一種表皮生長因子受體egfr抑制劑及其制備方法與用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種表皮生長因子受體EGFR抑制劑及其制備方 法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 表皮生長因子受體EGFR(EpidermalGrowthFactorReceptor)是ErbB受體家族 的一種，是一種糖蛋白，屬于酪氨酸激酶型受體，細胞膜貫通，分子量170KDa。EGFR位于細 胞膜表面，與配體結(jié)合激活EGF和TGF(transforminggrowthfactor)。激活后，EGFR由 單體轉(zhuǎn)化為二聚體后激活它位于細胞內(nèi)的激酶通路，引導下游的磷酸化，包括MPAK，Akt和 JNK通路，誘導細胞增殖。研究表明在許多實體腫瘤中存在EGFR的高表達或異常表達，EGFR 與腫瘤細胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細胞凋亡的抑制有關(guān)。EGFR的過表達在惡 性腫瘤的發(fā)展中起重要作用，腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、膠質(zhì)細胞瘤等組織中 都有EGFR的過度表達。
[0003] 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶是一類將ATP的磷酸基團轉(zhuǎn)移到蛋白質(zhì)底物的酪氨酸殘基的 酶。許多生長因子受體蛋白包括表皮生長因子受體通過磷酸化而起作用，表皮生長因子受 體EGFR酪氨酸激酶使表皮生長因子受體磷酸化，臨床上，EGFR酪氨酸激酶抑制劑已被用于 癌癥的治療，如吉非替尼、厄洛替尼被用于治療非小細胞肺癌取得了一定的療效。
[0004] 然而許多腫瘤中存在有變異型的EGFR酪氨酸激酶，或則藥物治療后 EGFR酪氨酸激酶發(fā)生突變，從而使藥物失效、S卩臨床上表現(xiàn)出耐藥性或則抗藥 性。2004年即有在吉非替尼對非小細胞肺癌治療中出現(xiàn)了EGFR酪氨酸激酶突變 的報道（Science, 2004,Vol. 304,1497-1500;NewEnglandJournalofMedicine 2004, 350, 2129-2139)。其中一種變異發(fā)生在EGFR酪氨酸激酶的守門殘基790位點，由原 來在該位點的L-蘇氨酸（T)為L-甲硫胺酸（M)替代，被稱為T790M變異，變異后EGF酪氨 酸激酶R不再與吉非替尼、厄洛替尼結(jié)合，從而使藥物失去效果，病人出現(xiàn)耐藥性。
[0005] 綜上所述，開發(fā)去除或降低耐藥性產(chǎn)生的抗癌藥物非常必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對T790M變異的EGFR酪氨酸激酶，設(shè)計了一系列的抑制劑分子，發(fā)現(xiàn)了 對T790M變異EGFR具有高抑制活性的化合物，并且該化合物對癌細胞具有明顯的抑制作 用，這種化合物是一種新的表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑，包含a，(6-不飽和羧酸 酰胺類化合物或其藥學上可接受的鹽，該抑制劑可以對T790M/L858R變體EGFR實現(xiàn)高活性 抑制，并可以抑制或殺滅EGFRT790M變異的腫瘤細胞，有望成為一種治療相關(guān)腫瘤的方法。
[0007] 本發(fā)明提供的一種具有通式（I)結(jié)構(gòu)的表皮生長因子受體EGFR抑制劑及其藥 學上可接受的鹽，該類化合物含有a，(6-不飽和羧酸酰胺結(jié)構(gòu)，其可作為一種不可逆EGFR 抑制劑，
[0008]

[0019] 本發(fā)明還提供了上述表皮生長因子受體EGFR抑制劑的制備方法，如Scheme1所 示，該方法包括以下步驟：起始原料經(jīng)多步常規(guī)化學反應(yīng)得到中間體II，中間體II依次經(jīng) 過加氫還原、?；?，或依次經(jīng)過親核取代、加氫還原、酰化，最后得到相應(yīng)的通式（I)化合 物。
[0020] Scheme1通式I化合物的合成與制備
[0021]
[0022] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包含上述表皮生長因子受體 EGFR抑制劑或其藥學上可接受的鹽，以及其藥學上可接受的載體。
[0023] 所述藥物組合物為片劑、膠囊、顆粒劑或注射劑的形式。
[0024] 所述藥學上可接受的載體選自填充劑、崩解劑、粘合劑和潤滑劑中的一種或多種， 包括但不限于任何和全部的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、吸收延遲劑等，這樣的介質(zhì)和藥劑用于 藥學活性物質(zhì)在本領(lǐng)域是眾所周知的。
[0025] 本發(fā)明還提供了所述表皮生長因子受體EGFR抑制劑或其藥學上可接受的鹽作為 蛋白酪氨酸激酶抑制劑的用途；
[0026] 優(yōu)選地，所述蛋白酪氨酸激酶抑制劑為表皮生長因子受體抑制劑；
[0027] 更優(yōu)選地，所述表皮生長因子受體抑制劑為對T790M變異的表皮生長因子受體的 抑制劑。
[0028] 本發(fā)明還提供了所述表皮生長因子受體EGFR抑制劑或其藥學上可接受的鹽或所 述藥物組合物在制備用于治療表皮生長因子受體過度表達相關(guān)疾病的藥物中的用途；
[0029] 優(yōu)選地，所述表皮生長因子受體過度表達相關(guān)疾病選自如腎癌、肺癌、前列腺癌、 胰腺癌、乳腺癌和膠質(zhì)細胞瘤中的一種或多種。
