，具體為：
[0039] 將菌株T-5 (CGMCC NO. 8547，見實施例1)接種到PDA培養(yǎng)液中進(jìn)行液體發(fā)酵 生產(chǎn)，其發(fā)酵條件為：初始pH值范圍為7.0-7. 2,培養(yǎng)溫度為30 °C，溶氧：通氣量范圍 30% -100%，轉(zhuǎn)速170轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵中后期形成芽孢，發(fā)酵得到的發(fā)酵液中T-5的含菌或 芽孢量彡4. OX IO9個/ml。
[0040] 所用PDA培養(yǎng)液配置方法為（以配置IL培養(yǎng)基為例）：用200g 土豆削皮后切成 小塊放入到500mL水中，加熱煮沸30min，經(jīng)過濾后濾液中加入20g鹿糖，定容至1000mL，pH 值調(diào)至 7· 0_7· 4,115°C滅菌 30min。
[0041] 2)按體積比為4:6混合腐熟的豬糞堆肥和氨基酸有機(jī)肥，得到混合有機(jī)肥，具體 為：
[0042] 以腐熟的豬糞堆肥和氨基酸有機(jī)肥以體積比6:4混合制成。所用腐熟的豬糞堆 肥發(fā)芽指數(shù)為98%以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量多35%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為1. 5-2. 3%，含水 量為25-30%。本實施例所用氨基酸有機(jī)肥為江蘇新天地氨基酸肥料有限公司產(chǎn)品，登記 證號：蘇農(nóng)肥（2008)準(zhǔn)字0180號，肥料規(guī)格：N+P205+K20彡6%，有機(jī)質(zhì)彡30%，氨基酸
[0043] 3)將發(fā)酵液按按體積質(zhì)量比為30%接種到混合有機(jī)肥中進(jìn)行固體發(fā)酵，使得解 淀粉芽孢桿菌菌株T-5的有效活菌數(shù)含量為I. 0 X 108cfu/g (含）以上，在溫度不超過60°C 的條件下干燥至水的質(zhì)量百分含量低于30%，獲得含有解淀粉芽孢桿菌菌株T-5的微生物 有機(jī)肥，具體為：
[0044] 將步驟1)制備的發(fā)酵液按30% (V/W)的比例接種到步驟2)所述的混合有機(jī)肥中 進(jìn)行二次固體發(fā)酵，發(fā)酵溫度為30-50°C，發(fā)酵過程中每天翻堆1-2次，發(fā)酵周期5-7d，使菌 株T-5的菌含量達(dá)到I. 0 X IO8個/g以上（即有效活菌數(shù)含量為I. 0 X 10 8cfu/g以上），獲 得菌株T-5的固體菌劑，最后在溫度不超過60°C的條件下將微生物有機(jī)肥的含水量蒸發(fā)至 30%以下，獲得含有解淀粉芽孢桿菌菌株T-5的微生物有機(jī)肥。
[0045] 按照本實施例方法制備的微生物有機(jī)肥料，含有不低于LOX IO8個/g的上述 的生防菌株T-5的菌落形成單位（即含有解淀粉芽孢桿菌菌株T-5的有效活菌數(shù)含量 為1.0 X 108Cfu/g以上），全氮含量為30. 6mg/kg，有全磷含量為19. 2mg/kg，全鉀含量為 38.7mg/kg〇
[0046] 實施例3盆栽試驗
[0047] 供試土壤為番茄連作土，青枯病發(fā)病嚴(yán)重。番茄種子采用番茄青枯病敏感型的"江 蔬"，處理設(shè)置如下：
[0048] CK :對照，番茄連作土壤；Tl :番茄連作土壤+有機(jī)肥處理；T2 :番茄連作土壤+微 生物有機(jī)肥處理
[0049] 5kg連作土 /盆缽，每處理30盆，3棵苗/盆。Tl :每盆施用1 % (W/W)的有機(jī)肥 (50g，見實施例3中步驟2的混合有機(jī)肥），T2:每盆施用1% (W/W)的微生物有機(jī)肥（制 備方法見實施例3)，采用移苗前穴施，對照處理中補(bǔ)施與1% (W/W)有機(jī)肥營養(yǎng)成分相對的 N、P、K化學(xué)肥料，所有處理均為等養(yǎng)分。
