蛋白激酶Stk38在制備膿毒癥預(yù)后評(píng)估試劑或試劑盒中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，具體涉及蛋白激酶Stk38在制備膿毒癥預(yù) 后評(píng)估中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 在病原生物感染機(jī)體的過程中，機(jī)體的固有免疫應(yīng)答首先被激活。固有免疫應(yīng)答 的激活主要依賴于機(jī)體免疫細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體（Patternrecognitionreceptors， PRRs)對(duì)病原生物特有成分的識(shí)別。目前發(fā)現(xiàn)的PRR主要分為三類：1、TLRs(Toll-like receptors) ;2、RLRs(RIG-I-likereceptors) ;3、NLRs(Nucleotide-oligomerization domain-likereceptors)〇
[0003] TLRs是一種進(jìn)化上高度保守的胚系編碼的I型跨膜蛋白，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞 內(nèi)區(qū)組成。目前發(fā)現(xiàn)并克隆了十多種哺乳動(dòng)物的TLRs分子，分別選擇識(shí)別不同的病原體相 關(guān)分子模式。TLR2特異性識(shí)別革蘭陽性菌的脂磷壁酸（LTA)，TLR3識(shí)別病毒的雙鏈RNA， TLR4識(shí)別格蘭陰性菌的脂多糖（LPS)，TLR9識(shí)別細(xì)菌和病毒的非甲基化CpGDNA等等。TLR2 的活化能夠促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答，而TLR9的活化則能夠促進(jìn)Thl型免疫應(yīng)答。識(shí)別PAMPs 之后，TLRs啟動(dòng)MyD88依賴的或者TRIF依賴的免疫反應(yīng)。在TLRs家族中，TLR2、TLR5、 TLR7、TLR8和TLR9介導(dǎo)的是MyD88依賴的信號(hào)通路。TLR3介導(dǎo)的信號(hào)通路依賴接頭蛋白 TRIF。而TLR4活化的信號(hào)通路則包括以上兩種。MyD88以及TRIF依賴的信號(hào)通路都會(huì)激 活NF-kB與MAPKs，進(jìn)而促進(jìn)促炎因子的釋放。作為識(shí)別保守結(jié)構(gòu)的病原體成分的關(guān)鍵分 子，Toll樣受體如何檢測(cè)病原體侵入，引發(fā)先天免疫反應(yīng)和宿主的抗原特異性的適應(yīng)性免 疫抑制是免疫學(xué)研宄的熱點(diǎn)。TLRs對(duì)于宿主防御至關(guān)重要，TLRs信號(hào)與炎癥和自身免疫性 疾病的發(fā)病也都密切相關(guān)。
[0004] 適度的TLRs活化以及炎癥反應(yīng)有利于機(jī)體清除入侵的病原體，但過度或者過長(zhǎng) 的持續(xù)活化以及大量促炎因子的釋放可能導(dǎo)致自身免疫性疫病甚至腫瘤的發(fā)生。因此，為 了避免過度炎癥帶來的損傷，機(jī)體的免疫系統(tǒng)能夠通過多種負(fù)向調(diào)控機(jī)制調(diào)節(jié)TLRs的活 化。近年來，隨著研宄的不斷深入，不斷有負(fù)向調(diào)控分子被發(fā)現(xiàn)。最近有研宄發(fā)現(xiàn)，組蛋白 甲基轉(zhuǎn)移酶Ashll能夠負(fù)向調(diào)控TLR啟動(dòng)的炎癥反應(yīng)，Ashll缺失的小鼠更易患自身免疫 性疾病。盡管如此，眾多的TLRs信號(hào)通路是如何被特異性活化及調(diào)節(jié)的，仍需要不斷深入 的闡明。
[0005]絲氨酸 / 蘇氨酸激酶 38(Serine/threoninekinase38,Stk38),又被成為核 Dbf2p相關(guān)激酶 1(nuclearDbf2p_relatedkinasel,Ndrl),是屬于AGC類絲 / 蘇氨酸激 酶中的NDR/LATS激酶家族，在進(jìn)化中高度保守。Stk38對(duì)中心體的精確復(fù)制必不可少，并且 能夠促進(jìn)Fas誘導(dǎo)的凋亡。與正常小鼠相比較，Stk38的缺失會(huì)導(dǎo)致小鼠更易患T細(xì)胞淋 巴瘤。Stk38還能夠穩(wěn)定c-myc蛋白及防止p21的堆積，從而促進(jìn)細(xì)胞周期中G1期的正常 進(jìn)行。迄今為止，Stk38是否能夠在免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用仍然未知（Hergovich，A.等，NDR kinasesregulateessentialcellprocessesfromyeasttohumans，NatRevMolCell Biol，7(4) :253-64.)。
[0006] 膿毒癥（sepsis)是指由感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatoryresponsesyndrome,SIRS)，是重癥監(jiān)護(hù)過程中導(dǎo)致死亡的首要原因。由 于其相對(duì)高發(fā)，且致死率較高，膿毒癥因此成為主要的公共健康問題之一。在膿毒癥發(fā)生 發(fā)展過程中，機(jī)體免疫功能紊亂具有非常重要的作用。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，臨床表現(xiàn)差異 大，治療困難。膿毒癥患者如果診斷延誤或者不能得到及時(shí)恰當(dāng)?shù)闹委?，可能發(fā)展為嚴(yán)重 膿毒癥及膿毒癥休克，甚至導(dǎo)致死亡，病死率高達(dá)30 %以上（Levy,M.M.等，Outcomesof theSurvivingSepsisCampaigninintensivecareunitsintheUSAandEurope:a prospectivecohortstudyTheLancetInfectiousDiseases, 2012, 12(12)，919 - 924)〇 因此，膿毒癥的早期診斷和治療成為急救醫(yī)學(xué)的研宄熱點(diǎn)之一。為了更加有效地治療和預(yù) 防膿毒癥，目前人們已經(jīng)越來越關(guān)注膿毒癥的早期診斷、治療及病情發(fā)展預(yù)判。
