一種自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于臨床細(xì)菌分離培養(yǎng)的制備方法，尤其涉及一種用于臨床細(xì)菌 分離的自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，用于臨床細(xì)菌分離的血培養(yǎng)基多采用羊血培養(yǎng)基以及傳統(tǒng)的分離方法，這 些方法對于臨床如急待選擇敏感抗生素的人群往往跟不上臨床感染人群細(xì)菌分離的要求， 而且分離速度太慢，取得的信息常因過時而失去作用，達(dá)不到臨床理想病原體快速分離鑒 定及敏感藥物選擇的效果，而且常規(guī)羊血的來源不足。
[0003] 上述可知，有必要對現(xiàn)有技術(shù)作進(jìn)一步改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對以上問題，本發(fā)明提供了一種操作流程簡單，替代了常規(guī)羊血培養(yǎng)基，細(xì)菌分 離及藥物敏感實(shí)驗(yàn)快速準(zhǔn)確，提高了敏感藥物選擇的準(zhǔn)確度，克服了傳統(tǒng)細(xì)菌分離速度慢 和敏感藥物選擇效果差等缺陷的自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 上述的一種自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其包括以下步驟：（1)采集自 體或異體靜脈血，然后無菌分離棄去血漿，將得到的紅細(xì)胞，經(jīng)磷酸鹽PBS洗滌，再經(jīng)離心 分離后，再無菌棄去上清液后，得到自體紅細(xì)胞懸液；（2)取質(zhì)量比為5%~25%的牛肉浸 汁粉、38%~58%的水解酪蛋白、1 %~1. 5%的淀粉、15%~35%的瓊脂混合后，加入磷酸 鹽PBS緩沖液溶解，調(diào)成PH7. 4-7. 6的水解液，經(jīng)滅菌處理后，制得水解酪蛋白瓊脂；（3)取 上述步驟（2)滅菌處理后的水解酪蛋白瓊脂并冷卻至45°C~55°C，與上述步驟（1)制備好 的自體紅細(xì)胞懸液按體積比5~20 :1混合均勻，無菌制備自體紅細(xì)胞培養(yǎng)基平皿。
[0007] 所述自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其中：所述步驟（1)中紅細(xì)胞是由人 機(jī)體靜脈采集自體或異體靜脈血，然后經(jīng)GMP環(huán)境于400-1000r/min無菌分離8~15min 后，棄去血漿，得到紅細(xì)胞。
[0008] 所述自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其中：所述步驟（1)中是將得到的紅 細(xì)胞經(jīng)PH7. 4-7. 6的磷酸鹽PBS洗滌2~3次，依次于500r/min離心至多15min后，棄去 上清液后得到自體紅細(xì)胞懸液。
[0009] 所述自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其中：所述步驟⑵是將調(diào)成 PH7. 4-7. 6的水解液，經(jīng)121°C，15鎊高壓，滅菌處理30min后，制得水解酪蛋白瓊脂。
[0010] 所述自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其中：所述步驟（2)中加入的磷酸鹽 PBS緩沖液的量是牛肉浸汁粉、水解酪蛋白、淀粉、瓊脂四種組分總重量的20~28倍。 [0011] 所述自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其中：所述步驟（3)是在GMP環(huán)境下制 備無菌自體紅細(xì)胞培養(yǎng)基平皿。
[0012] 所述自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，其中：所述制備方法可以得到自體或 異體紅細(xì)胞懸液以及異體A、B、0、AB、ABO混合不同的5種不同的血型紅細(xì)胞懸液。
[0013] 有益效果：
