伊爾型EBOV核酸疫苗I、所述蘇丹型EBOV核酸疫 苗II和所述科特迪瓦型EBOV核酸疫苗III組成； 所述扎伊爾型EBOV核酸疫苗I、所述蘇丹型EBOV核酸疫苗II和所述科特迪瓦型EBOV 核酸疫苗III的質(zhì)量比為1:1:1 ; 所述埃博拉病毒亞單位疫苗為由所述扎伊爾型EBOV亞單位疫苗IV、所述蘇丹型EBOV 亞單位疫苗V和所述科特迪瓦型EBOV亞單位疫苗VI組成； 所述扎伊爾型EBOV亞單位疫苗IV ;所述蘇丹型EBOV亞單位疫苗V ;所述科特迪瓦型 EBOV亞單位疫苗VI的質(zhì)量比為1: 1:1 ; 所述埃博拉病毒疫苗為由所述扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、所述蘇丹型EBOV VLP疫苗 VID和所述科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX組成； 所述扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、所述蘇丹型EBOV VLP疫苗VID和所述科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX的質(zhì)量比為1:1:1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的成套免疫原，其特征在于： 所述表達(dá)扎伊爾型EBOV G蛋白1的重組載體為將所述扎伊爾型EBOV G蛋白1的編碼 基因插入PVAXl載體得到的載體； 所述表達(dá)蘇丹型EBOV G蛋白1的重組載體為將所述蘇丹型EBOV G蛋白1的編碼基因 插入pVAXl載體得到的載體； 所述表達(dá)科特迪瓦型EBOV G蛋白1的重組載體為將所述科特迪瓦型EBOV G蛋白1的 編碼基因插入PVAXl載體得到的載體。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的成套免疫原，其特征在于： 所述扎伊爾型EBOV G蛋白1編碼基因和扎伊爾型EBOV VP40蛋白3編碼基因通過名 稱為A的重組載體轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞，即得到扎伊爾型EBOV VLP疫苗W ; 所述名稱為A的重組載體為將扎伊爾型EBOV G蛋白1編碼基因和扎伊爾型EBOV VP40 蛋白3編碼基因插入pFastBacDUAL載體中得到的載體； 所述蘇丹型EBOV G蛋白1編碼基因和蘇丹型EBOV VP40蛋白3編碼基因通過名稱為 B的重組載體轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞，即得到蘇丹型EBOV VLP疫苗VID ; 所述名稱為B的重組載體為將蘇丹型EBOV G蛋白1編碼基因和蘇丹型EBOV VP40蛋 白3編碼基因插入pFastBacDUAL載體中得到的載體； 所述科特迪瓦型EBOV G蛋白1編碼基因和科特迪瓦型EBOV VP40蛋白3編碼基因通 過名稱為C的重組載體轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞，即得到科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX ; 所述名稱為C的重組載體為將科特迪瓦型EBOV G蛋白1編碼基因和科特迪瓦型 EB0VVP40蛋白3編碼基因插入pFastBacDUAL載體中得到的載體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的成套免疫原，其特征在于： 所述扎伊爾型EBOV G蛋白1的編碼基因序列如序列表中序列1所不； 所述蘇丹型EBOV G蛋白1的編碼基因序列如序列表中序列2所不； 所述科特迪瓦型EBOV G蛋白1的編碼基因序列如序列表中序列3所不； 所述扎伊爾型EBOV亞單位疫苗IV的編碼基因序列如序列表中序列4所示； 所述蘇丹型EBOV亞單位疫苗V的編碼基因序列如序列表中序列5所示； 所述科特迪瓦型EBOV亞單位疫苗VI的編碼基因序列如序列表中序列6所示； 所述扎伊爾型EBOV VP40蛋白3的編碼基因序列如序列表中序列7所示； 所述蘇丹型EBOV VP40蛋白3的編碼基因序列如序列表中序列8所示； 所述科特迪瓦型EBOV VP40蛋白3的編碼基因序列如序列表中序列9所示。
6. 由權(quán)利要求1-5中任一所述的免疫原制備得到的抗埃博拉病毒的免疫球蛋白 F (aV ) 2、抗埃博拉病毒的抗體或中和埃博拉病毒的產(chǎn)品。
7. 權(quán)利要求1-5中任一所述的免疫原在制備抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(aV ) 2中 的應(yīng)用； 或權(quán)利要求1-5中任一所述的免疫原在制備抗埃博拉病毒的抗體中的應(yīng)用； 或權(quán)利要求1-5中任一所述的免疫原在制備中和埃博拉病毒的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8. 權(quán)利要求7中的所述的抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F (aV ) 2、所述的抗埃博拉病毒 的抗體或所述的中和埃博拉病毒的產(chǎn)品在制備預(yù)防和/或治療埃博拉病毒引起的疾病的 產(chǎn)品中的應(yīng)用。
