一種高純度水黃皮素的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物制備領(lǐng)域，具體涉及一種高純度水黃皮素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 化學(xué)對(duì)照品又稱標(biāo)準(zhǔn)品，是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研宄、質(zhì)量檢測(cè)和質(zhì)量控制的實(shí)物對(duì)照， 中藥化學(xué)對(duì)照品的研宄，是中藥標(biāo)準(zhǔn)化研宄的一個(gè)非常重要的部分，對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量評(píng)價(jià)，特 別是在藥品生產(chǎn)的質(zhì)量控制中，中藥化學(xué)對(duì)照品起著極其重大的作用，是中藥質(zhì)量控制的 基礎(chǔ)與核心。
[0003] 水黃皮素是一種呋喃黃酮類化學(xué)成分，是植物活性成分之一，也是許多植物和藥 品標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。目前尚未相應(yīng)的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，國(guó)內(nèi)外對(duì)水黃皮素中 藥化學(xué)對(duì)照品的系統(tǒng)研宄未見(jiàn)報(bào)道，參照中藥化學(xué)對(duì)照品（供含量測(cè)定用）的技術(shù)要求，對(duì) 水黃皮素化學(xué)對(duì)照品進(jìn)行研宄，建立水黃皮素化學(xué)對(duì)照品的批量提取工藝、純度與含量以 及雜質(zhì)檢查的分析測(cè)定方法，從而建立水黃皮素化學(xué)對(duì)照品的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，為其作為中藥化 學(xué)對(duì)照品以及藥材和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研宄提供科學(xué)基礎(chǔ)和保證。
[0004] 水黃皮素是從豆科植物干花豆/7OrtZia 干豆花葉植物分離得 到的活性物質(zhì)，從公開(kāi)文獻(xiàn)所知，文獻(xiàn)報(bào)道水黃皮素的提取分離過(guò)程和含量測(cè)定方法，如： 1.【題名】水黃皮化學(xué)成分的研宄：干燥的水黃皮葉粗粉8 kg，用10倍量的75乙醇提取3 次，提取液濃縮后得總浸膏2.1 kg。將浸膏混懸于水中，用石油醚萃取至萃取液基本無(wú)色， 合并及濃縮萃取液，得石油醚部分（124 g)。將石油醚萃取物75 g經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離， 用石油醚、石油醚一醋酸乙酯梯度洗脫，得水黃皮素單體。2.【題名】玉郎傘的化學(xué)成分分 析：取玉郎傘粗粉，用95%乙醇（相當(dāng)藥材10倍量）滲漉，收集滲漉液濃縮得黃色沉淀物 (收率0.27%)，經(jīng)氯仿回流得氯仿溶出物（收率0.16%)。取上述氯仿溶出物，用100~ 200目硅膠拌和均勻后低溫干燥，研細(xì)后上硅膠柱（濕法裝柱），用氯仿、氯仿一甲醇梯度洗 脫，收集到73個(gè)組分，TLC檢識(shí)，合并斑點(diǎn)相同組分，經(jīng)反復(fù)柱層析和薄層分離制備，用丙酮 多次重結(jié)晶純化，分離得到水黃皮素單體。3.【題名】壯藥干花豆枝葉化學(xué)成分研宄：干花 豆枝葉15Kg，陰干，粉碎，用95%乙醇冷浸提取3次，合并提取液減壓濃縮，得乙醇浸膏約 500 g。所得浸膏加水混懸后依次用石油醚2 L萃取后處理得石油醚浸膏30 g，醋酸乙酯2 L萃取后處理得醋酸乙酯浸膏50 g，正丁醇2 L萃取后處理得正丁醇浸膏45 g，萃取后水 溶液濃縮得水部分200g。取醋酸乙酯浸膏45 g經(jīng)硅膠柱色譜，以氯仿一甲醇（100:0 - 0: 100)梯度洗脫，每份200 mL，經(jīng)TLC薄層檢測(cè)合并成分相近部位，F(xiàn)r. III經(jīng)硅膠柱色譜，石 油醚一醋酸乙酯（20 :1)洗脫，收集流分，通過(guò)C18、S印hadexLH-20等反復(fù)柱色譜分離得到 水黃皮素單體。4.【題名】水黃皮化學(xué)成分及抗氧化活性研宄：對(duì)水黃皮葉粗粉采用75%乙 醇提取，再經(jīng)過(guò)石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等不同極性溶劑萃取，共分成四個(gè)不同極 性部位。然后用硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、大孔吸附樹(shù)脂和葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20) 等多種層析分離手段得到水黃皮素。5.