假淺灰鏈霉菌及其微生物菌劑和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種用于防治番茄苗期瘁倒病的假淺灰鏈霉菌和含有該假淺灰鏈霉菌的微生物菌劑，及其在防治番茄苗期瘁倒病上的應(yīng)用，屬于農(nóng)業(yè)微生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]黃猝倒病是由致病性腐霉菌屬(Pythium spp.)引起的真菌病害，是世界著名的毀滅性病害，可為害茄子、番茄、辣椒、黃瓜、甘籃、芹菜、洋蔥、菜豆；萵苣等多種蔬菜幼苗，是中國(guó)保護(hù)地春秋季育苗中常見(jiàn)病害，一般苗圃發(fā)病率為20%?50%，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)80%以上，目前在基質(zhì)育苗中也較為突出，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)猝倒病的防治仍以化學(xué)防治為主，但其嚴(yán)重污染環(huán)境，而且隨著藥劑使用時(shí)間的延長(zhǎng)，還誘導(dǎo)病原菌的抗病性，因此開(kāi)發(fā)綠色的瘁倒病防控技術(shù)受到廣泛關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明第一目的在于提供一種用于防治番茄苗期瘁倒病的假淺灰鏈霉菌及其微生物菌劑。
[0004]本發(fā)明第二目的在于提供上述微生物菌劑的制備方法。
[0005]本發(fā)明第三目的在于提供上述假淺灰鏈霉菌菌株及其微生物菌劑在防治番茄苗期瘁倒病上的應(yīng)用。
[0006]上述假淺灰鏈霉菌(Streptomycespseudogriseolus) nmg4 菌株，于 2015 年 02月04日保藏在位于北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)的中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào):CGMCC N0.10520。
[0007]菌株生理特征:上述假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4在馬鈴薯瓊脂固體(PDA)培養(yǎng)基上，在28°C培養(yǎng)4天，菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)9cm培養(yǎng)皿，菌落平坦，表面質(zhì)地呈粉粒狀，表面暗褐色，菌落反面呈橙黃色。分生孢子頭幼齡時(shí)多呈輻射形；老熟時(shí)呈疏松或裂成疏松的圓粒狀結(jié)構(gòu)；分生孢子頂囊呈球形或近球形，淡褐色；分生孢子球形或近球形。
[0008]菌株的鑒定:通過(guò)提取上述假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus)nmg4菌株的基因組，并用18S通用引物對(duì)該菌株進(jìn)行測(cè)定，并測(cè)得其核苷酸和氨基酸序列表，和從18S rDNA基因序列測(cè)定結(jié)果來(lái)看上述菌株可以歸為假淺灰鏈霉菌。
[0009]利用上述假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4制備的微生物菌劑，所述微生物菌劑為或固體菌劑，由假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus)nmg4和及其培養(yǎng)物組成；其活性成分為假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus)nmg4菌體和它的胞外代謝產(chǎn)物。
[0010]上述微生物菌劑，其內(nèi)含有的假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus)nmg4 的活菌數(shù)大于 1.0X 18 cfu/g 或等于 1.0 X 18 cfu/ml。
[0011]一種上述微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟: (1)菌株活化培養(yǎng):將分離的假淺灰鏈霉菌(Streptomycespseudogr i seolus ) nmg4菌株斜面
保藏物接種到PDA斜面，實(shí)施斜面活化培養(yǎng)；
(2)液體培養(yǎng)基擴(kuò)培，獲取種子液；
(3)將擴(kuò)培后的對(duì)數(shù)期種子液，按照2%的接種量接種至共培養(yǎng)基質(zhì)中，充分?jǐn)嚢杌靹蚝?，?8°C培養(yǎng)5-7d，培養(yǎng)結(jié)束后用于育苗試驗(yàn)。
[0012]上述共培養(yǎng)基質(zhì)，選擇半發(fā)酵腐熟的酒糟和菇渣，并加入10%的麩皮和1%的酵母膏，調(diào)節(jié)含水率至40%-50%。
[0013]上述假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4在番前苗期瘁倒病的應(yīng)用。
