一種用AMPKγ基因評(píng)價(jià)昆蟲發(fā)育速率的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)、昆蟲分子生態(tài)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種用ΑΜΡΚγ基因評(píng)價(jià)昆蟲發(fā) 育速率的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 適溫區(qū)內(nèi)溫度與昆蟲生長(zhǎng)發(fā)育在生態(tài)學(xué)上常用發(fā)育歷期或發(fā)育速率作為生長(zhǎng)發(fā) 育速率的指標(biāo)。發(fā)育歷期是指完成一定發(fā)育階段（一個(gè)世代、一個(gè)蟲期或一個(gè)齡期）所經(jīng) 歷的天數(shù)，發(fā)育速率則指一天所完成的發(fā)育速度，為發(fā)育歷期的倒數(shù)即，V= 1/Ν式中：V為 發(fā)育速率N為發(fā)育歷期。
[0003] 溫度與生物生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)系，比較集中地反映在溫度對(duì)植物和變溫動(dòng)物（特別是 昆蟲）發(fā)育速率的影響上，昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育速率是評(píng)價(jià)害蟲生長(zhǎng)發(fā)育的重要指標(biāo)，昆蟲作 為變溫動(dòng)物，對(duì)溫度變化更為敏感。目前昆蟲學(xué)領(lǐng)域集中于研宄溫度變化對(duì)昆蟲生長(zhǎng)、發(fā) 育的影響。目前已構(gòu)建了多個(gè)描述溫度與昆蟲增長(zhǎng)速率的關(guān)系模型，用于解釋溫度對(duì)昆蟲 發(fā)育速率的影響。在一定條件下的昆蟲發(fā)育速率反映昆蟲對(duì)所處環(huán)境條件（溫度，棲境） 的適合度，也是害蟲棲息地風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)、害蟲監(jiān)測(cè)預(yù)警和害蟲宜生區(qū)劃分的重要依據(jù)。
[0004] 昆蟲生活的生境往往具有物種偏好性，生境為昆蟲提供了食物、生態(tài)位和棲息環(huán) 境，良好的棲息地是昆蟲分布和繁盛的根本，因此，評(píng)價(jià)昆蟲在生境中的生長(zhǎng)發(fā)育速率和對(duì) 生境的適合度尤為重要。
[0005] 目前，昆蟲生長(zhǎng)發(fā)育速率大多數(shù)的評(píng)價(jià)主要集中在用昆蟲生態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)和指標(biāo)來評(píng) 價(jià)，評(píng)價(jià)內(nèi)容多，用時(shí)較長(zhǎng)，一般需要昆蟲種群的1-2代，耗時(shí)長(zhǎng)、所需人力物力多，費(fèi)用高， 因此，需要建立一種快速預(yù)測(cè)和判斷昆蟲發(fā)育的方法，突破對(duì)有效積溫的研宄的局限性。
[0006] ΑΜΡΚγ即AMP依賴的蛋白激酶，是生物能量代謝調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子。它表達(dá)于各種 代謝相關(guān)的器官中，能被機(jī)體各種刺激激活，包括細(xì)胞壓力、運(yùn)動(dòng)和很多激素及能影響細(xì)胞 代謝的物質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是評(píng)價(jià)昆蟲的發(fā)育速率。
[0008] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供檢測(cè)ΑΜΡΚγ基因表達(dá)量的物質(zhì)在評(píng)價(jià)昆蟲 發(fā)育速率中的應(yīng)用。
[0009] 上述應(yīng)用中，所述檢測(cè)ΑΜΡΚγ基因表達(dá)量的物質(zhì)包含如下（1)-(6)所示的產(chǎn)品中 的至少一種：
[0010] (1)成套DNA分子，由SEQ ID No. 1所示的DNA分子和SEQ ID No. 2所示的DNA分 子組成；
[0011] ⑵成套DNA分子組合物，由⑴所述的成套DNA分子和擴(kuò)增所述昆蟲的持家基因 的成套DNA分子組成；
[0012] (3)含有⑴所述的成套DNA分子的試劑盒；
[0013] (4)含有⑵所述的成套DNA分子組合物的試劑盒；
[0014] (5) AMPK γ ；
[0015] (6)AMPKγ 基因。
[0016] 所述SEQ ID No. 1所示的DNA分子和所述SEQ ID No. 2所示的DNA分子可以混合 包裝也可以獨(dú)立包裝，將該成套DNA分子稱為成套DNA分子B。