【題名】RP-HPLC法測(cè)定水黃皮藥材中水黃皮素的 含量：建立RP-HPLC測(cè)定水黃皮藥材中水黃皮素含量的方法。6.【題名】HPLC法測(cè)定玉郎 傘中水黃皮素的含量：建立高效液相色譜法測(cè)定玉郎傘中水黃皮素含量的方法。7.【題名】 HPLC法測(cè)定腫痛寧酊中水黃皮素的含量：建立HPLC法測(cè)定腫痛寧酊中水黃皮素的含量。 8.【題名】薄層色譜一熒光分析法測(cè)定水羅傘藥材中水黃皮素含量的研宄：建立薄層色譜一 熒光分光光度法測(cè)定水羅傘中水黃皮素含量的方法。9.【題名】水羅傘藥材的鑒別及水黃 皮素的含量測(cè)定：采用性狀、顯微、TLC等法鑒別水羅傘藥材真?zhèn)?；采用HPLC法測(cè)定水羅傘 藥材中水黃皮素的含量，藥材檢查等項(xiàng)參照中國(guó)藥典方法測(cè)定，制訂壯藥材水羅傘的質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)。10.【名稱】一種高含量水黃皮素的提純方法，申請(qǐng)?zhí)?01010263044. 5的發(fā)明專利申 請(qǐng)公開(kāi)了一種高含量水黃皮素的提純方法，具體方法包括：將干花豆莖枝粉碎，用一定濃 度乙醇提取、濃縮，石油醚萃取兩次，萃余液上大孔樹(shù)脂，洗脫液濃縮再上聚酰胺柱分離 純化，95%乙醇重結(jié)晶即得。
[0005] 上述方法從不同角度論述了水黃皮素的提取分離，分離純度較高，但純度大多數(shù) 未達(dá)到中藥化學(xué)對(duì)照品的要求，即純度大于98%，無(wú)法滿足高純度水黃皮素化學(xué)對(duì)照品的需 要。
[0006] 通過(guò)對(duì)水黃皮素化學(xué)對(duì)照品進(jìn)行研宄，建立水黃皮素化學(xué)對(duì)照品的批量提取工 藝、純度與含量以及雜質(zhì)檢查的分析測(cè)定方法，從而建立水黃皮素化學(xué)對(duì)照品的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)， 為其作為中藥化學(xué)對(duì)照品以及藥材和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研宄提供科學(xué)基礎(chǔ)和保證。研宄結(jié)果 可為水黃皮素化學(xué)對(duì)照品提供更完整的基礎(chǔ)化學(xué)依據(jù)，掌握其化學(xué)信息和分析測(cè)試技術(shù)， 有利于相關(guān)產(chǎn)品的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用，而且對(duì)于開(kāi)發(fā)我國(guó)特有產(chǎn)物，開(kāi)發(fā)具有高技術(shù)、高附加 值的產(chǎn)品，提高市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力，將會(huì)產(chǎn)生潛在而不可估量的社會(huì)效益與經(jīng)濟(jì)效益。今后生產(chǎn) 的各種產(chǎn)品，無(wú)論是在國(guó)內(nèi)或是進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)，都需要靠高水平的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和高水平的分 析測(cè)試技術(shù)來(lái)獲得發(fā)展和提高，否則將失去市場(chǎng)，產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法變得愈來(lái)愈 重要，"安全、有效和質(zhì)量可控"的用藥標(biāo)準(zhǔn)已成為國(guó)際共識(shí)，藥品生產(chǎn)應(yīng)圍繞著這一中心展 開(kāi)，其核心為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制水平，而化學(xué)對(duì)照品則起關(guān)鍵的作用。但目前大部分中藥藥材及 其制劑，因化學(xué)成分不明或無(wú)化學(xué)對(duì)照品，無(wú)法闡明其作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，也無(wú)法進(jìn)行質(zhì) 量控制，而不能被現(xiàn)代文明社會(huì)所接受，也成為中草藥和天然藥物難以進(jìn)入國(guó)際藥品市場(chǎng) 的制約關(guān)鍵，技術(shù)壁皇給發(fā)展中藥產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了困難，因此，進(jìn)行中草藥化學(xué)成分的研宄及質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研宄是中藥現(xiàn)代化發(fā)展的必經(jīng)之路，對(duì)闡明中草藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)以及中草 藥制劑的生產(chǎn)加工工藝的制定、偽劣產(chǎn)品的鑒別等等具有重要的意義。