9. 一種制備抗埃博拉病毒的抗體或中和埃博拉病毒的產(chǎn)品的試劑盒，包括權(quán)利要求 1-5中任一所述的免疫原。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括記載在可讀載體中 的免疫方法： 所述免疫方法為：第一次免疫用扎伊爾型EBOV核酸疫苗I、蘇丹型EBOV核酸疫苗II和 科特迪瓦型EBOV核酸疫苗III各3mg混勻得到的三價(jià)核酸疫苗、第二次免疫用扎伊爾型EBOV 核酸疫苗I、蘇丹型EBOV核酸疫苗II和科特迪瓦型EBOV核酸疫苗III各6mg混勻得到的三 價(jià)核酸疫苗、第三次免疫用扎伊爾型EBOV核酸疫苗I、蘇丹型EBOV核酸疫苗II和科特迪瓦 型EBOV核酸疫苗III各12mg混勻得到的三價(jià)核酸疫苗；第四次免疫用扎伊爾型EBOV核酸疫 苗I、蘇丹型EBOV核酸疫苗II和科特迪瓦型EBOV核酸疫苗III各24mg混勻得到的三價(jià)核酸 疫苗； 或第一次免疫用扎伊爾型EBOV亞單位疫苗IV、蘇丹型EBOV亞單位疫苗V、科特迪瓦型 EBOV亞單位疫苗VI各Img混勻得到的三價(jià)亞單位疫苗；第二次免疫用扎伊爾型EBOV亞單 位疫苗IV、蘇丹型EBOV亞單位疫苗V、科特迪瓦型EBOV亞單位疫苗VI各2mg混勻得到的三 價(jià)亞單位疫苗；第三次免疫用扎伊爾型EBOV亞單位疫苗IV、蘇丹型EBOV亞單位疫苗V和科 特迪瓦型EBOV亞單位疫苗VI各3mg混勻得到的三價(jià)亞單位疫苗；第四次免疫用扎伊爾型 EBOV亞單位疫苗IV、蘇丹型EBOV亞單位疫苗V和科特迪瓦型EBOV亞單位疫苗VI各4mg混 勾得到的三價(jià)亞單位疫苗； 或第一次免疫用扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、蘇丹型EBOV VLP疫苗VID和科特迪瓦型 EBOV VLP疫苗IX各Img混勻得到的三價(jià)VLP疫苗；第二次免疫用扎伊爾型EBOV VLP疫苗 W、蘇丹型EBOV VLP疫苗VID和科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX各2mg混勻得到的三價(jià)VLP疫 苗；第三次免疫用扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、蘇丹型EBOV VLP疫苗VDI、科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX各3mg混勻得到的三價(jià)VLP疫苗；第四次免疫用扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、蘇 丹型EBOV VLP疫苗VID和科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX各4mg混勻得到的三價(jià)VLP疫苗； 或第一次免疫用核酸疫苗扎伊爾型EBOV核酸疫苗I、蘇丹型EBOV核酸疫苗II和科特 迪瓦型EBOV核酸疫苗III各Img混勻得到的三價(jià)核酸疫苗；第二次免疫用扎伊爾型EBOV亞 單位疫苗IV、蘇丹型EBOV亞單位疫苗V和科特迪瓦型EBOV亞單位疫苗VI各Img混勻得到 的三價(jià)亞單位疫苗；第三次免疫用扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、蘇丹型EBOV VLP疫苗VID和科 特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX各2mg混勻得到的三價(jià)VLP疫苗；第四次免疫用扎伊爾型EBOV VLP疫苗W、蘇丹型EBOV VLP疫苗VID和科特迪瓦型EBOV VLP疫苗IX各3mg混勻得到的三價(jià) VLP疫苗； 或第一次免疫Img的EBOV核酸疫苗I ;第二次免疫Img的EBOV亞單位疫苗IV ;第三次 免疫2mg的EBOV VLP疫苗W ;第四次免疫3mg的EBOV VLP疫苗W ; 所述免疫的動物為馬；所述馬的重量為300-500kg。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(ab′)2及其制備方法。本發(fā)明利用三種三價(jià)EBOV疫苗抗原：EBOV核酸疫苗、EBOV亞單位疫苗和EBOV VLP疫苗免疫健康動物，產(chǎn)生高效價(jià)EBOV的抗血清，去除能引起副作用的Fc片段，制備得到抗EBOV特異性免疫球蛋白F(ab′)2。通過實(shí)驗(yàn)證明：本發(fā)明制備得到的抗EBOV特異性免疫球蛋白F(ab′)2不僅中和效價(jià)、純度、安全性均較高且穩(wěn)定，符合中國生物制品規(guī)程的要求，而且能特異中和EBOV，對EBOV感染有特異性治療效果，可以有效地治療埃博拉病毒病，是非常有價(jià)值的治療性藥物。
【IPC分類】C07K16-10, A61P31-14, A61K39-42
【公開號】CN104829710
【申請?zhí)枴緾N201510138356
【發(fā)明人】趙忠鵬, 范志和, 范鐵炯, 羅德炎, 李敏, 段躍強(qiáng), 楊曉嵐, 楊鵬輝, 邢麗, 王希良, 史小月, 李曉, 羅湘初, 張志平, 孫九如
【申請人】中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所, 上海賽倫生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年3月26日