一種提高乳桿菌耐酸能力的方法及其乳桿菌飲料的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一種提高乳桿菌耐酸能力的 方法及其乳桿菌飲料。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳酸菌（LacticAcidBacteria，LAB)是人類(lèi)應(yīng)用最早的細(xì)菌之一，早在公元前 3世紀(jì)，我們的祖先就用它來(lái)制作泡菜和腌菜，長(zhǎng)期以來(lái)，這些細(xì)菌一直用于食品和飲料的 加工制作。乳桿菌（Lactobacillusplantarum)是乳酸菌中的一種，乳桿菌不僅可以提高 食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，改善食品風(fēng)味，提高食品保藏性和附加值，而且作為人體胃腸道的益生菌 群，具有維持腸道內(nèi)菌群平衡、提高機(jī)體免疫力和促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收等多種功能。
[0003] 益生乳酸菌能夠在各種不利環(huán)境下存活是其發(fā)揮益生功能的先決條件。人和動(dòng) 物的消化道是抵御外來(lái)致病菌感染機(jī)體的自然屏障，益生乳桿菌這類(lèi)對(duì)人體有益的微生物 同樣要面對(duì)這一自然屏障的考驗(yàn)。在食品工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中益生菌會(huì)遇到酸性環(huán)境，如在乳 制品發(fā)酵過(guò)程中，乳酸的產(chǎn)生降低了食品的pH值。此外，當(dāng)益生菌被食用后進(jìn)入胃，胃酸 的產(chǎn)生使胃中的pH值極低，這也是益生菌要面對(duì)的酸性環(huán)境。胃液的pH最低可達(dá)1. 5,在 進(jìn)食后pH可上升至6或更高，但一般維持在2. 5~3. 5之間，通常食物在胃內(nèi)停留時(shí)間為 2~4h。胃液有強(qiáng)酸性，在酸性條件下，質(zhì)子在細(xì)胞內(nèi)部積累，這就影響了跨膜質(zhì)子梯度，形 成膜電勢(shì)差，這一電勢(shì)差會(huì)形成被動(dòng)的動(dòng)力，使得另外一些離子順著電位差移動(dòng)來(lái)平衡兩 側(cè)的電位，這個(gè)動(dòng)力被稱(chēng)作質(zhì)子驅(qū)動(dòng)力。細(xì)胞內(nèi)酸化會(huì)降低酸敏感的酶的活性、導(dǎo)致蛋白 及DNA受損，因此耐酸是益生菌重要且必須具備的特性之一。大量的研宄表明，外界環(huán)境脅 迫，如在生產(chǎn)、儲(chǔ)藏以及運(yùn)輸過(guò)程中的熱脅迫、酸脅迫、滲透壓脅迫和冷脅迫等，可誘導(dǎo)乳酸 菌產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而提高其對(duì)另外一種或幾種不利環(huán)境的耐受能力。此外，乳酸菌在其 自然生境及發(fā)酵過(guò)程中及食品保藏過(guò)程中會(huì)遇到高濃度的鹽，如分離自泡菜的植物乳桿菌 ST-III(LactobacillusplantarumST-III)，其具有清除膽固醇，酸耐受能力強(qiáng)等的益生特 性，并可以在高鹽（NaCl濃度大于4% )MRS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本部分的目的在于概述本發(fā)明的實(shí)施例的一些方面以及簡(jiǎn)要介紹一些較佳實(shí)施 例。在本部分以及本申請(qǐng)的說(shuō)明書(shū)摘要和發(fā)明名稱(chēng)中可能會(huì)做些簡(jiǎn)化或省略以避免使本部 分、說(shuō)明書(shū)摘要和發(fā)明名稱(chēng)的目的模糊，而這種簡(jiǎn)化或省略不能用于限制本發(fā)明的范圍。
[0005] 鑒于上述和/或現(xiàn)有提高乳桿菌耐酸能力的方法中存在的問(wèn)題，提出了本發(fā)明。
[0006] 因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種提高乳桿菌耐酸能力的方法，通過(guò)菌體在含 有NaCl的培養(yǎng)基中培養(yǎng)能夠顯著提高乳桿菌的酸耐受能力。
[0007] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明是提供如下技術(shù)方案：一種提高乳桿菌耐酸能力的 方法，其是在培養(yǎng)基中添加NaCl以產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而提高乳桿菌耐酸能力，包括，乳桿菌 的培養(yǎng)：將乳桿菌37°C倒置培養(yǎng)至長(zhǎng)出單菌落，挑單個(gè)菌落接種到液體MRS培養(yǎng)基，37°C靜 置培養(yǎng)12h，獲得種子液；將上述種子液以2%接種量接種到含有NaCl的MRS培養(yǎng)基，37°C靜置培養(yǎng)12h;離心，獲得的菌體，進(jìn)行酸耐受實(shí)驗(yàn)。