[0050] 番茄品種為"江蔬"，種子表面消毒后，播種到營養(yǎng)缽中進(jìn)行育苗，長至4葉期 (25-28d)，移栽到5公斤的大盆缽中，在大盆缽生長至40d取樣計算生物量，考察促生效果。 生長至開花期，每周記錄發(fā)病情況，統(tǒng)計病情指數(shù)，移栽40d后采集各處理的植株及土壤樣 品迅速帶回實驗室分析測定。
[0051] 試驗結(jié)果如下：
[0052] (1)移栽40d后，對照處理中植株的發(fā)病率達(dá)到了 92. 4%，而添加有機(jī)肥及本發(fā)明 中微生物有機(jī)肥均能顯著降低青枯病的發(fā)病率，其中T2 :番茄連作土壤+微生物有機(jī)肥處 理表現(xiàn)出最好的防治效果（表1)，其發(fā)病率為15. 7%，防病率達(dá)83. 1%。
[0053] (2)施用本發(fā)明的微生物有機(jī)肥不僅可以起到防治番茄青枯病的作用，而且具有 減少土壤中青枯菌的數(shù)量，增加有益微生物數(shù)量，改善根際微生物群落結(jié)構(gòu)的功能（表2)。
[0054] (3)施用本發(fā)明的微生物有機(jī)肥能促進(jìn)番茄的生長，顯著增加植株的生物量（表 1)。CK處理中番茄的株高和地上部干重依次為42. 5cm和3. 3g，而使用含菌T-5的生物有 機(jī)肥（T2處理）中的番茄株高和地上部干重依次為62. 7cm和5. lg，T2處理中的番茄生物 量相比CK處理和Tl處理均要高。
[0055] 表1番茄盆栽的發(fā)病率、生防效果及生物量
[0056]
[0057] 表2番茄根際土壤中微生物數(shù)量
[0058]
[0059] 實施例4田間試驗
[0060] 在南京麒麟鎮(zhèn)連作10年的番茄青枯病發(fā)病大棚進(jìn)行了田間試驗，以IOOkg/畝使 用量，設(shè)置二個處理：1、CK處理，施用化肥（用氮磷鉀化肥補(bǔ)齊養(yǎng)分）；2、T-5處理，施用微 生物有機(jī)肥（制備方法見實施例3)，每個處理三個重復(fù)，每個小區(qū)40m2。
[0061] 移栽后定期到田間采集數(shù)據(jù)，統(tǒng)計發(fā)病率，最后采收后計算不同處理的生物量差 異。施用本發(fā)明的微生物有機(jī)肥在田間能夠顯著降低番茄青枯病的發(fā)病率，番茄產(chǎn)量增加 32% (表 3)。
[0062] 表3田間試驗效果
[0063]
[0064] 本發(fā)明專利從改善土壤微生物區(qū)系這一關(guān)鍵問題著手，研制出一種能夠顯著降低 連作番茄青枯病發(fā)生的微生物有機(jī)肥料產(chǎn)品，防治率達(dá)75%以上。本產(chǎn)品的作用機(jī)制在于 本肥料產(chǎn)品中的有益微生物能夠與有機(jī)載體良好結(jié)合，能夠使得該有益微生物菌株迅速大 量繁殖，在番茄根際形成優(yōu)勢菌群；另外一方面，本肥料產(chǎn)品中含有較高含量的有機(jī)氮和有 機(jī)磷，這些營養(yǎng)物質(zhì)對連作障礙土壤中作物的生長十分有利，大大提高了作物的立苗率和 抗逆能力。
[0065] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一株防治番茄青枯病的解淀粉芽孢桿菌菌株T-5,其特征在于，其保藏號為CGMCC NO. 8547 〇2. 含有權(quán)利要求1所述菌株的微生物有機(jī)肥，其特征在于，含有解淀粉芽孢桿菌菌株 T-5的有效活菌數(shù)含量為I.OX108cfu/g(含）以上。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的微生物有機(jī)肥，其特征在于，還含有氮、磷、鉀。4. 