圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，基于靶向性免疫細(xì)胞群的流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié) 果獲得的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0062] 需要說明的是，術(shù)語"第一"、"第二"僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相 對(duì)重要性或者隱含指明所指示的技術(shù)特征的數(shù)量。由此，限定有"第一"、"第二"的特征可 以明示或者隱含地包括一個(gè)或者更多個(gè)該特征。進(jìn)一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說 明，"多個(gè)"的含義是兩個(gè)或兩個(gè)以上。
[0063] 下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方案進(jìn)行解釋。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下面的 實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條 件的，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件（例如參考J.薩姆布魯克等著，黃培堂等 譯的《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，第三版，科學(xué)出版社）或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或 儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品，例如可以采購自Illumina公 司。
[0064] 實(shí)施例1:
[0065] 一、材料與設(shè)備
[0066] 1、實(shí)驗(yàn)室級(jí)別：GLP
[0067] 2、儀器設(shè)備：
[0068] 負(fù)80度超低溫冰箱（中科美菱，DW-HL388);普通冰箱（海爾，雙開門，-20°C 和4°C);霉菌培養(yǎng)箱（上海博迅，MJX-160B-Z);恒溫水浴箱（SSW-420-2S) ;C02培養(yǎng)箱 (HF240);低速離心機(jī)（上海安亭，TDL-40C);倒置生物顯微鏡（科信，型號(hào)：BLD-1);生物 安全柜（蘇州凈化，雙人）；電動(dòng)移液器（德國(guó)普蘭德）l-l〇ml;微量移液槍（大龍）1套，4 把；程序降溫盒（Thermo);液氮罐（金鳳，YDS-120-216) ;PCR儀；凝膠電泳成像系統(tǒng)；電泳 儀；恒溫儀；
[0069] 3、細(xì)胞培養(yǎng)耗材：
[0070] 細(xì)胞培養(yǎng)袋〇^1?^1公司）；75〇112培養(yǎng)瓶、175〇11 2培養(yǎng)瓶、1.81111凍存管、1.51111￡? 管、50ml離心管、15ml離心管，均來自美國(guó)Coning公司；0? 22um針頭濾器（美國(guó)BD公司）； lOOum細(xì)胞篩網(wǎng)（美國(guó)BD公司）；30ml注射器（上海醫(yī)療器械）。
[0071] 4、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：
[0072] 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基（Takara，貨號(hào)：GT-T561);澳大利亞胎牛血清（FBS QUALIFIED AUSTRALIA ORIGIN)，Gibco,貨號(hào)：10099-141 ;
[0073] 淋巴細(xì)胞分離液Ficoll液（GE，貨號(hào)：17-1440-02);
[0074]青霉素/鏈霉素雙抗溶液（PENICILLIN STREPTOMYCIN SOL，PS)，Gibco,貨號(hào)： 15140-122。
[0075] 5、培養(yǎng)基的配制：
[0076]5. 1試劑：
[0077]CTL1因子（包括y干擾素，1000U/ml) :1ml，-20°C長(zhǎng)期保存，4°C保存2周；
[0078]CTL2 因子（包括IL-l，1000U/ml;IL-2，1000U/ml;CD3 抗體，100ng/ml;CD28 抗體， lOOng/ml) :1ml，-20°C長(zhǎng)期保存，4°C保存 2 周；
[0079]CTL3 因子（包括IL-2，1000U/ml;IL-7,20ng/ml;IL-15,20ng/ml) :1ml，-20°C長(zhǎng) 期保存，4°C保存2周；
[0080]CTL4 因子（包括GM-CSF，1000U/ml;IL-4, 500U/ml;TNF-a，500U/ml;IL-1，500U/ ml;IL-6,500U/ml) :1ml，-20°C長(zhǎng)期保存，4°C保存 2 周；
[0081] 腫瘤抗原mRNA轉(zhuǎn)染混合物試劑A:100ul，-80°c長(zhǎng)期保存，溶解后一次用掉。
[0082] 5. 2配制方法：
[0083] 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：向無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中添加2%的慶大霉素，其中將0. 22um針頭濾 器過濾后使用。
