示出可改善癥狀。ChEI阻礙神經(jīng)遞質(zhì)的酶促降解，由此增加 腦中可用于傳遞神經(jīng)信號(hào)的化學(xué)信使的量。
[0015] 對于處于疾病早期和中期階段的一些人，藥物他克林 (tacrine,COGNEX?, Morris Plains，NJ)、多奈哌齊（ARICEPT?, Tokyo, JP)、卡巴拉汀（rivastigmine,EXELON?, East Hanover, NJ)或加蘭他敏 (galantamine,REMINYL?, New Brunswick, NJ)可以在有限的時(shí)間內(nèi)幫助防止某些癥 狀變得更嚴(yán)重。另一種藥物美金剛（memantine,NAMENDA?, New York, NY)已被核準(zhǔn) 治療中度至重度的AD。也有藥物用于對付AD的精神病學(xué)表現(xiàn)。還有一些藥物可以幫助控 制AD的行為癥狀，如失眠、興奮、恍惚、焦慮和抑郁。治療這些癥狀通常使患者更加舒服，并 使護(hù)理人員更易于進(jìn)行護(hù)理。不幸的是，盡管有顯著的治療進(jìn)展顯示出這類藥劑可靠地優(yōu) 于安慰劑，但是疾病仍繼續(xù)發(fā)展，并且對精神功能的平均作用僅為有限的。很多用于AD藥 物治療的藥物（例如ChEI)也具有副作用，包括胃腸功能失調(diào)、肝臟毒性和體重減輕。
[0016] 另外一種基于淀粉樣蛋白樣蛋白的聚集和沉積或與其相關(guān)的疾病是黃斑變性。
[0017]黃斑變性是引起視網(wǎng)膜中心區(qū)域，即黃斑（在眼睛后部的像紙一樣薄的組織，感 光細(xì)胞在此傳送視覺信號(hào)至大腦）變性的常見眼病。通過黃斑區(qū)處理產(chǎn)生銳利、明晰、"正 向"的視像。損傷黃斑區(qū)導(dǎo)致盲點(diǎn)的產(chǎn)生和視像的模糊或變形。老年性黃斑變性（AMD)在 美國是引起視力損傷的主要原因，并且對于65歲以上的人來說，其為高加索人中法定失明 的主要原因。大約有180萬40歲及以上的美國人患有晚期AMD，而其它730萬患有中等AMD 的人具有視力喪失的真實(shí)風(fēng)險(xiǎn)。政府估計(jì)到2020年，將會(huì)有290萬人患有晚期AMD。AMD 受害者常常驚訝和沮喪地發(fā)現(xiàn)對這種失明病癥的原因和治療的了解是如此之少。
[0018] 存在兩種形式的黃斑變性：干性黃斑變性和濕性黃斑變性。有百分之八十五的黃 斑變性病例診斷為干性形式，其中黃斑區(qū)的細(xì)胞緩慢地開始損壞。兩只眼睛通常都受到干 性AMD的影響，但一只眼睛可能喪失視力而另外一只眼睛可能保持不受影響。視網(wǎng)膜下的 黃色沉積物，即脈絡(luò)膜小疣（drusen)，是干性AMD的早期征兆。隨著脈絡(luò)膜小疣的數(shù)目或大 小的增加，發(fā)展成晚期干性AMD或濕性AMD的風(fēng)險(xiǎn)也增加。干性AMD可能在不轉(zhuǎn)變?yōu)闈裥?形式疾病的情況下進(jìn)一步發(fā)展并導(dǎo)致視力喪失；然而，早期的干性AMD也有可能突然變?yōu)?濕性形式。
[0019] 濕性形式盡管只占病例的百分之十五，卻導(dǎo)致了百分之九十的失明，并且被視為 晚期AMD(沒有早期或中期階段的濕性AMD)。濕性AMD總是處于干性形式的疾病之后。當(dāng) 干性形式惡化時(shí)，一些人在黃斑區(qū)的后面開始有異常的血管生長。這些血管非常脆弱并且 會(huì)泄漏液體和血液（因此是"濕性"黃斑變性），導(dǎo)致對黃斑區(qū)的快速損傷。
[0020] 干性形式的AMD最初往往會(huì)引起輕度的視力模糊。然后，特別是視力的中心可能 變得模糊不清，并且這一區(qū)域隨著疾病的發(fā)展將變大。如果只有一只眼睛受到影響，則可能 注意不到癥狀。在濕性AMD中，直線可能看起來像波浪狀，并且可迅速發(fā)生中心視力的喪 失。