[0030] 本發(fā)明提供的表皮生長因子受體EGFR抑制劑或其藥學上可接受的鹽，以及其藥 物組合物，可以有效地抑制T790M/L858R變異的表皮生長因子受體，解決在EGFR靶向藥物 如吉非替尼、厄洛替尼片對腫瘤治療中的耐藥性，在體外酶學試驗中，具有通式（I)的化合 物對激酶的抑制活性達到了IC50 = 0.OOlyM(參見表2);在體外細胞實驗中，具有通式 (I)的化合物對癌細胞株NCI-H1975、A549都表現(xiàn)出較強的殺滅活性（參見表3)，有望成為 一個更有效的治療表皮生長因子受體過度表達相關(guān)疾病如腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、 乳腺癌、膠質(zhì)細胞瘤等的藥物，從而有望解決EGFR靶向治療藥物中的抗藥性問題。另外，本 發(fā)明化合物制備工藝簡單，理化性質(zhì)好，質(zhì)量穩(wěn)定，易于進行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0031] 以下通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明。
[0032] 制備具有通式（I)的化合物的方法包括：起始原料經(jīng)多步常規(guī)化學反應(yīng)得到中間 體II，中間體II依次經(jīng)過加氫還原、?；?，或依次經(jīng)過親核取代、加氫還原、?；?，最后得到 相應(yīng)的通式（I)化合物。值得說明的是，通式（I)化合物包括但不限于下述列舉的化合物。
[0033] 實施例1 :2-{4_氟-2-甲氧基-5-【N，N-二甲胺甲基-(E)-丙烯酰胺基】}苯胺 基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶（化合物101)的制備
[0037] 將2, 4-二氯嘧啶（450g，3. 02mol)溶于乙二醇二甲醚（6L)中，于冰浴下攪拌，分 批加入三氯化鋁，之后于室溫下攪拌反應(yīng)半小時。滴加N-甲基吲哚（400g，3. 05mol)。之后 加熱至80°C攪拌反應(yīng)4小時。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LCMS)檢測反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，降至 室溫，將反應(yīng)液緩緩導入冰水中（18L)，迅速攪拌，析出大量橘紅色固體，抽濾，用冷水洗滌 濾餅三遍，所得濾餅烘干，得淡紅色固體粗品。所得粗品溶于二氯甲烷中（2ml/g)，于室溫攪 拌半小時，至呈均勻的懸浮狀固體，抽濾，少量冷二氯甲烷洗滌濾餅，烘干，得純品400g。淡 黃色固體，純度：99%，收率：54%。LC-MS(ESI):m/z 244(M+H)+。
[0038] 4_氣-2-甲氧基苯胺的制備
[0039]
[0040] 將5-氟-2-硝基苯甲醚（500g，2. 92mol)溶于乙醇（2. 4L)和水（0? 8L)中，加入 氯化銨（78g，I. 46mol)，攪拌下加熱至80°C，分批加入還原鐵粉，控制反應(yīng)溫度低于85°C， 攪拌反應(yīng)3小時。LCMS檢測反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，降至室溫，過濾，少量乙醇洗滌濾餅，濾液 濃縮。所得殘余物溶于乙酸乙酯（IL)中，少量水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液降壓濃 縮，干燥，即得產(chǎn)品408g，棕褐色液體，純度：92%，收率^gHX-MS(ESI) :m/z142 (M+H)+。
[0041] 4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺的制備
[0042]
[0043] 將4-氟-2-甲氧基苯胺（400g，2. 83mol)溶于濃硫酸中，于冰浴下攪拌，之后分批 加入硝酸鉀（372g，3. 68mol)，于冰浴下攪拌反應(yīng)兩小時。LCMS檢測反應(yīng)完全。停止反應(yīng)， 用30%氫氧化鈉水溶液調(diào)pH至呈中性（pH= 7)，析出大量固體，抽濾，少量冷水洗滌濾餅， 所得粗品干燥，即得產(chǎn)品。棕褐色固體，134g，純度：93%，收率：25.4%。LC-MS(ESI) :m/z 187(M+H)+〇
[0044] 2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基）苯胺基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶（中間體 A)的制備
[0046] 將3-(2-氯-4-嘧啶基）-1-甲基吲哚（1188,0.485!11〇1)溶于正丁醇（1.51)中， 于室溫下攪拌，加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺（90g，0. 485mol)和對甲苯磺酸（100g， 0. 582mol)，之后加熱至105°C，攪拌反應(yīng)兩小時。LCMS檢測反應(yīng)完全。停止反應(yīng)，冷卻至 室溫，將反應(yīng)液抽濾，少量冷乙醇洗滌，濾餅干燥，得淡黃色固體130g，純度：98%，收率： 68%。LC-MS(ESI) :m/z394(M+H)+。
[0047] 2-(4-氟-2-甲氧基-5-胺基）苯胺基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶的制備
[0048]
[0049] 將2-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基）苯胺基-4-(1-甲基-3-吲哚基）嘧啶（310mg， 0. 788mmol)溶于甲醇（5ml)和四氫咲喃（2ml)中，加入10%Pd/C(50mg)，用氫氣置換三遍， 之后于40Psi氫氣壓下，攪拌反應(yīng)約2小時。LCMS檢測反應(yīng)完全。濾除鈀炭，少量甲醇洗 滌濾餅，濾液減壓濃縮干燥，得灰色固體，280mg，純度：95%，收率：96%。LC-MS(ESI) :m/z 364 (M+H)、
[0050] 2_{4_