[0017] 所述成套DNA分子用于擴(kuò)增所述昆蟲的AMPK γ基因或其部分片段。
[0018] 所述（1)所述的成套DNA分子（成套DNA分子Β)和所述擴(kuò)增所述昆蟲的持家基 因的成套DNA分子獨(dú)立包裝。
[0019] 上述應(yīng)用中，所述擴(kuò)增所述昆蟲的持家基因的成套DNA分子為如下A所示的成套 DNA分子：
[0020] Α、由SEQ ID No. 5所示的DNA分子和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的成套 DNA分子。
[0021] 所述SEQ ID No. 5所示的DNA分子和所述SEQ ID No. 6所示的DNA分子可以混合 包裝也可以獨(dú)立包裝。
[0022] 所述AMPK的氨基酸序列如SEQ ID No. 4所示。所述AMPK γ基因的核苷酸序列如 SEQ ID No. 3所示。AMPK γ的全稱為腺苷酸活化蛋白激酶。
[0023] 所述昆蟲可以為昆蟲個(gè)體或昆蟲群體。
[0024] 所述昆蟲可以為亞洲小車蝗。
[0025] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供評(píng)價(jià)昆蟲發(fā)育速率的方法，包括如下步驟： 檢測(cè)名稱為A生境和B生境的兩種生境中的同一種待測(cè)昆蟲的AMPK γ基因表達(dá)量，如果A 生境的所述待測(cè)昆蟲的AMPK γ基因表達(dá)量高于B生境的所述待測(cè)昆蟲的AMPK γ基因表達(dá) 量，則所述待測(cè)昆蟲在A生境中的發(fā)育速率低于或候選低于所述待測(cè)昆蟲在B生境中的發(fā) 育速率。
[0026] 所述待測(cè)昆蟲的AMPKγ基因表達(dá)量的檢測(cè)方法包括如下步驟：以所述待測(cè)昆蟲 的cDNA為模板，以SEQ ID No. 1所示的DNA分子和SEQ ID No. 2所示的DNA分子為引物， 進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，得到所述待測(cè)昆蟲的AMPK γ基因表達(dá)量。
[0027] 所述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的內(nèi)參基因具體為延伸因子基因 EF基因。所述實(shí)時(shí)熒光 定量PCR中，用SEQ ID No. 5所示的DNA分子和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的引物 對(duì)擴(kuò)增所述延伸因子基因 EF基因。
[0028] 所述AMPK的氨基酸序列如SEQ ID No. 4所示。所述AMPK γ基因的核苷酸序列如 SEQ ID No. 3 所示。
[0029] 所述昆蟲可以為昆蟲個(gè)體或昆蟲群體。
[0030] 所述昆蟲可以為亞洲小車蝗。
[0031] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供成套DNA分子，由SEQ ID No. 1所示的DNA 分子和SEQ ID No. 2所示的DNA分子組成；
[0032] 或，
[0033] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供成套DNA分子組合物，由SEQ ID No. 1所示 的DNA分子和SEQ ID No. 2所示的DNA分子組成的成套DNA分子（成套DNA分子B)和擴(kuò) 增昆蟲的持家基因的成套DNA分子組成。
[0034] 所述SEQ ID No. 1所示的DNA分子和所述SEQ ID No. 2所示的DNA分子可以混合 包裝也可以獨(dú)立包裝，將該成套DNA分子稱為成套DNA分子B。
[0035] 所述擴(kuò)增昆蟲的持家基因的成套DNA分子具體為如下A所示的成套DNA分子：
[0036] A、由SEQ ID No. 5所示的DNA分子和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的成套 DNA分子。
[0037] 所述成套DNA分子B和所述擴(kuò)增昆蟲的持家基因的成套DNA分子獨(dú)立包裝。
[0038] 所述SEQ ID No. 5所示的DNA分子和所述SEQ ID No. 6所示的DNA分子可以混合 包裝也可以獨(dú)立包裝。
[0039] 所述昆蟲可以為昆蟲個(gè)體或昆蟲群體。
[0040] 所述昆蟲可以為亞洲小車蝗。
[0041] 上述成套DNA分子或上述成套DNA分子組合物可用于評(píng)價(jià)昆蟲的發(fā)育速率。
[0042] 所述昆蟲可以為昆蟲個(gè)體或昆蟲群體。
[0043] 所述昆蟲可以為亞洲小車蝗。
[0044] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供評(píng)價(jià)昆蟲發(fā)育速率的試劑盒，該試劑盒包 含所述的成套DNA分子；