[0021] 黃斑變性的診斷一般涉及擴(kuò)張眼檢查、視敏度檢查，以及用稱為眼底檢查的方法 查看眼睛的后部以幫助診斷AMD，并且如果有濕性AMD的嫌疑，則也可能進(jìn)行熒光素血管造 影術(shù)。如果干性AMD達(dá)到晚期階段，沒有現(xiàn)行治療能預(yù)防視力喪失。然而，抗氧化劑和鋅的 特定高劑量配方可以延緩或預(yù)防中期AMD發(fā)展至晚期階段。Macugen? (哌加他尼鈉注 射液）、激光光凝術(shù)和光動(dòng)力學(xué)治療能夠控制黃斑區(qū)中的異常血管生長和流血，這對有些患 有濕性AMD的患者有用；然而，視力已經(jīng)喪失的則不能通過這些技術(shù)恢復(fù)。如果視力已經(jīng)喪 失，存在可以幫助提高生活質(zhì)量的低視力輔助器。
[0022] 年齡相關(guān)性黃斑變性（AMD)的最早征兆之一是稱為脈絡(luò)膜小疣的細(xì)胞外沉 積物在視網(wǎng)膜色素上皮（RPE)基底層和布魯赫膜（BM)之間的積累。近來由Anderson 等人進(jìn)行的研宄已證實(shí)脈絡(luò)膜小琉包含淀粉樣蛋白0 (Experimental Eye Research 78(2004)243-256)。
[0023] 正在進(jìn)行的研宄繼續(xù)探索可能促進(jìn)AMD的環(huán)境、遺傳和飲食因素。也正在探索新 的治療策略，包括視網(wǎng)膜細(xì)胞移植物、能夠預(yù)防或減緩疾病發(fā)展的藥物、放射療法、基因療 法、植入到視網(wǎng)膜的可幫助刺激視力的計(jì)算機(jī)芯片、以及預(yù)防黃斑區(qū)下新血管生長的藥劑。
[0024] 開發(fā)新藥物時(shí)，考慮的一個(gè)重要因素是對目標(biāo)患者來說使用的容易性。由于對患 者的便利性，口服藥物遞送（特別是片劑、膠囊劑和軟膠劑）占所有消費(fèi)劑型的70%。藥物 開發(fā)人員認(rèn)同患者更喜歡口服遞藥，而不是接受注射或其它更具侵入性的藥物給藥方式。 導(dǎo)致減少給藥間隔頻率（即一天一次或持續(xù)釋放）的制劑也是優(yōu)選的。以口服劑型給藥抗 生素的容易性導(dǎo)致了治療期間患者順從性的增加。
[0025] 需要有效的方法和組合物用于預(yù)防或解決淀粉樣變性相關(guān)并發(fā)癥一一一組與淀 粉樣蛋白斑塊的形成相關(guān)的疾病和紊亂，包括繼發(fā)性淀粉樣變性和年齡相關(guān)性淀粉樣變 性，包括但不限于神經(jīng)紊亂如阿爾茨海默病（AD)、路易體癡呆、唐氏綜合征、遺傳性腦出血 伴淀粉樣變性（荷蘭型）；關(guān)島帕金森-癡呆綜合征；以及其它基于淀粉樣蛋白樣蛋白或與 其相關(guān)的疾病，如進(jìn)行性核上性麻痹、多發(fā)性硬化；克-雅二氏病、帕金森氏病、HIV-相關(guān)癡 呆、ALS(肌萎縮性側(cè)索硬化癥）、成年發(fā)病型糖尿病；老年性心臟淀粉樣變性；內(nèi)分泌腫瘤， 以及其它疾病，包括黃斑變性。特別需要能對抗疾病的生理學(xué)表現(xiàn)（如與淀粉樣蛋白或淀 粉樣蛋白樣肽的纖維聚集相關(guān)的斑塊形成）的藥劑。
[0026] 據(jù)報(bào)道，由接種與弗氏完全或不完全佐劑混合的^:_42所引起的抗淀粉樣蛋白 抗體能夠減少人阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因小鼠的淀粉樣蛋白的負(fù)荷（Schenk等人，1999)。對 NORBA轉(zhuǎn)基因小鼠腹膜內(nèi)接種在脂質(zhì)體中重構(gòu)的四棕櫚?；疉h%引起了顯著的抗淀粉 樣蛋白抗體滴度，據(jù)報(bào)道這能夠在體外和體內(nèi)溶解淀粉樣蛋白纖維和斑塊（Nicolau等 人，2002)。
[0027] Bard等人（2000)首先提出了淀粉樣蛋白斑塊和纖維溶解的一種可能機(jī)制，他們 的結(jié)論是，抗體調(diào)理斑塊，隨后小神經(jīng)膠質(zhì)的巨噬細(xì)胞將之破壞。De Mattos等人（2001)指 出抗0淀粉樣蛋白中心結(jié)構(gòu)域的mAb能夠結(jié)合并完全隔離血漿淀粉樣蛋白。他們認(rèn)為循 環(huán)系統(tǒng)中這些mAb的存在改變了腦和血漿中的Af3平衡，有利于外周的清除和代謝而不是 在腦內(nèi)沉積。