[0008] 作為本發(fā)明所述的提高乳桿菌耐酸能力的方法的一種優(yōu)選方案，其中：乳桿菌在 含NaCl培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述含NaCl培養(yǎng)基濃度為1%~11%NaCl。
[0009] 作為本發(fā)明所述的提高乳桿菌耐酸能力的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述離心， 其速度為4500rpm。
[0010] 作為本發(fā)明所述的提高乳桿菌耐酸能力的方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述進(jìn)行 酸耐受實(shí)驗(yàn)中，酸耐受的pH值為1. 5,耐受時(shí)間為2h。
[0011] 本發(fā)明另一個(gè)目的是提供一種富含耐酸能力強(qiáng)的乳桿菌飲料。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：一種乳桿菌飲料，其包括， 打漿：將酸果蔓打漿10~20min，并過(guò)濾得到酸果蔓液；發(fā)酵：將液化后的酸果蔓液按酸果 蔓液體積的2~5%接種如權(quán)利要求1~3任一所述的提高乳桿菌耐酸能力的方法后得到 的乳桿菌，在35~40°C恒溫下，發(fā)酵10~20h，當(dāng)pH為4. 0以下時(shí)發(fā)酵結(jié)束，過(guò)濾，制得酸 果蔓汁發(fā)酵液；調(diào)配：按酸果蔓汁發(fā)酵液質(zhì)量百分比的3~4%加入糖；均質(zhì)：將調(diào)配后的 酸果蔓過(guò)濾液于30~40MPa下均質(zhì)、脫氣、分裝。
[0013] 作為本發(fā)明所述乳桿菌飲料的一種優(yōu)選方案，其中：所述發(fā)酵中乳桿菌的接種量 為按酸果蔓液體積的3%。
[0014] 本發(fā)明通過(guò)對(duì)乳桿菌在含NaCl的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，提高了其對(duì)酸耐受的能力，為了 解鹽應(yīng)激及其產(chǎn)生的協(xié)同保護(hù)在乳酸菌益生功能中發(fā)揮的作用提供了依據(jù)。且本發(fā)明制備 的乳酸菌發(fā)酵液被直接食用后，經(jīng)過(guò)胃部低酸環(huán)境后，最終在腸道中的活菌數(shù)高于未在含 有NaCl培養(yǎng)基中培養(yǎng)的乳酸菌，能達(dá)到更佳的保健效果。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面通過(guò)【具體實(shí)施方式】 做詳細(xì)的說(shuō)明。
[0016] 在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明，但是本發(fā)明還可以 采用其他不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的 情況下做類(lèi)似推廣，因此本發(fā)明不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施例的限制。
[0017] 其次，此處所稱(chēng)的"一個(gè)實(shí)施例"或"實(shí)施例"是指可包含于本發(fā)明至少一個(gè)實(shí)現(xiàn) 方式中的特定特征、結(jié)構(gòu)或特性。在本說(shuō)明書(shū)中不同地方出現(xiàn)的"在一個(gè)實(shí)施例中"并非均 指同一個(gè)實(shí)施例，也不是單獨(dú)的或選擇性的與其他實(shí)施例互相排斥的實(shí)施例。
[0018] 實(shí)施例1菌種的培養(yǎng)
[0019] 1、將乳桿菌在DeMan，RogosaandSharpemedium(MRS)固體平板上劃線，37°C倒 置培養(yǎng)至長(zhǎng)出單菌落，挑單個(gè)菌落接種到液體MRS培養(yǎng)基，37°C靜置培養(yǎng)12h;
[0020] 2、上述培養(yǎng)液以2%接種量接種到含有2%恥(：1、4%恥(：1、6%恥(：1、8%恥(：1、 10%NaCl不含有NaCl的MRS培養(yǎng)基，37°C靜置培養(yǎng)12h。
[0021] 實(shí)施例2鹽應(yīng)激對(duì)乳桿菌耐酸的影響
[0022] 1、酸耐受
[0023](1)收集在含NaCl(2 %NaCl、4%NaCl、6%NaCl、8 %NaCl、10%NaCl)及不含有 NaCl的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌體；
[0024]