[0045] 或，
[0046] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供評(píng)價(jià)昆蟲發(fā)育速率的試劑盒，該試劑盒包 含所述的成套DNA分子組合物。
[0047] 上述任一所述的試劑盒還包含記載在可讀載體上的使用說明，說明中記載的內(nèi)容 為上述任一所述的方法。
[0048] 所述昆蟲可以為昆蟲個(gè)體或昆蟲群體。
[0049] 所述昆蟲可以為亞洲小車蝗。
[0050] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明還提供上述任一所述的方法或或檢測(cè)ΑΜΡΚγ基 因表達(dá)量的物質(zhì)在如下A-G任一所示中的應(yīng)用：
[0051] Α、昆蟲的棲息地風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)；
[0052] Β、昆蟲監(jiān)測(cè)預(yù)警；
[0053] C、昆蟲宜生區(qū)劃分；
[0054] D、評(píng)價(jià)昆蟲生活環(huán)境的惡化情況；
[0055] Ε、鑒定或輔助鑒定昆蟲對(duì)環(huán)境的適應(yīng)程度；
[0056] F、鑒定或輔助鑒定昆蟲在生境中的發(fā)育速率；
[0057] G、鑒定或輔助鑒定昆蟲在生境中的抗逆性。
[0058] 所述昆蟲可以為昆蟲個(gè)體或昆蟲群體。
[0059] 所述昆蟲具體為亞洲小車蝗。
[0060] 所述檢測(cè)ΑΜΡΚγ基因表達(dá)量的物質(zhì)具體包含如下（1)-(6)所示的產(chǎn)品中的至少 一種：
[0061] (1)成套DNA分子，由SEQ ID No. 1所示的DNA分子和SEQ ID No. 2所示的DNA分 子組成；
[0062] (2)成套DNA分子組合物，由⑴所述的成套DNA分子和擴(kuò)增所述昆蟲的持家基因 的成套DNA分子組成；
[0063] (3)含有⑴所述的成套DNA分子的試劑盒；
[0064] (4)含有⑵所述的成套DNA分子組合物的試劑盒；
[0065] (5) AMPK γ ；
[0066] (6)AMPKγ 基因。
[0067] 所述SEQ ID No. 1所示的DNA分子和所述SEQ ID No. 2所示的DNA分子可以混合 包裝也可以獨(dú)立包裝，將該成套DNA分子稱為成套DNA分子B。
[0068] 所述成套DNA分子用于擴(kuò)增所述昆蟲的AMPK γ基因或其部分片段。
[0069] 所述（1)所述的成套DNA分子（成套DNA分子Β)和所述擴(kuò)增所述昆蟲的持家基 因的成套DNA分子獨(dú)立包裝。
[0070] 所述擴(kuò)增所述昆蟲的持家基因的成套DNA分子具體為如下A所示的成套DNA分 子：
[0071] Α、由SEQ ID No. 5所示的DNA分子和SEQ ID No. 6所示的DNA分子組成的成套 DNA分子。
[0072] 所述SEQ ID No. 5所示的DNA分子和所述SEQ ID No. 6所示的DNA分子可以混合 包裝也可以獨(dú)立包裝。
[0073] 所述AMPK的氨基酸序列如SEQ ID No. 4所示。所述AMPK γ基因的核苷酸序列如 SEQ ID No. 3 所示。
[0074] 上述任一所述的發(fā)育速率是指昆蟲個(gè)體在一定生境環(huán)境中，能生存并傳遞其基因 于下代的能力，發(fā)育速率可以通過待測(cè)昆蟲的發(fā)育歷期來體現(xiàn)。
[0075] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)證明，可以通過檢測(cè)ΑΜΡΚγ基因表達(dá)量來評(píng)價(jià)昆蟲發(fā)育速率，特別 是不同生境中的亞洲小車蝗的發(fā)育速率。
[0076] 采用本發(fā)明提供的引物對(duì)及方法評(píng)價(jià)昆蟲發(fā)育速率僅需2-3天，而用傳統(tǒng)的生物 學(xué)方法需要30-60天左右。本發(fā)明提供的檢測(cè)方法涉及的材料來源廣，易購買，操作簡(jiǎn)單， 省時(shí)，省力，適合于在昆蟲商品檢驗(yàn)檢測(cè)中推廣應(yīng)用。
【附圖說明】
[0077] 圖1為亞洲小車蝗EF內(nèi)參擴(kuò)增曲線。
[0078] 圖2為亞洲小車蝗EF內(nèi)參融解曲線。
[0079] 圖3為亞洲小車蝗ΑΜΡΚγ基因擴(kuò)增曲線。
[0080] 圖4為亞洲小車蝗AMPK γ基因融解曲線。
[0081] 圖5為亞洲小車蝗在不同生境中的發(fā)育速率。
[0082] 圖6為ΑΜΡΚγ基因相對(duì)表達(dá)量與發(fā)育速率之間回歸直線（Ρ〈0. 05)。
【具體實(shí)施方式】
[0083] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0084] 下述實(shí)施例中所用的材料