[0028] 用嚙齒類動(dòng)物抗體進(jìn)行長期人治療可導(dǎo)致抗球蛋白反應(yīng)，該反應(yīng)在給藥后約8-12 天可檢測到，并在約20-30天達(dá)到峰值。如果遭遇了該抗球蛋白反應(yīng)，必須在不超過約10 天之后中斷治療，并且通常無法在之后的時(shí)間重新治療，因?yàn)檫@將導(dǎo)致繼發(fā)性抗球蛋白反 應(yīng)的快速出現(xiàn)。盡管嚙齒類動(dòng)物抗體與人抗體享有相當(dāng)大程度的序列保守性，但是在嚙齒 類動(dòng)物抗體和人抗體之間存在許多序列差異，其足以使嚙齒類動(dòng)物抗體在人體中成為免疫 原性的。
[0029] 可以通過直接在人體中產(chǎn)生抗體或通過創(chuàng)造"人源化"（又稱"重構(gòu)（reshaped) " 抗體）來解決這一問題。人源化抗體具有這樣的可變區(qū)氨基酸序列：其含有散布在人或人 樣構(gòu)架序列中的嚙齒類動(dòng)物衍生的CDR。由于人源化抗體的特異性是由嚙齒類動(dòng)物衍生的 CDR提供的，因此其殘基應(yīng)基本上不經(jīng)改變地應(yīng)用，僅允許不會(huì)顯著干擾抗體對其靶抗原的 親和性和特異性的微小修飾。構(gòu)架殘基可以衍生自任何靈長類動(dòng)物，或尤其是衍生自任何 人可變區(qū)，或其組合，并且所得到的設(shè)計(jì)好的可變區(qū)視為是經(jīng)重構(gòu)的。
[0030] 為最大可能地在重構(gòu)抗體中保留親和力，適當(dāng)?shù)剡x擇構(gòu)架區(qū)很重要。已知構(gòu)架序 列支撐CDR，使之以正確的空間取向與抗原相互作用，并且構(gòu)架殘基有時(shí)甚至?xí)⑴c抗原結(jié) 合。為保留抗體對其抗原的親和性，最好選擇與嚙齒類動(dòng)物構(gòu)架序列最為相似的人構(gòu)架序 列。然后仍然可能需要用嚙齒類構(gòu)架中相應(yīng)的殘基替換人構(gòu)架序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基 酸，以避免親和性的喪失。通過計(jì)算機(jī)建模可輔助這一替換。
[0031] 本發(fā)明提供包括高特異性和高效抗體、尤其是嵌合抗體（包括其片段）、更尤其是 部分或完全人源化的抗體（包括其片段）的新方法和組合物，所述抗體具有特異性識(shí)別并 結(jié)合一系列0淀粉樣蛋白抗原的特定表位的能力，其中所述抗原可以以單體、二聚體、三 聚體等多聚體形式、以聚集體、纖維、纖絲的形式、或以濃縮的斑塊形式遞呈給抗體。通過 本發(fā)明教導(dǎo)提供的抗體特別可用于治療淀粉樣變性：一組與淀粉樣蛋白斑塊的形成相關(guān)的 疾病和紊亂，包括繼發(fā)性淀粉樣變性和年齡相關(guān)性淀粉樣變性，包括但不限于神經(jīng)紊亂，如 阿爾茨海默病（AD)、路易體癡呆、唐氏綜合征、遺傳性腦出血伴淀粉樣變性（荷蘭型）、關(guān)島 帕金森_癡呆綜合征；以及其它基于淀粉樣蛋白樣蛋白或與其相關(guān)的疾病，如進(jìn)行性核上 性麻痹、多發(fā)性硬化；克-雅二氏病、遺傳性腦出血伴淀粉樣變性（荷蘭型）、帕金森氏病、 HIV-相關(guān)癡呆、ALS(肌萎縮性側(cè)索硬化癥）、成年發(fā)病型糖尿?。焕夏晷孕呐K淀粉樣變性； 內(nèi)分泌腫瘤，以及其它疾病，包括黃斑變性；這些僅僅是其中的一些例子。
[0032] 發(fā)明概述
[0033] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及嵌合抗體或其片段、或人源化抗體或其片段，其識(shí) 別并結(jié)合0淀粉樣蛋白上的至少一個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，特別是至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)， 以及更特別是至少三個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，其中所述的一個(gè)、所述的至少兩個(gè)和所述的至少 三個(gè)結(jié)合位點(diǎn)各含有主要參與抗體結(jié)合的至少一個(gè)或兩個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基。