[0084] CTL1培養(yǎng)基：將1管CTL1因子從-20度取出，常溫融化，加到20ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中， 并添加10%的客戶的血清，其中將0.22um針頭濾器過濾后使用。
[0085] CTL2培養(yǎng)基：將1管CTL2因子從-20度取出，常溫融化，加到20ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中， 其中將0? 22um針頭濾器過濾后使用。
[0086] CTL3培養(yǎng)基：將1管CTL3因子從-20度取出，常溫融化，加到500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基 中，其中將0. 22um針頭濾器過濾后使用，整個(gè)培養(yǎng)過程用3管。
[0087] DC培養(yǎng)基：將1管CTL4因子從-20度取出，常溫融化，加到50ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中， 并添加10%的客戶的血清，其中將0.22um針頭濾器過濾后使用。
[0088]二、方法
[0089] 1構(gòu)建AFP抗原cDNA質(zhì)粒
[0090] 首先，將AFP抗原基因進(jìn)行人工合成，并獲得基因的cDNA。
[0091] AFP抗原基因的cDNA序列如下：
[0092] ATGAAGTGGGTGGAATCAATTTTTTTAATTTTCCTACTAAATTTTACTGAATCCAGAACACTGCATAGA AATGAATATGGAATAGCTTCCATATTGGATTCTTACCAATGTACTGCAGAGATAAGTTTAGCTGACCTGGCTACCAT ATTTTTTGCCCAGTTTGTTCAAGAAGCCACTTACAAGGAAGTAAGCAAAATGGTGAAAGATGCATTGACTGCAATTG AGAAACCCACTGGAGATGAACAGTCTTCAGGGTGTTTAGAAAACCAGCTACCTGCCTTTCTGGAAGAACTTTGCCAT GAGAAAGAAATTTTGGAGAAGTACGGACATTCAGACTGCTGCAGCCAAAGTGAAGAGGGAAGACATAACTGTTTTCT TGCACACAAAAAGCCCACTCCAGCATCGATCCCACTTTTCCAAGTTCCAGAACCTGTCACAAGCTGTGAAGCATATG AAGAAGACAGGGAGACATTCATGAACAAATTCATTTATGAGATAGCAAGAAGGCATCCCTTCCTGTATGCACCTACA ATTCTTCTTTGGGCTGCTCGCTATGACAAAATAATTCCATCTTGCTGCAAAGCTGAAAATGCAGTTGAATGCTTCCA AACAAAGGCAGCAACAGTTACAAAAGAATTAAGAGAAAGCAGCTTGTTAAATCAACATGCATGTGCAGTAATGAAAA ATTTTGGGACCCGAACTTTCCAAGCCATAACTGTTACTAAACTGAGTCAGAAGTTTACCAAAGTTAATTTTACTGAA ATCCAGAAACTAGTCCTGGATGTGGCCCATGTACATGAGCACTGTTGCAGAGGAGATGTGCTGGATTGTCTGCAGGA TGGGGAAAAAATCATGTCCTACATATGTTCTCAACAAGACACTCTGTCAAACAAAATAACAGAATGCTGCAAACTGA CCACGCTGGAACGTGGTCAATGTATAATTCATGCAGAAAATGATGAAAAACCTGAAGGTCTATCTCCAAATCTAAAC AGGTTTTTAGGAGATAGAGATTTTAACCAATTTTCTTCAGGGGAAAAAAATATCTTCTTGGCAAGTTTTGTTCATGA ATATTCAAGAAGACATCCTCAGCTTGCTGTCTCAGTAATTCTAAGAGTTGCTAAAGGATACCAGGAGTTATTGGAGA AGTGTTTCCAGACTGAAAACCCTCTTGAATGCCAAGATAAAGGAGAAGAAGAATTACAGAAATACATCCAGGAGAGC CAAGCATTGGCAAAGCGAAGCTGCGGCCTCTTCCAGAAACTAGGAGAATATTACTTACAAAATGCGTTTCTCGTTGC TTACACAAAGAAAGCCCCCCAGCTGACCTCGTCGGAGCTGATGGCCATCACCAGAAAAATGGCAGCCACAGCAGCCA CTTGTTGCCAACTCAGTGAGGACAAACTATTGGCCTGTGGCGAGGGAGCGGCTGACATTATTATCGGACACTTATGT ATCAGACATGAAATGACTCCAGTAAACCCTGGTGTTGGCCAGTGCTGCACTTCTTCATATGCCAACAGGAGGCCATG CTTCAGCAGCTTGGTGGTGGATGAAACATATGTCCCTCCTGCATTCTCTGATGACAAGTTCATTTTCCATAAGGATC TGTGCCAAGCTCAGGGTGTAGCGCTGCAAACGATGAAGCAAGAGTTTCTCATTAACCTTGTGAAGCAAAAGCCACAA ATAACAGAGGAACAACTTGAGGCTGTCATTGCAGATTTCTCAGGCCTGTTGGAGAAATGCTGCCAAGGCCAGGAACA GGAAGTCTGCTTTGCTGAAGAGGGACAAAAACTGATTTCAA