一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及木蝴蝶提取、分離純化黃酮苷技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從木蝴蝶中提取、 分離純化2種黃酮苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 木蝴蝶為紫葳科植物木蝴蝶Oroxylum indicum(L.) Vent.的成熟種子，味苦、甘， 性涼，入肺、肝、胃經(jīng)，有清肺利咽、止咳、舒肝和胃、止痛及清熱的作用。臨床上用于治療以 咳嗽為主癥的上呼吸道感染、急性支氣管炎、咽炎、肺炎、百日咳及聲帶疾患。藥理研宄表 明，黃酮為木蝴蝶的主要活性成分，也是木蝴蝶及其相關(guān)制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。據(jù)文獻(xiàn) 報(bào)道，分離純化木蝴蝶種黃酮苷的方法主要有反復(fù)硅膠柱層析法及高速逆流色譜法，硅膠 柱層析法的操作過程繁瑣，回收率較低，經(jīng)常使用氯仿、苯等毒性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑；在高速 逆流色譜法中溶劑系統(tǒng)的選擇比較困難，缺乏理論指導(dǎo)。因此，建立一種高效快速的提取、 分離純化木蝴蝶中黃酮苷的方法對(duì)于深化木蝴蝶的藥理研宄及完善質(zhì)量控制體系等具有 重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，高效、 快速、簡(jiǎn)便。
[0004] 本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的 方法，具體步驟如下：
[0005] (1)木蝴蝶中黃酮苷的提?。簩⒛竞幉姆鬯?，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，過濾，提 取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物，有機(jī)溶劑的用量是木蝴蝶藥材用量的6~20倍；
[0006] (2)木蝴蝶中黃酮苷的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對(duì)步驟⑴中粗提物 的組成進(jìn)行分離分析，流動(dòng)相為甲醇-水，甲醇與水的體積比45:55,流速為1.0 mL/min ;
[0007] (3)木蝴蝶中黃酮苷的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對(duì)步驟1中得到的 粗提物中的成分進(jìn)行分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水，甲醇與水的體積比50:50,流速為20~ 30mL/min ;根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃縮除去溶劑；
[0008] (4)化合物的純度檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個(gè)目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇 溶解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件見步驟（2)，2種化合物的純度都達(dá) 到了 98%以上，經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷和黃芩 素-7-0-匍萄糖苷。
[0009] 其進(jìn)一步是：步驟（2)分析型高效液相色譜儀中的色譜柱采用分析型C18柱，檢測(cè) 波長(zhǎng)為220nm，柱溫為室溫。
[0010] 步驟（3)中半制備型高效液相色譜儀中的色譜柱采用半制備型C18柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220nm，柱溫為室溫。
[0011] 步驟（1)提取方法為冷浸、超聲或加熱回流。。
[0012] 步驟（1)有機(jī)溶劑為甲醇或水或50 %乙醇或70 %乙醇或95 %乙醇。
[0013] 步驟⑴提取次數(shù)為2-5次；提取時(shí)間為1-3小時(shí)。
[0014] 步驟（1)提取次數(shù)為3次；提取時(shí)間為2小時(shí)。
[0015] 步驟（2)中分離分析用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式為40%甲醇-水等度 洗脫或45 %甲醇-水等度洗脫或50 %甲醇-水等度洗脫。
[0016] 步驟（3)分離純化用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫或 45%甲醇-水等度洗脫或50%甲醇-水等度洗脫或55%甲醇-水等度洗脫。
[0017] 本發(fā)明的有益效果是：高效、快速從木蝴蝶中提取黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷和黃 芩素-7-0-葡萄糖苷，2種化合物的純度都達(dá)到了 98%以上；工藝過程綠色環(huán)保，對(duì)環(huán)境無 嚴(yán)重危害，綜合成本低。
【附圖說明】
[0018] 圖1是木蝴蝶粗提物的分析型高效液相色譜圖；
[0019] 圖2是木蝴蝶粗提物的半制備型高效液相色譜圖；