制備權(quán)利要求2~3任意一項所述的微生物有機(jī)肥的方法，其特征在于，包括如下步 驟： 1) 對解淀粉芽孢桿菌菌株T-5進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到含菌或芽孢量多4. 0XIO9個/ ml的發(fā)酵液； 2) 按體積比為4:6混合腐熟的豬糞堆肥和氨基酸有機(jī)肥，得到混合有機(jī)肥； 3) 將發(fā)酵液按按體積質(zhì)量比為30%接種到混合有機(jī)肥中進(jìn)行固體發(fā)酵，使得解淀粉 芽孢桿菌菌株T-5的有效活菌數(shù)含量為I. 0X108cfu/g(含）以上，在溫度不超過60°C的條 件下干燥至水的質(zhì)量百分含量低于30%，獲得含有解淀粉芽孢桿菌菌株T-5的微生物有機(jī) 肥。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所述液體發(fā)酵培養(yǎng)，為將解淀 粉芽孢桿菌菌株T-5接種到PDA培養(yǎng)液中進(jìn)行液體發(fā)酵培養(yǎng)。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，液體發(fā)酵培養(yǎng)的發(fā)酵條件為：初始pH 值為7. 0-7. 2,培養(yǎng)溫度為30°C，溶氧：通氣量范圍30% -100%，轉(zhuǎn)速170轉(zhuǎn)/分鐘。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所述腐熟的豬糞堆肥，要求 發(fā)芽指數(shù)為98% (含）以上，有機(jī)質(zhì)質(zhì)量比含量為大于等于35%，有機(jī)氮質(zhì)量比含量為 1. 5-2. 3%，水的質(zhì)量百分含量為25-30%。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟3)所述的固體發(fā)酵，發(fā)酵過程中 每天翻堆1-2次，使發(fā)酵溫度不超過60°C，發(fā)酵周期為5-7d。9. 權(quán)利要求1所述解淀粉芽孢桿菌菌株T-5在制備微生物有機(jī)肥中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求1所述解淀粉芽孢桿菌菌株T-5及其微生物有機(jī)肥制品在防治番茄青枯 病中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物肥料領(lǐng)域，具體是一株防治番茄青枯病的解淀粉芽孢桿菌菌株T-5及其微生物有機(jī)肥。本發(fā)明菌株T-5的保藏號為CGMCC NO.8547。本發(fā)明含菌株T-5的微生物有機(jī)肥含有T-5的有效活菌數(shù)含量為1.0×108cfu/g以上。本發(fā)明還提供制備含菌株T-5的微生物有機(jī)肥的方法。本發(fā)明的菌株T-5是抑制番茄青枯病病原菌生長的專一性高效菌株，本發(fā)明的微生物有機(jī)肥含有豐富的有機(jī)質(zhì)、氨基酸和小分子多肽，沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列問題，可以在營養(yǎng)缽施用，也可以在大田施用，不僅具有有機(jī)肥的功能，而且其中所含的生防菌通過多種促生及生防機(jī)制起作用，從而達(dá)到促生或防治番茄土傳青枯病的效果。CGMCC NO. 854720131206
【IPC分類】C12N1/20, C12R1/07, C05F11/08, A01P1/00
【公開號】CN104911129
【申請?zhí)枴緾N201510315357
【發(fā)明人】譚石勇, 譚武貴, 豐來, 羅志威, 林煒
【申請人】湖南泰谷生物科技股份有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年6月10日