[0014] 本發(fā)明自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法操作流程簡單，替代了常規(guī)羊血培養(yǎng) 基，細(xì)菌分離及藥物敏感實(shí)驗(yàn)快速準(zhǔn)確，克服了傳統(tǒng)細(xì)菌分離速度慢和敏感藥物選擇效果 差等缺陷，具體優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在以下幾點(diǎn)：
[0015] (1)本發(fā)明制備的自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基替代羊血培養(yǎng)基，解決了常規(guī)羊血來 源不足的問題；
[0016] (2)大幅度縮短了細(xì)菌分離過程，由原來的18~72小時縮短到10~16小時；
[0017] (3)提高了敏感藥物選擇的準(zhǔn)確度。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 本發(fā)明自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，具體包括以下步驟：
[0019] SOKK由人機(jī)體靜脈采集自體或異體靜脈血，然后經(jīng)GMP環(huán)境于400-1000r/min無 菌分離8~15min后，棄去血漿，將得到的紅細(xì)胞，經(jīng)PH7. 4-7. 6的磷酸鹽PBS洗滌2~3 次，每次500r/min，離心至多8~15min后，再無菌棄去上清液，即得自體紅細(xì)胞懸液；
[0020] S020、取重量比為5 %~25 %的牛肉浸汁粉、38 %~58 %的水解酪蛋白、1 %~ 1. 5 %的淀粉、15 %~35 %的瓊脂混合后，加入磷酸鹽PBS緩沖液溶解，調(diào)成PH7. 4-7. 6的水 解液，再經(jīng)121°C，15鎊高壓下，滅菌處理30min后，制得水解酪蛋白瓊脂；
[0021] S030、取上述步驟S020滅菌處理后的水解酪蛋白瓊脂并冷卻至45°C~55°C，與上 述步驟SOlO制備好的自體紅細(xì)胞懸液按體積比5~20 :1混合均勻，在GMP環(huán)境下制備無 菌自體紅細(xì)胞培養(yǎng)基平皿。
[0022] 其中，加入的磷酸鹽PBS緩沖液的量是牛肉浸汁粉、水解酪蛋白、淀粉、瓊脂四種 組分總重量的20~28倍。同時，本發(fā)明的制備方法可以得到自體或異體紅細(xì)胞懸液及異 體A、B、0、AB、ABO混合不同的5種不同的血型紅細(xì)胞懸液。
[0023] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明：
[0024] 實(shí)施例1
[0025] 本發(fā)明實(shí)施例1的自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，具體包括以下步驟：
[0026] S110、采集患者自體靜脈血10ml，無菌移至50ml錐形離心管中，在GMP環(huán)境以 400-1000r/min離心8~15min后，無菌手法棄去血漿，后以PH7. 4的磷酸鹽PBS緩沖液洗 絳2~3次，以每次500r/min，離心8min，再無菌棄去上清液，即得自體紅細(xì)胞懸液；
[0027] S120、取牛肉浸汁粉5g，水解酪蛋白17. 5g，淀粉1.5%，瓊脂12. 5%并加人PH7.4 的磷酸鹽PBSlOOOml，調(diào)PH7. 4,再經(jīng)121 °C，15鎊高壓，滅菌處理30min后，得到水解酪蛋白 瓊脂；
[0028] S130、取100mL已滅菌處理后水解酪蛋白瓊脂，冷卻至40°C，加入制備好的自體紅 細(xì)胞懸液20ml，緩緩加入順時方向搖勻即得自體紅細(xì)胞培養(yǎng)基，按9cm直徑，每平皿25ml緩 緩傾斜注入制備培養(yǎng)基，制得無菌自體紅細(xì)胞培養(yǎng)基平皿。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 本發(fā)明實(shí)施例2的自體或異體紅細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，具體包括以下步驟：
[0031] S210、取20ml異體靜脈血，無菌移至50ml錐形離心管中，在GMP環(huán)境以 400_1000r/min離心8~15min后，無菌手法棄去血衆(zhòng)，后以PH7. 6的磷酸鹽PBS緩沖液洗 滌2~3次，每次500r/min，離心8min，再無菌棄去上清液，即得異體紅細(xì)胞懸液；
[0032] S220、取牛肉浸汁粉5g，水解酪蛋白38g，淀粉lg，瓊脂15g