一種融合多肽及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種融合多肽及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤是危害人類健康的頭號(hào)殺手。惡性腫瘤細(xì)胞的快速生長(zhǎng)和向周圍組織器官的 侵潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是腫瘤導(dǎo)致病人死亡的主要原因。抑癌基因所編碼的蛋白具有抑制腫瘤生 長(zhǎng)和抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的功能，成為抗腫瘤藥物的候選藥物。多肽藥物由于分子小、易合 成、構(gòu)效關(guān)系研宄較容易、易被改造以及針對(duì)性強(qiáng)和療效明顯等優(yōu)勢(shì)，得到了廣泛的關(guān)注。 近年來(lái)，隨著生物技術(shù)及多肽合成技術(shù)的不斷改進(jìn)，多肽藥物的純度高、毒副作用低、幾乎 沒(méi)有免疫原性且合成成本較低，產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)優(yōu)勢(shì)明顯，故多肽藥物的適應(yīng)癥廣泛且療效顯 著，有廣泛的應(yīng)用市場(chǎng)。目前，世界范圍內(nèi)已有超過(guò)60多種多肽藥物被批準(zhǔn)上市，另外有 大量的多肽藥物已進(jìn)入或是完成臨床研宄。多肽藥物市場(chǎng)發(fā)展迅速，年增長(zhǎng)率達(dá)20%，為 制藥企業(yè)帶來(lái)了豐厚利潤(rùn)，這預(yù)示著未來(lái)治療類多肽藥物的市場(chǎng)供求會(huì)有巨大的提升。
[0003] TIPE2 (tumor necrosis factor-a induced protein 8 like 2)是作為免疫 負(fù)調(diào)控分子首先在小鼠中被發(fā)現(xiàn)的，屬于TIPE家族（Sun, H. et al.TIPE2, a negative regulator of innate and adaptive immunity that maintains immune homeostasis. Cell 133, 415-426, doi : 10. 1016/j. cell. 2008. 03. 026 (2008))。然而，我們?cè)谘绣嘲l(fā) 現(xiàn)人TIPE2的表達(dá)譜與小鼠的TIPE2不同，人TIPE2除表達(dá)于免疫細(xì)胞外，也表達(dá)于肝 細(xì)胞等非免疫細(xì)胞并且人TIPE2在肝細(xì)胞肝癌中表達(dá)下調(diào)或缺失（Zhang，Let al. The unique expression profile of human TIPE2suggests new functions beyond its role in immune regulation. Molecular immunology 48, 1209-1215, doi:10.1016/ j. molimm. 2011. 03. 001 (2011))。臨床資料分析發(fā)現(xiàn)TIPE2在人肝癌組織中表達(dá)降低或缺 失，并與肝細(xì)胞肝癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證明TIPE2在體內(nèi)外能明顯抑制肝細(xì)胞 肝癌的生長(zhǎng)和侵襲轉(zhuǎn)移；從機(jī)制上，我們發(fā)現(xiàn)TIPE2可選擇性結(jié)合并抑制Racl通路抑制 細(xì)胞骨架的聚合、MMP9、uPA和VEGF的表達(dá)，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的迀移，侵襲和血管形成能 力，即TIPE2通過(guò)抑制Racl通路發(fā)揮抗腫瘤作用（Cao，X.et al. Human tumor necrosis factor(TNF)-alpha-induced protein 8-like 2 suppresses hepatocellular carcinoma metastasis through inhibiting RacL Molecular cancer 12, 149,doi:10. 1186/1476-45 98-12-149(2013))〇
[0004] TIPE2的抗腫瘤作用不僅限于肝癌，在肺癌、膽管癌和中也發(fā)揮同樣的抗腫瘤 效應(yīng)。由于TIPE2主要是通過(guò)抑制Racl活性發(fā)揮抗腫瘤作用，而越來(lái)越多的證據(jù)表明， 多種人類腫瘤中Racl表達(dá)升高或者活性增強(qiáng)，除肝癌、肺癌和膽管癌以外，尚包括胃癌 (ffu, Y. J. et al.Expression and significance of RacI,Pakland Rocklin gastric carcinoma. Asia-Pacific journal of clinical oncology 10,e33_39,doi:10. 1111/ ajco. 12052 (2014))、結(jié)腸癌（Jiang, Q.H., Wang, A. X.& Chen, Y. Radixin enhances colon cancer cell invasion by increasing MMP_7production via Racl-ERK pathway. TheScientificWorldJournal 2014, 340271，doi:10. 1155/2014/340271 (2014))、胰 腺癌(Yan, Y. et al.Inhibition of RACl GTPase sensitizes pancreatic cancer cells to gamma-irradiation. Oncotarget 5, 10251-10270(2014))、乳腺癌（Goka，E. T. &Lippman, Μ. E. Loss of the E3 ubiquitin ligase HACEl results in enhanced Racl signaling contributing to breast cancer progression. Oncogene, doi:10. 1038/ one. 2014. 468 (2015))及淋巴瘤（Zhang，B.，Zhang，Y.