[0034] 特別地，根據(jù)本發(fā)明的嵌合抗體或其片段或者人源化抗體或其片段結(jié)合0淀粉 樣蛋白上的至少兩個(gè)、特別是至少三個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，其中三個(gè)獨(dú)特結(jié)合位點(diǎn)中的至少 兩個(gè)位點(diǎn)包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基，并且三個(gè)獨(dú)特結(jié)合位點(diǎn)中 的至少一個(gè)位點(diǎn)包含至少一個(gè)氨基酸殘基。
[0035] 所述包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基的至少兩個(gè)獨(dú)特結(jié)合 位點(diǎn)，在抗原上彼此緊鄰，被不參與抗體結(jié)合或參與程度與所述至少兩個(gè)連續(xù)的氨基殘基 相比顯著更小的至少一個(gè)氨基酸殘基所隔開和/或側(cè)接，從而形成構(gòu)象不連續(xù)的表位。
[0036] 所述分別包含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基或至少一個(gè)主要 參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基的至少三個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，在表位上彼此緊鄰，被不參與抗 體結(jié)合或參與程度與所述主要參與抗體結(jié)合的氨基殘基相比顯著更小的至少一個(gè)氨基酸 殘基所隔開和/或側(cè)接，從而形成構(gòu)象不連續(xù)的表位。
[0037] 特別地，提供了嵌合抗體或其片段、或人源化抗體或其片段，其識(shí)別并結(jié)合0淀 粉樣蛋白上的至少一個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，特別是至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，更特別的是至 少三個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，其中所述至少一個(gè)或所述至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)各含至少兩個(gè) 連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基，其中代表第一結(jié)合位點(diǎn)的所述至少兩個(gè)連續(xù)的氨 基酸殘基是嵌入在如下核心序列（SEQ IDNO:9)中的-Phe-Phe-:
[0038] Xaa3-Phe-Phe_Xaa4-Xaa5-Xaa 6,其中
[0039] Xaa3是選自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和lie的氨基酸殘基；
[0040] Xaa4是選自Ala、Val、Leu、Ser和lie的氨基酸殘基；
[0041] Xaa5是選自Glu和Asp的氨基酸殘基；
[0042] Xaa6是選自Glu和Asp的氨基酸殘基；并且其中所述的氨基酸殘基Xaa 3、Xaa4、Xaa5 和Xaa6不參與抗體結(jié)合或參與程度顯著地小于該-Phe-Phe-結(jié)合位點(diǎn)。
[0043] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了嵌合抗體或其片段、或人源化抗體或其片 段，其中
[0044] Xaa3是 Val 或 Leu，但特別是 Val ;
[0045] 乂884是 Ala 或 Val，但特別是 Ala ;
[0046] 乂385是 Glu 或 Asp，但特別是 Glu ;
[0047] 乂886是 Glu 或 Asp，但特別是 Asp。