[0007]TLRs識(shí)別相應(yīng)特異性配體后發(fā)生構(gòu)象變化，活化下游信號(hào)傳導(dǎo)分子，誘導(dǎo)炎癥 細(xì)胞因子、趨化因子等細(xì)胞因子的表達(dá)，啟動(dòng)固有免疫反應(yīng)。如果TLRs信號(hào)傳導(dǎo)途徑過 度活化，則導(dǎo)致過度炎癥反應(yīng)，造成組織損傷。腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素 (IL)-lf3、IL-6等炎癥細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)細(xì)胞黏附因子 (ICAM)等黏附分子及一氧化氮（NO)等，招募中性粒細(xì)胞，造成血管內(nèi)皮損傷，激活凝血/ 纖溶系統(tǒng)，導(dǎo)致組織細(xì)胞損傷。組織細(xì)胞損傷釋放的危險(xiǎn)相關(guān)信號(hào)Oanger-associated molecularpatterns，DAMP)又進(jìn)一步活化TLRs，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo) 致膿毒性休克、多器官功能障礙，甚至死亡。
[0008] 已有研宄發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者單核/巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞高表達(dá)TLR2、TLR4及 其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，并且高表達(dá)TNF-a、IL-10等炎癥細(xì)胞因子，表明TLRs信號(hào)途徑異 ?；罨瘏⑴c膿毒癥的發(fā)生發(fā)展。有文獻(xiàn)報(bào)道，膿毒癥發(fā)病依賴于TLR9,抑制TLR9介導(dǎo) 的炎癥反應(yīng)，能夠降低膿毒癥造成的疾病損傷及其病死率（Plitas，G.等，Toll-like receptor9inhibitionreducesmortalityinpolymicrobialsepsis.JExp Med, 2008, 205 (6): 1277-83.Yasuda，H?等，ChloroquineandinhibitionofToll-like receptor9protectfromsepsis-inducedacutekidneyinjury.AmJPhysiolRenal Physiol, 2008, 294(5) :F1050-8)。TLR9介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)以及TLR9基因的多態(tài)性與慢性牙 周炎、肺結(jié)核等疾病的發(fā)生發(fā)展也具有相關(guān)性（Ashok，N?等，Toll-likereceptor9gene polymorphisminchronicandaggressiveperiodontitispatients，JIndianSoc Periodontol. 2014,18(6)，723-7;GrausteinA.D.等，TLR9generegionpolymorphisms andsusceptibilitytotuberculosisinVietnam，Tuberculosis(Edinb) ? 2015,95(2)， 190-6)〇
[0009] 雖然本領(lǐng)域中已知某些模式識(shí)別受體與膿毒癥具有一定的相關(guān)性，如TLR2、TLR4 等。但本領(lǐng)域中已知的PRR功能各異，信號(hào)傳導(dǎo)也不相同，如何尋找出特異性調(diào)控某條信號(hào) 通路的關(guān)鍵分子難度很大。
[0010] 目前，國(guó)內(nèi)外尚無有關(guān)蛋白激酶Stk38與膿毒癥相關(guān)性的研宄報(bào)道。
[0011] 而本領(lǐng)域迫切需要尋找到可有效用于膿毒癥治療、診斷和預(yù)后評(píng)估分子，并將其 用于這些用途中。
[0012] 如本文所用，術(shù)語"預(yù)后"是指預(yù)測(cè)疾病的可能病程和結(jié)局，其包括判斷疾病的特 定后果（如康復(fù)，某種癥狀、體征和并發(fā)癥等其它異常的出現(xiàn)或消失及死亡）。本發(fā)明中所 述的預(yù)后不良包括但不限于：生存期縮短、多器官衰竭出現(xiàn)比例增加、病程延長(zhǎng)等。在預(yù)測(cè) 了患者預(yù)后情況后，可結(jié)合提高Stk38分子的量的治療方法改善患者的預(yù)后。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的在于提供蛋白激酶Stk38在制備膿毒癥預(yù)后評(píng)估試劑或試劑盒中 的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了對(duì)Toll樣受體9介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)具有調(diào)控作用的分子一蛋白激酶 Stk38,由此本發(fā)明進(jìn)一步提供了Stk38分子在用于對(duì)象中膿毒癥治療、膿毒癥預(yù)后評(píng)估中 的新用途。
[0015] 本發(fā)明提供了蛋白激酶Stk38在制備膿毒