& Shacter，E. Raclinhibits apoptosis in human lymphoma cells by stimulating Bad phosphorylation on Ser-75.Molecular and cellular biology 24,6205-6214，doi:10.1128/ mcb. 24. 14. 6205-6214. 2004(2004))等，故預(yù)示著TIPE2也可以在這些腫瘤中發(fā)揮抗腫瘤 效應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的是提供一種融合多肽，其能選擇性結(jié)合并抑制 細(xì)胞內(nèi)Racl活性，從而具有抗腫瘤的活性。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供該融合多肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0008] -種融合多肽，是由多肽I和多肽II構(gòu)成的融合多肽，其中，多肽I的序列如SEQ ID NO. 1所示，其作用為：跨膜傳遞；多肽II為選自TIPE2(tumor necrosis factor-a induced protein 8 like 2) N 末端（TNP)(序列如 SEQ ID NO. 9 所;^rO 的長(zhǎng)度為 10 ~30 個(gè)氨基酸的序列，其作用為：在細(xì)胞內(nèi)可選擇性結(jié)合并抑制細(xì)胞內(nèi)Racl活性。
[0009] SEQ ID NO. 1 ：
[0010] 三字符縮寫：Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg ;
[0011] 單字符縮寫：grrrrrrrrr。
[0012] 優(yōu)選的，所述多肽II的序列選自如SEQ ID NO. 2~11所示的序列之一。
[0013] SEQ ID NO. 2 ：
[0014] 三字符縮寫：Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0015] 單字符縮寫：kkl I Skmagrcj
[0016] SEQ ID NO. 3 ：
[0017] 三字符縮寫：Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0018] 單字符縮寫：ekkl Iskmagrcj
[0019] SEQ ID NO. 4 ：
[0020] 三字符縮寫：Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0021] 單字符縮寫：aekkl lskmagr D
[0022] SEQ ID NO. 5 ：
[0023] 三字符縮寫：Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0024] 單字符縮寫：qaekkl I skmagr D
[0025] SEQ ID NO. 6 ：
[0026] 三字符縮寫：Ieu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0027] 單字符縮寫：lqaekkl Iskmagr。
[0028] SEQ ID NO. 7 ：
[0029] 三字符縮寫：Ala-Ieu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-A rg ；
[0030] 單字符縮寫：alqaekkl Iskmagr。
[0031] SEQ ID NO. 8 ：
[0032] 三字符縮寫：Leu-Ala-Ieu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gl y-Arg ；
[0033] 單字符縮寫：lalqaekkllsk magr。
[0034] SEQ ID NO. 9 ：
[0035] 三字符縮寫：Met-Glu-Ser-Phe-Ser-Ser-Lys-Ser-Leu-Ala-Leu-Gln-Ala-Glu-Ly s-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg-Ser-Val-Ala-His-Leu-Phe ；
[0036] 單字符縮寫：mesfsskslalqaekkllskmagrsvahlf。
[0037] SEQ ID NO. 10 ：
[0038] 三字符縮寫：Met-Glu-Ser-Phe-Ser-Ser-Lys-Ser-Leu-Ala-Leu-Gln-Ala-Glu-Ly s_Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gly-Arg ;
[0039] 單字符縮寫：mesfssksla lqaekkllsk magr。
[0040] SEQ ID NO. 11 ：
[0041] 三字符縮寫：Leu-Ala-Leu-Gln-Ala-Glu-Lys-Lys-Leu-Leu-Ser-Lys-Met-Ala-Gl y-Arg-Ser-Val-Ala-His-Leu-Phe ；
[0042] 單字符縮寫：lalqaekkllsk magrsvahlf。
[0043] 進(jìn)一步優(yōu)選的，所述多肽II的序列選自如SEQ ID NO. 2~11所示的序列之一。
[0044] 更優(yōu)選的，所述多肽II的序列選自如SEQ ID NO. 2~8所示的序列之一。
[0045] 進(jìn)一步地，所述多肽I和多肽II直接相互偶聯(lián)。
[0046] 進(jìn)一步地，所述多肽II具有線性或環(huán)狀的結(jié)構(gòu)。
[0047] 所述融合多肽，制備時(shí)，常規(guī)方法通過(guò)多肽合成儀自動(dòng)合成即可。
[0048] 本發(fā)明還提供了上述融合多肽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0049] 所述腫瘤為包括原發(fā)的或轉(zhuǎn)移的肺癌、肝癌、膽管癌等。
[0050] 本發(fā)明還提供了一種包含上述融合多肽的藥物組合物，該藥物組合物除含有上述 融合多肽外，還進(jìn)一步地包括藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或佐劑。
[0051] 上述融合多肽、藥物組合物在制備用于治療腫瘤疾病的藥物中的應(yīng)用。上述融合 多肽注射到腫瘤局部或通過(guò)系統(tǒng)給藥到達(dá)腫瘤部位后，可發(fā)揮抗腫瘤