[0048] 特別地，提供了嵌合抗體或其片段、或人源化抗體或其片段，其識(shí)別并結(jié)合0淀 粉樣蛋白上的至少一個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，特別是至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，更特別的是至 少三個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，其中所述獨(dú)特結(jié)合位點(diǎn)分別包含至少一個(gè)或至少兩個(gè)連續(xù)的主要 參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基，其中代表第一結(jié)合位點(diǎn)的所述至少兩個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基是 嵌入在如下核心序列中的-Phe-Phe-，并且所述至少一個(gè)氨基酸殘基是嵌入在該核心序列 中的-His-:
[0049] _Xaa「Hi s_Xaa3_Xaa4_Xaa5_Xaa6_Phe_Phe_Xaa7_Xaa8_Xaa9_,
[0050] 其中
[0051] Xaai是選自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸殘基；
[0052] Xaa3是選自Asn和Gin的氨基酸殘基；
[0053] Xaa4是選自His、Asn、Gln、Lys和Arg的氨基酸殘基；
[0054] Xaa5是選自Ala、Val、Leu、Ser和lie的氨基酸殘基；
[0055] Xaa6是選自八1&、'\^11、1^11、正亮氨酸、]^1:、？116和116的氨基酸殘基；
[0056] Xaa7是選自Ala、Val、Leu和lie的氨基酸殘基；
[0057] Xaa8是選自Glu和Asp的氨基酸殘基；
[0058] Xaa9是選自Glu和Asp的氨基酸殘基；且其中所述的氨基酸殘基Xaa p Xaa3、Xaa6、Xaa7、XaajP Xaa 9不參與抗體結(jié)合或參與程度分別地小于至顯著地小于 該-His-和-Phe-Phe-結(jié)合位點(diǎn)。
[0059] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了嵌合抗體或其片段、或人源化抗體或其片 段，其中
[0060] 父383是Gin或Asn，但特別是Gin ;
[0061] Xaa4是 Lys ;
[0062] Xaa^ Leu ;
[0063] Xaa6是 Val 或 Leu，但特別是 Val ;
[0064] 乂337是 Ala 或 Val，但特別是 Ala ;
[0065] 乂388是Glu或Asp，但特別是Glu ;且
[0066] 乂389是 Asp 或 Glu，但特別是 Asp。
[0067] 在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，提供了嵌合抗體或其片段、或人源化抗體或其片 段，其識(shí)別并結(jié)合0淀粉樣蛋白上的至少一個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，特別地至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié) 合位點(diǎn)，更特別地至少三個(gè)獨(dú)特的結(jié)合位點(diǎn)，其中所述至少一個(gè)或所述至少兩個(gè)獨(dú)特的結(jié) 合位點(diǎn)各含至少兩個(gè)連續(xù)的主要參與抗體結(jié)合的氨基酸殘基，其中代表第二結(jié)合位點(diǎn)的該 至少兩個(gè)連續(xù)的氨基酸殘基是嵌入在如下核心序列（SEQ ID N0:10)中的-Lys-Leu-:
[0068] XaafXaa^Lys-Leu-Xaas，其中
[0069] Xaai是選自His、Asn、Gin、Lys和Arg的氨基酸殘基；
[0070] Xaa2是選自Asn和Gin的氨基酸殘基；
[0071] Xaa3是選自Ala、Val、Leu、正亮氨酸、Met、Phe和lie的氨基酸殘基；且其中所述 的氨基酸殘基Xaa 2、Xaa3不參與抗體結(jié)合或參與程度小