持3.化，過濾，得第一濾液；添加濾渣2倍重 量的水，控制溫度90°C保持化，然后降溫至30°C，過濾，得第二濾液；將第一濾液和第二濾 液按照質(zhì)量比3:2合并，濾液真空濃縮后冷凍干燥、粉碎即得中草藥提取物；
[0023] 所述混合酶為葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果膠酶按質(zhì)量比3:2:2:1均勻混 厶 口 〇
[0024] 優(yōu)選地，所述木屑粉的制備方法包括如下步驟；將無發(fā)霉、無病蟲銀木末或廢木 屑除去雜物，置于裝有質(zhì)量百分比濃度0.5%的碳酸氨鋼溶液的超聲波清洗機中于200W、 30KHz清洗lOmin，沖洗、漸干，放入蒸汽蓋中于0. 3-0. 4MPa蒸煮20-30min,取出，漸干， 與植物油按質(zhì)量比100:1均勻混合，然后將混合物置微波干燥機于2000W、120°C微波福照 5min，使之水分達到8-10%，最后超微粉碎至粒徑0. 3-0. 5mm,密封包裝即得木屑粉；
[0025] 更優(yōu)選地，所述干燥工藝為；微波福照10s，停留10s。
[0026] 優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法為；按照培養(yǎng)基配方準確稱量各原料，首先取 黃豆餅粉質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)抑值為5-6,加入加/g黃豆餅粉的耐高溫a-淀粉 酶，邊攬拌邊加入黃豆餅粉，升溫至90-95°C，保溫，液化10-15min，然后降溫至50-60°C， 保溫，邊攬拌邊加入40u/g黃豆餅粉的糖化酶和30u/g黃豆餅粉的蛋白酶水解20-30min，邊 攬拌邊加入剩余水和其它原料，均勻混合，調(diào)整抑值為6. 0,121-123C滅菌30-40min即得 發(fā)酵培養(yǎng)基；
[0027] 優(yōu)選地，所述包被殼聚糖的制備方法，包括如下步驟；取殼聚糖加入其質(zhì)量 30-50%的質(zhì)量百分比濃度為10-12%的a-環(huán)狀糊精水溶液中，制成軟材，用10-20目篩制 粒，得濕顆粒，置微波干燥機中于功率2000W、60-80°C干燥4-6min，用10-20目篩快速整粒 即得包被殼聚糖。
[002引本發(fā)明液體菌種主要質(zhì)量指標的檢測方法；
[0029] 菌絲球干重的測定
[0030] 取50ml發(fā)酵液用80目的篩網(wǎng)進行過濾，收集菌球，用清水進行反復沖洗，而后置 于恒溫烘干箱中80°C烘干4小時后稱重，并每隔半小時稱量一次，直至兩次稱量差不超過 2mg，即為恒重。最后計算菌絲干重的平均值。
[0031] 菌絲球密度的測定
[0032] 用移液管取發(fā)酵液1ml于培養(yǎng)皿中，對菌球數(shù)量進行計數(shù)，重復記數(shù)=次，最后計 算菌球密度的平均值。
[003引菌絲球直徑的測定
[0034] 用移液管取發(fā)酵液1ml，用綴子取10個菌球排成一長列，測量總長度，然后求平均 值，重復測量=次，計算菌球直徑的平均值。
[0035] 菌絲球回接平板萌發(fā)時間的測定
[0036] 從發(fā)酵培養(yǎng)基的培養(yǎng)液中取一個菌球置于PDA培養(yǎng)基平板中央，每一種發(fā)酵培養(yǎng) 基做S個重復，將放有菌球的PDA平板置于培養(yǎng)箱中25°C進行培養(yǎng)，每隔1小時觀察一次， 等到觀察到有一組菌球萌發(fā)后，改為每0. 5小時觀測一次，并記錄各實驗組的萌發(fā)時間，最 后計算每一種發(fā)酵培養(yǎng)基中菌球回接平板后萌發(fā)時間的平均值。
[0037] 胞外多糖含量的測定
