基因突變體及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因突變體及其應(yīng)用。具體地，本發(fā)明涉及分離的核酸、分離的多膚、 篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品的方法、篩選易感常染色體隱 性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品的系統(tǒng)、用于篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色 素變性疾病的生物樣品的試劑盒、構(gòu)建體W及重組細胞。
【背景技術(shù)】
[0002] 原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性（retinitispigmentosa,在本文中有時也簡稱為"RP") 是最常見的遺傳性致盲疾病，在全世界的發(fā)病率約為1/3500至1/5000,在我國的發(fā)病率約 為1/3467,目前已經(jīng)成為威脅全球青年和中年人群視覺功能和質(zhì)量的主要眼部疾病。RP是 由于視網(wǎng)膜感光細胞(包括視錐細胞和視桿細胞W及視網(wǎng)膜色素上皮細胞）的變性，外層視 網(wǎng)膜進行性退化而導致的眼底病。RP的遺傳方式表現(xiàn)為多種形式，其中常染色體顯性遺傳 (autosomadominantretinitispigmentosa,簡稱為ADRP)約占發(fā)病率的 15-20%、常染色 體隱性遺傳（autosomarecessiveretinitispi卵entosa,簡稱為ARRP)占 20-25%、X連 鎖遺傳（X-linkedretinitispigmentosa,簡稱為）(LRP)占 10-15%、其余 40-55% 不能確定 其遺傳方式。到目前為止，通過連鎖分析或候選基因篩選已經(jīng)確定了 19個ADRP基因位點， 26個ARRP基因位點，6個化RP基因位點，其中43個基因已經(jīng)得到克隆巧etNet:http:/7 WWW.S地.uth.tmc.e化/retnet/sum-dis.htm)。雖然在每種遺傳方式中均發(fā)現(xiàn)了一些致病 基因，但仍存在著相當一部分未知致病基因位點，預(yù)計在人類中可能仍然存在70多個位點 與RP相關(guān)。
[0003] 因而，目前對原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性疾病的研究仍有待深入。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的 在于提出一種能夠有效篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品的方 法。
[0005] 本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作而完成的：發(fā)明人通過已知致病基因捕獲測序聯(lián) 合候選基因突變驗證的方法確定了常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的致病基因上 的新突變。
[0006] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實施例， 與SEQIDNO;1相比，該核酸具有C. 1924T〉A(chǔ)突變；或者與SEQIDNO;3相比，該核酸具有 c.472delC突變，或者C. 1744G〉A(chǔ)突變。根據(jù)本發(fā)明的實施例，發(fā)明人確定了ABCA4和CNGA1 基因突變體，該些新突變體與常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的發(fā)病密切相關(guān)，從 而通過檢測該些新突變體在生物樣品中是否存在，可W有效地檢測生物樣品是否易感常染 色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種分離的多膚。根據(jù)本發(fā)明的實施例，與 SEQIDN0;2相比，該分離的多膚具有P.F642I突變；或者與SEQIDN0;4相比，該分離的 多膚具有P.L158F*4突變，或者P.G582R突變。通過檢測生物樣品中是否表達該多膚，可W 有效地檢測生物樣品是否易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的第H方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色 素變性疾病的生物樣品的方法。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該方法包括W下步驟：從生物樣品 提取核酸樣本；確定所述核酸樣本的核酸序列；所述核酸樣本的核酸序列或其互補序列， 與SEQIDN0;1相比具有C. 1924T〉A(chǔ)突變，或者與SEQIDN0;3相比具有C. 472delC和 C.1744G〉A(chǔ)的復(fù)合雜合突變，是所述生物樣品易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病 的指示。通過根據(jù)本發(fā)明實施例的篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物 樣品的方法，可W有效地篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色 素變性疾病的生物樣品的系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該系統(tǒng)包括：核酸提取裝置，所述核 酸提取裝置用于從所述生物樣品提取核酸樣本；核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝 置與所述核酸提取裝置相連，用于對所述核酸樣本進行分析，W便確定所述核酸樣本的核 酸序列；判斷裝置，所述判斷裝置與所述核酸序列確定裝置相連，W便基于所述核酸樣本的 核酸序列或其互補序列，與SEQIDN0;1相比具有C. 