相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為20:80的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物4 ; 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置后有黃色固體析出，然后過濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置 后有深黃色固體析出，然后過濾純化后得到化合物6。
[0012] 實(shí)施例2: 皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺粉 末用95%乙醇進(jìn)行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀48h，過濾， 減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積12倍的水，攪拌至浸膏溶解完全，得 到水溶液，備用；然后將水溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸 膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，通過TLC點(diǎn)板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環(huán)己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過濾，將得到的固體重結(jié)晶得到化合物1 ; 將餾分704運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為40:60的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物2和化合物3 ; 將餾分705運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為20:80的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物4 ; 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置后有黃色固體析出，然后過濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置 后有深黃色固體析出，然后過濾純化后得到化合物6。
[0013]實(shí)施例3: 皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺粉 末用90%乙醇進(jìn)行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀44h，過濾， 減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積11倍的水，攪拌至浸膏溶解完全，得 到水溶液，備用；然后將水溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸 膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，通過TLC點(diǎn)板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環(huán)己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過濾，將得到的固體重結(jié)晶得到化合物1 ; 將餾分704運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為40:60的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物2和化合物3 ; 將餾分705運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為20:80的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物4; 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置后有黃色固體析出，然后過濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環(huán)己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經(jīng)靜置 后有深黃色固體析出，然后過濾純化后得到化合物6。
[0014] 抗腫瘤活性試驗(yàn)研宄 乙酸乙酯浸膏和六個(gè)黃烷酮骨架類化合物的體外抗癌活性測(cè)試 將本發(fā)明得到的乙酸乙酯浸膏和化合物1-6進(jìn)行體外抗癌活性測(cè)試，體外癌細(xì)胞株 采用肝癌細(xì)胞株（HepG2)和正常細(xì)胞（L02、HLF和293)中加入設(shè)計(jì)濃度的單體化合物， 單體化合物濃度分別為50，25，12. 5，6. 25，3. 125和1. 5625yg/ml，分別作用24、48 和72小時(shí)后，使用MTT法測(cè)定其細(xì)胞毒活性，計(jì)算并記錄其IC50。陽性對(duì)照為順氯氨鉑 (Cisplatin)。得到化合物的活性結(jié)果如表1所示： 表1 :皂角刺提取物和黃烷酮成分對(duì)H印G2細(xì)胞株抑制率（％)
綜上所述，上述黃烷酮化合物都是首次從皂角刺中被分離得到。其中化合物2、3、4、5 和6經(jīng)體外測(cè)試篩選，均對(duì)肝癌細(xì)胞有較好的抑制作用，其抑瘤率48小時(shí)分別達(dá)到71. 6%、 51. 5%、57. 3%、53. 9% 和 51. 9%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.皂角刺中黃燒酬骨架類化合物的提取方法，其特征在于：包括w下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺 粉末用85-95%己醇進(jìn)行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀 40-4她，過濾，減壓濃縮，得到皂角刺己醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的己醇浸膏中加入其體積10-12倍的水，攬拌至浸膏溶解完全， 得到水溶液，備用；然后將水溶液依次用石油離、己酸己醋萃取，得到石油離浸膏、己酸己醋 浸膏，備用； 步驟=、將步驟二得到的己酸己醋浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的己酸己醋和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油離-己酸己醋進(jìn)行洗脫，通過化C點(diǎn)板分 析，得到饋分1-15,備用； 步驟四、將步驟=得到的饋分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環(huán)己燒-丙酬溶液梯度洗脫，得到饋分701、702、703、704和705,備用； 將饋分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過濾，將得到的固體重結(jié)晶得到化合物1 ; 將饋分704運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，得到化合物2 和化合物3 ; 將饋分705運(yùn)用Waters高效液相色譜法在示差檢測(cè)器條件下等度洗脫，得到化合物 4 ; 步驟五、將步驟=得到的饋分9再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環(huán)己燒-己酸己醋溶液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，收集W體積比為 6:4的環(huán)己燒-己酸己醋溶液為洗脫劑的饋分段，經(jīng)靜置后有黃色固體析出，然后過濾純化 后得到化合物5 ;收集W體積比為4:6的環(huán)己燒-己酸己醋溶液為洗脫劑的饋分段，經(jīng)靜置 后有深黃色固體析出，然后過濾純化后得到化合物6 ; W上得到的六個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)式分別為：2. 如權(quán)利要求1所述的皂角刺中黃燒酬骨架類化合物的提取方法，其特征在于：步驟 四所述饋分704等度洗脫的洗脫劑為體積比為40:60的水-甲醇溶液。3. 如權(quán)利要求1所述的皂角刺中黃燒酬骨架類化合物的提取方法，其特征在于：步驟 四所述饋分705等度洗脫的洗脫劑為體積比為20:80的水-甲醇溶液。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法，包括以下步驟：步驟一、將皂角刺粉末用乙醇熱回流提取，得到乙醇浸膏；步驟二、將乙醇浸膏加水溶解，用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏；步驟三、將乙酸乙酯浸膏采用硅膠柱色譜分離，得到餾分1-15；步驟四、將餾分7再次進(jìn)行硅膠柱色譜法分離，得到化合物1、化合物2、化合物3和化合物4；步驟五、將餾分9進(jìn)行硅膠柱色譜法分離得到化合物5和化合物6。本發(fā)明提取分離的黃烷酮骨架類化合物具有良好的抗肝癌細(xì)胞活性，為進(jìn)一步提升皂角刺的藥用價(jià)值提供了新的科學(xué)依據(jù)。
【IPC分類】C07D311/40, C07D311/32, A61P35/00
【公開號(hào)】CN104926773
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510298694
【發(fā)明人】尹衛(wèi)平, 高嘉嶼, 曹冉冉, 李海迪, 劉軍娜, 甘萬里, 路常攀, 陳輝
【申請(qǐng)人】河南科技大學(xué)
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月4日