毫無(wú)疑問(wèn)，對(duì)水黃皮 素進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研宄，建立規(guī)范化的分析測(cè)試方法，制定高技術(shù)水平的控制水黃皮素質(zhì)量 的檢測(cè)指標(biāo)和分析方法，使之科學(xué)化、規(guī)范化，增強(qiáng)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力，為中藥進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)創(chuàng)造 條件，具有重大的實(shí)際意義和學(xué)術(shù)價(jià)值。
[0007] 水黃皮素作為植物、藥材及其產(chǎn)品的化學(xué)對(duì)照品，是質(zhì)量控制的技術(shù)關(guān)鍵，眾多企 業(yè)、科研和檢驗(yàn)部門(mén)都需要高純度的水黃皮素對(duì)照品，其市場(chǎng)需求很大，由于水黃皮素在藥 材中的含量低，提取分離技術(shù)要求很高、難度很大。本發(fā)明進(jìn)行水黃皮素中藥化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)品制 備及其質(zhì)量控制技術(shù)研宄，解決高純度水黃皮素化學(xué)對(duì)照品的問(wèn)題，對(duì)中藥現(xiàn)代化的作用 是顯而易見(jiàn)的，具有重大的實(shí)際意義和學(xué)術(shù)價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種高純度水黃皮素的制備方法。
[0009] 本發(fā)明是從豆科植物干豆花/7OrtZia 的根中經(jīng)提取、分離、精 制、純化而制得的水黃皮素，其化學(xué)名、分子式、結(jié)構(gòu)式如下： 中文名：水黃皮素 化學(xué)名：3-甲氧基-2-苯基-4H-呋喃[2, 3-Η]-1-苯并呋喃-4-酮（3-methoxy-2-phe nyl_4H-furo[2, 3-H]-1-benzopyran-4-one) 英文名：Karanjin 分子式：C18 H12 O4 結(jié)構(gòu)式如下：
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 本發(fā)明所述的高純度水黃皮素的制備方法，具體包括如下步驟： 1) 干豆花的干燥根用乙醇回流提取，提取液濾過(guò)，合并濾液，回收乙醇，得浸膏； 2) 浸膏再經(jīng)石油醚萃取，靜置，合并石油醚層，濃縮得石油醚萃取物； 3) 石油醚萃取物經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚-乙酸乙酯-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，收集含水黃 皮素的流分，所述的石油醚-乙酸乙酯-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫條件為：〇~A分鐘，洗脫系統(tǒng) 為石油醚；B~C分鐘，洗脫系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-丙酮，比例為10:1:2~6:4:1 ;所述 A為10~25,所述B為11~26,所述C為50~70 ; 4) 流分用TLC檢測(cè)合并，濃縮，重結(jié)晶，即得純度為重量含量80~90 %的水黃皮素粗 結(jié)晶； 5) 將水黃皮素粗結(jié)晶用制備高效液相色譜法分離純化，收集水黃皮素組分； 6) 對(duì)所收集的每一份洗脫液利用HPLC檢測(cè)，合并保留時(shí)間相同而且純度在90%-98%之 間和純度大于98%以上的水黃皮素，減壓濃縮，得到純度90%-98%之間以及大于98%以上的 水黃皮素。
[0010] 所述步驟1)中乙醇的加入量為藥材重量的5-10倍，乙醇濃度為50-90%，回流提取 次數(shù)為2-8次。
[0011] 所述步驟5)制備高效液相色譜的色譜柱為C-18柱，甲醇-水為流動(dòng)相洗脫，流速 為5~10 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為304nm，柱溫為25-35°C。
[0012] 所述步驟4) TLC檢測(cè)方法為：薄層板：硅膠G ;3種展開(kāi)劑系統(tǒng)：系統(tǒng)（1)石油 釀-丙酮重量比例7:3,系統(tǒng)（2)二氯甲燒-丙酮重量比例9. 8:0. 2,系統(tǒng)（3)石油釀-乙 酸乙醋-丙酮重量比例8:1:1 ;點(diǎn)樣：用甲醇制lmg/mL的溶液，在同一硅膠G板上，按不同 的點(diǎn)樣量梯度點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量分別為20 ug、40 ug、60 ug、