1924T〉A(chǔ)突變，或者與SEQIDN0;3相 比具有C. 472delC和C. 1744G〉A(chǔ)的復(fù)合雜合突變，判斷所述生物樣品是否易感常染色體隱 性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病。利用該系統(tǒng)，能夠有效地實施前述篩選易感常染色體隱性遺 傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品的方法，從而可W有效地篩選易感常染色體隱性遺傳視 網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易感常染色體隱性遺傳視 網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該試劑盒含有：適于檢測 ABCA4和CNGA1基因突變體的至少一種的試劑，其中與SEQIDN0;1相比，所述ABCA4基因 突變體具有C. 1924T〉A(chǔ)突變；與SEQIDN0;3相比，所述CNGA1基因突變體具有C. 472delC 突變，或者C. 1744G〉A(chǔ)突變。利用根據(jù)本發(fā)明的實施例的試劑盒，能夠有效地篩選易感常染 色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物樣品。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明還提出了一種構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明的實施例，該構(gòu) 建體包含前面所述的分離的核酸。需要說明的是，"構(gòu)建體包含前面所述的分離的核酸"表 示，本發(fā)明的構(gòu)建體包含與SEQIDN0;1相比具有C. 1924T〉A(chǔ)突變的ABCA4基因突變體的核 酸序列，或者包含與SEQIDN0;3相比具有C. 472delC突變，或者C. 1744G〉A(chǔ)突變的CNGA1 基因突變體的核酸序列，或者同時包含上述ABCA4基因突變體和CNGA1基因突變體的核酸 序列。由此，利用本發(fā)明的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞獲得的重組細胞，能夠有效地用于篩選治療 常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的藥物。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的第走方面，本發(fā)明還提出了一種重組細胞。根據(jù)本發(fā)明的實施例， 該重組細胞是通過前面所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細胞而獲得的。根據(jù)本發(fā)明的一些實施例， 利用本發(fā)明的重組細胞，能夠有效地篩選治療常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的藥 物。
[0013] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【附圖說明】
[0014] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結(jié)合下面附圖對實施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中：
[0015] 圖1 ;顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變 性疾病的生物樣品的系統(tǒng)及其組成部分的示意圖，其中，
[0016] A為根據(jù)本發(fā)明實施例的篩選易感常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性疾病的生物 樣品的系統(tǒng)的示意圖，
[0017] B為根據(jù)本發(fā)明實施例的核酸提取裝置的示意圖，
[0018] C為根據(jù)本發(fā)明實施例的核酸序列確定裝置的示意圖；
[001引圖2 ;顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例的兩個ARRP家系的家系圖譜，其中，
[0020] A為根據(jù)本發(fā)明實施例的ARRP家系1的家系圖譜，
[0021] B為根據(jù)本發(fā)明實施例的ARRP家系2的家系圖譜；
[0022] 圖3 ;顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例，各物種間的ABCA4基因的P. 642F、CNGA1基 因的P. 15化和P. 582G，該3個位點的保守性比較結(jié)果；
[0023] 圖4 ;顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例，ARRP家系1內(nèi)的先證者11:8及正常對照的 ABCA4基因突變位點的Sanger測序驗證峰圖；
[0024] 圖5 ;顯示了根據(jù)本發(fā)明一個實施例，ARRP家系2內(nèi)的先證者11:6及正常對照的 CNGA1基因突變位點的Sanger測序驗證峰圖。
【具體實施方式】
[0025] 下面詳細描述本發(fā)明的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā) 明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0026] ABCA4及CNGA1基因突變體
[0027] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的核酸。根據(jù)本發(fā)明的實施例， 與SEQIDNO;1相比，該核酸具有C.1924T〉A(chǔ)突變；或者與SEQIDNO;3相比，該核酸具有 C.472delC突