[003引取發(fā)酵液50ml，抽濾，取上清液，加入兩倍體積的工業(yè)酒精，沉淀多糖過夜，然后 36(K)r/min離屯、10分鐘，收集多糖，置于40°C下烘干，2小時后稱重之后每隔半小時稱量一 次，直至兩次稱量差不超過2mg，即為恒重。
[0039] 本發(fā)明另一目的是提供上述方法制備的菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種。
[0040] 所述菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種經(jīng)發(fā)酵罐發(fā)酵67-92h，菌絲球密度為 4. 5-5. 5X105個/I，菌絲球直徑為0. 5-0. 7mm，菌絲球干重為90-100g/l，萌發(fā)時間為4-化， 胞外多糖為3. 0-3. 5g/L。
[0041] 本發(fā)明還有一個目的是提供上述菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種在杏鮑茹栽培 中的應用。
[0042] 有益效果；
[0043] 本發(fā)明根據(jù)杏鮑茹原菌株的特性，在液體種子、搖瓶種子、種子罐種子及發(fā)酵罐液 體菌種各階段培養(yǎng)基中自少至多科學復配可提高菌種抗冷、熱應激性、免疫性和抗菌性的 中草藥提取物，同時科學復配了既具有原料適應性，又具有消泡劑功能的木屑粉，通過逐級 馴化、復壯擴大培養(yǎng)，增強了杏鮑茹菌種抗高溫及低溫應激能力，提高了產(chǎn)多種降解酶的能 力，激發(fā)了其增殖能力和增殖密度，縮短了萌發(fā)時間，提高了菌絲及胞外多糖的產(chǎn)量，提高 了菌株對發(fā)酵環(huán)境及后續(xù)栽培環(huán)境的適應性，同時采用追加接種和分段變溫發(fā)酵的方式， 縮短了菌種菌齡及增殖代數(shù)差距，適時流加包被后的具有增稠性、相溶性、穩(wěn)定性、吸附性 和抑菌性等特殊功能的殼聚糖調(diào)整發(fā)酵培養(yǎng)基的粘度及穩(wěn)定性，提高了菌絲球在發(fā)酵液 中分布的均一性和溶氧程度，并且打破了傳統(tǒng)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法，對其中的黃豆餅粉 進一步生物酶解，縮短了發(fā)酵周期，培養(yǎng)出一種發(fā)酵菌絲粗壯、活性高、菌絲球直徑小、密 度大、分布均勻的杏鮑茹液體菌種，其菌絲球密度為4. 5-5. 5X105個/I，菌絲球直徑為 0. 5-0. 7mm，菌絲球干重為90-100g/l，萌發(fā)時間為4-化，胞外多糖為3. 0-3. 5g/L。全面提 高了杏鮑茹液體菌種的質(zhì)量和產(chǎn)量，降低了生產(chǎn)成本，為杏鮑茹的高質(zhì)量、高產(chǎn)量和規(guī)?；?栽培奠定了堅實的基礎，經(jīng)栽培試驗表明；本發(fā)明制備的杏鮑茹液體菌種健壯、活力高，生 長速度快，菌絲產(chǎn)量和質(zhì)量高，抗雜菌能力強，保質(zhì)期長，與市售液體菌種相比發(fā)菌時間縮 短22. 22%，雜菌感染率降低96. 67%，一級茹率提高5%，生產(chǎn)能力為市售杏鮑茹液體菌種 2倍W上，體現(xiàn)了較高的經(jīng)濟價值，更加適合工廠化、規(guī)模化栽培。
[0044] 具體技術(shù)原理為；