[0014]上述微生物菌劑在防治番茄苗期瘁倒病上的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明提供的假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4及其微生物菌劑，具有以下優(yōu)點(diǎn):拮抗作用強(qiáng)，能減少番茄苗期瘁倒病發(fā)病率，番茄苗的株高和莖粗有所增加，且能促進(jìn)番茄生長(zhǎng)；半發(fā)酵腐熟的菇渣與酒糟基質(zhì)相比，拮抗菌共培養(yǎng)菇渣制備的基質(zhì)對(duì)瘁倒病的防控率更優(yōu)，本發(fā)明所提供的微生物菌劑對(duì)人、畜安全，不會(huì)污染水和土壤，對(duì)其他農(nóng)作物也沒(méi)有危害。
[0016]說(shuō)明書(shū)附圖
圖1假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4對(duì)葫澄基質(zhì)番前育苗瘁倒病發(fā)病率的影響。(圖中內(nèi)4代表nmg4)。
[0017]圖2假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4接種葫澄基質(zhì)對(duì)番前幼苗株高的影響。(圖中內(nèi)4代表nmg4)。
[0018]圖3假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4接種葫澄基質(zhì)對(duì)番前幼苗莖粗的影響。(圖中內(nèi)4代表nmg4)。
[0019]圖4假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4酒糟基質(zhì)對(duì)番前育苗瘁倒病發(fā)病率的影響。(圖中內(nèi)4代表nmg4)。
[0020]圖5假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4酒糟基質(zhì)對(duì)番前幼苗株高的影響。(圖中內(nèi)4代表nmg4)0
[0021]圖6假假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus)nmg4酒糟基質(zhì)對(duì)番前幼苗莖粗的影響。(圖中內(nèi)4代表nmg4)。
【具體實(shí)施方式】
[0022]蔬菜工廠化基質(zhì)育苗技術(shù)一直是蔬菜產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的方向，而均有生防功能的基質(zhì)[更是這一領(lǐng)域的研宄熱點(diǎn)。本研宄以實(shí)驗(yàn)室分離保藏的終極腐霉拮抗菌假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4作為措抗菌劑，通過(guò)與酒糟、葫澄等初步發(fā)酵后的生物質(zhì)固體廢棄物進(jìn)行共培養(yǎng)后作為育苗基質(zhì)，通過(guò)接種終極腐霉病原微生物考察拮抗功能基質(zhì)對(duì)育苗瘁倒病的影響，以期為克服或減輕番茄等苗期猝倒病害提供生防育苗基質(zhì)奠定基礎(chǔ)。
[0023]下面通過(guò)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體說(shuō)明。
[0024]實(shí)施例1。
[0025]菌劑的制備。
[0026]對(duì)所涉材料的說(shuō)明:供試番前品種為浙雜205 ；瘁倒病措抗菌株nmg4(Streptomyces pseudogriseolus)由本實(shí)驗(yàn)室分離保藏。猝倒病病原菌株終極腐霉{Phthium 應(yīng)，ACCC36075，下簡(jiǎn)稱(chēng)36075)購(gòu)于中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心。
[0027]假淺灰鏈霉菌(Streptomyces pseudogriseolus) nmg4采用高氏一號(hào)放線菌培養(yǎng)基，瘁倒病病原菌的培養(yǎng)采用PDA培養(yǎng)基。
[0028]基質(zhì)材料及共培養(yǎng)基質(zhì):常規(guī)基質(zhì)原料分別采用發(fā)酵腐熟的黃酒酒糟和金針菇栽培后菇渣；共培養(yǎng)基質(zhì)選擇半發(fā)酵腐熟的酒糟和菇渣，接種拮抗微生物前，先加入10%的麩皮和1%的酵母膏，調(diào)節(jié)含水率至40%-50%。
[0029]抗病功能基質(zhì)和致病菌劑制備方法:假淺灰鏈霉菌在斜面活化后，進(jìn)行液體培養(yǎng)基擴(kuò)培，將擴(kuò)培后的對(duì)數(shù)期種子液，按照2%的接種量接種至共培養(yǎng)基質(zhì)中，充分?jǐn)嚢杌靹蚝?，?8°C培養(yǎng)5-7d，培養(yǎng)結(jié)束后用于育苗試驗(yàn)。
[0030]瘁倒病病原菌在培養(yǎng)基斜面活化后，進(jìn)行液體培養(yǎng)基擴(kuò)培，培養(yǎng)基中加入玻璃珠，使菌絲體分散，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期后用于育苗基質(zhì)接種。
[0031]實(shí)施例2。
[0032]育苗對(duì)比試驗(yàn)。
[0033]選擇番茄種子