[0020]圖3是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
[0021] 圖4是黃芩素-7-0-葡萄糖苷的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實(shí) 施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場(chǎng)獲得。所用試劑均購自天津市化學(xué)試劑三廠，所用水為 去離子水。
[0023] 從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其步驟為：
[0024] (1)木蝴蝶中黃酮苷的提?。簩⒛竞幉姆鬯?，用15倍量70%乙醇加熱回流提 取3次，每次2h，過濾，將提取液合并，減壓濃縮得粗提物。
[0025] (2)木蝴蝶中黃酮苷的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對(duì)粗提物的組成進(jìn)行 分離分析，色譜柱為分析型C 18柱（250X4. 6mm I. D.，5 ym)，流動(dòng)相為甲醇-水（45 :55, V/ V);流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫為室溫。
[0026] (3)木蝴蝶中黃酮苷的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對(duì)粗提物中的成分 進(jìn)行分離純化，色譜柱為半制備型C 18柱（250 X 25. 4mm I.D.，10 μ m)，流動(dòng)相為甲醇-水 (50 :50，V/V)，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃 縮除去溶劑。
[0027] (4)化合物的純度檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個(gè)目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶 解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的 純度都達(dá)到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷 和黃零素-7-0-匍萄糖苷。
[0028] 發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇作流動(dòng)相，采用不同的洗脫方式，控制甲醇-水 洗脫液的流速為20-30mL/min (優(yōu)選25mL/min)，優(yōu)選出了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有 關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
[0029] 表一木蝴蝶粗提物的半制備型高效液相色譜分離條件
[0030]
[0031] 在實(shí)施例1 ￥，洗脫液中甲醇的濃^較高，洗脫時(shí)間較短，2 ^目標(biāo)化合物與其附 近的雜質(zhì)組分之間的分離效果均不夠理想，所得化合物的純度較低。實(shí)施例2中，洗脫液中 甲醇的濃度適中，各成分之間分離良好，分離時(shí)間也較為適宜。實(shí)施例3中，洗脫液中甲醇 的濃度較低，2種目標(biāo)化合物與其附近的雜質(zhì)組分之間的分離情況良好，但分離時(shí)間太長(zhǎng)。 實(shí)施例4采用甲醇-水梯度洗脫，也可以在合適的時(shí)間內(nèi)獲得良好的分離效果，但由于洗脫 液的濃度不斷發(fā)生變化導(dǎo)致難以實(shí)現(xiàn)回收再利用。
[0032] 圖1是木蝴蝶粗提物的分析型高效液相色譜圖。圖2是當(dāng)選用實(shí)施例2體系時(shí) 木蝴蝶粗提物的半制備型高效液相色譜圖，由圖可見，各成分分離良好，分離時(shí)間也較為適 宜。根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集各峰組分，回收溶劑后，即可得到相應(yīng)的高純度化合物。經(jīng)高效液 相色譜峰面積歸一化法分析測(cè)試，純度高于98%，這一點(diǎn)可從圖3至圖4中看出。圖1-4 中，I :黃零素_7_〇_雙匍萄糖苷；Π :黃零素-7-0-匍萄糖苷。
[0033] 經(jīng)核磁共振波譜分析證實(shí)所提取純化得到的2個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0034]
[0035] 2個(gè)化合物的鑒定結(jié)果如下：
[0036] 黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷,H-NMRGOOMHzJMSO-de): Sppm:12.6(lH，s，5-OH)， 8· 6 (1H，s，6-OH)，8· 0 ~8· 3 (2H，d，2'，6' -Η)，7· 5 ~7.8(3H，m，3'，4'，5'-H)，7.2(lH，s，8-Η), 7. I (1Η, s, 3-Η), 5. I (1Η, d, J = 6. 4Hz, anomeric H of inner glucose), 4. 2 (1Η, d, J =6.3Hz，anomeric H of terminal glucose) .13C-MVtR(IOOMHzjD