[0045] 1.本發(fā)明的中草藥提取物科學復配顯著提高菌種抗冷、熱應激性、免疫性和抗病 性的中草藥為原料，經(jīng)超聲清洗、低溫酶解、水提醇提和超聲波輔助微波提取而制備的，提 取物有效成分含量高，成本低，可有效通過逐級馴化、復壯擴大培養(yǎng)，增強了杏鮑茹菌種抗 高溫及低溫應激能力，提高了產(chǎn)纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶等降解酶的能力，激發(fā)了其增殖 能力和增殖密度，縮短了萌發(fā)時間，有效提高了杏鮑茹液體菌種的密度、菌絲干重和胞外多 糖的產(chǎn)量，縮小了菌絲球直徑，增強了菌株對發(fā)酵環(huán)境及后續(xù)栽培環(huán)境的適應性，全面增強 了改進的杏鮑茹液體菌種的抗應激性、抗病性和免疫能力，同時采用超聲清洗可有效殺滅 原料中的蟲卵及雜菌，降低重金屬離子含量和農(nóng)藥殘留量，降低了杏鮑茹富集重金屬離子 的原料可能，提高了食用菌的食品安全性和液體菌種的保質(zhì)期。
[0046] 2.本發(fā)明木屑粉W高纖維素含量和高木質(zhì)素含量的木屑與植物油為原料，采用超 聲清洗、高壓蒸煮和微波干燥工藝制備，其質(zhì)地細柔軟，營養(yǎng)纖維素含量高，非常有利于杏 鮑茹菌種發(fā)酵，同時網(wǎng)格結(jié)構(gòu)豐富、均勻，吸附力強，植物油附著量大，既可為杏鮑茹提供豐 富的營養(yǎng)，還可解決高通風量下鼓氣發(fā)酵易起泡沫的問題，也為后期的栽培過程提供了環(huán) 境適應性能力，并且采用超聲清洗可有效殺滅原料中的蟲卵及雜菌，降低重金屬離子含量 和農(nóng)藥殘留量，降低了杏鮑茹富集重金屬離子的原料可能，提高了食用菌的食品安全性。
[0047] 3.本發(fā)明克服了傳統(tǒng)制備發(fā)酵培養(yǎng)基的方法，對其中的黃豆餅粉進一步液化和酶 解，將其中的淀粉和蛋白質(zhì)大分子營養(yǎng)物質(zhì)降解為小分子，便于杏鮑茹起酵和發(fā)酵，縮短了 杏鮑茹發(fā)酵周期。
[0048] 4.本發(fā)明的包被殼聚糖，同時具有殼聚糖和a-環(huán)狀糊精的多重功能，適度調(diào)整 了杏鮑茹發(fā)酵液的粘度、相溶性、穩(wěn)定性、吸附性和抑菌性，提高了菌絲球在發(fā)酵液中分布 的均一性和溶氧程度。
[0049] 5.本發(fā)明菌絲球小且多的杏鮑茹液體菌種的發(fā)酵方法采用鼓氣發(fā)酵工藝，工藝簡 單、操作方便、發(fā)酵周期短（發(fā)酵罐67-9化)，可規(guī)?；蜋C械化生產(chǎn)，通過優(yōu)化菌種擴培和 發(fā)酵過程培養(yǎng)基及發(fā)酵工藝，采用分段追加接種和變溫發(fā)酵的方式，縮短了菌齡及增殖代 數(shù)差距，有效提高了杏鮑茹液體菌種的生物活性和發(fā)酵力，顯著提高了菌絲球的密度、菌絲 干重和胞外多糖的產(chǎn)量，縮小了菌絲球直徑，全面提高了杏鮑茹液體菌種的質(zhì)量和產(chǎn)量，降 低了生產(chǎn)成本。
【具體實施方式】
[0化0] 下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實施方案應理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對該些實施方案中的物料成分和用量進行的各種改變或改動也 屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0化1] 實施例1原料制備[0052] 1.中草藥提取物的制備：
[0化3] 所述中草藥提取物的制備方法，包括如下步驟；按重量份數(shù)計，稱取黃巧30份，干 姜30份，陳皮30份，牛黃25份，丹皮25份，甘草20份，知母18份，金銀花18份，魚腥草17 份，赤巧15份，黃琴15份，川號10份，當歸8份；置盛有0. 2%碳酸氨鋼溶液的超聲波清洗 機中于200W、30KHz清洗12min，漸干，將上述中草藥粉碎至粒徑為2毫米W下，置容器中均 勻混合并添加5倍重量的水，得混合物料，控制溫度80°C保持化，接