明適用于規(guī)模化發(fā)酵生產(chǎn)卷曲霉素，至少能夠滿足年產(chǎn)100噸卷曲霉素的生產(chǎn)需求。
[0075]5培養(yǎng)基中使用麥芽糖代替葡萄糖，避免出現(xiàn)“美拉德反應(yīng)”。
[0076]具體實(shí)施方法
[0077]下面用實(shí)例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。
[0078]下述實(shí)施例的菌種選用卷曲鏈霉菌:生產(chǎn)使用的菌種來源為母瓶發(fā)酵液。母瓶發(fā)酵液質(zhì)量要求為:pH6?7 ;菌體濃度25?30% ;鏡檢無雜菌。
[0079]實(shí)施例1
[0080]一級種子培養(yǎng):一級種子培養(yǎng)基體積Im3。
[0081]—級種子培養(yǎng)基組成:豆油2L、小麥麩皮12kg、麥芽糖8kg、麥芽糖酶2g、魚粉9kg、玉米楽12L、一浸豆柏粉7kg、硫酸錢0.5kg、輕質(zhì)碳酸I丐1kg。
[0082]首先將一級種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至15°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后一級種子培養(yǎng)基的質(zhì)量:氨基氮31mg/100ml、溶磷20ug/ml、總糖10.2mg/100ml、pH6.9。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的卷曲鏈霉菌母瓶發(fā)酵液0.1L接種量接入一級種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。一級種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?0.05MPa ;罐溫28?29°C ;空氣流量:0?15h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；16h?移種:20m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速60r/min。一級種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度20 %、pH值6.1、培養(yǎng)時間30h。
[0083]二級種子培養(yǎng):二級種子培養(yǎng)基體積10m3。
[0084]二級種子培養(yǎng)基組成:豆油30L、小麥麩皮150kg、麥芽糖100kg、麥芽糖酶30g、魚粉120kg、蠶蛹粉40kg、一浸豆柏粉70kg、玉米蛋白粉100kg、硫酸錢2kg、輕質(zhì)碳酸|丐10kg。
[0085]先將二級種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至15°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后的二級種子培養(yǎng)基的質(zhì)量:氨基氮35.2mg/100ml、溶磷30ug/ml、總糖21mg/100ml、pH6.9。將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級種子培養(yǎng)基移入二級種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級種子培養(yǎng)，二級種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?0.05MPa ;罐溫28?30 °C ;空氣流量40m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速60r/min。至菌體濃度30%, pH值6.8、培養(yǎng)時間40h時移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0086]發(fā)酵培養(yǎng):發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
[0087]發(fā)酵培養(yǎng)基組成:豆油600L、小麥麩皮2100kg、麥芽糖2600kg、麥芽糖酶0.5kg、魚粉1600kg、蠶蛹粉1000kg、一浸豆柏粉1400kg、玉米蛋白粉1300kg、硫酸錢50kg、輕質(zhì)碳酸I丐300kg、磷酸二氫鉀10kg、氯化鈉0.2kg、硫酸鎂3kg、硫酸亞鐵10kg、氯化猛0.3kg，正己烷10kg、聚醚改性硅油30L。
[0088]先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至15°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量為:氨基氮5111^/1001111、溶磷301^/1111、總糖3111^/10011114!17。采用變溫控制工藝，O?50h:培養(yǎng)溫度27?28°C，51?130h:培養(yǎng)溫度29?30°C，131h?發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度27?28°C;采用變頻攪拌控制工藝，O?80h:轉(zhuǎn)速控制在80r/min，81?130h:轉(zhuǎn)速控制在IlOr/min，131h?發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在80r/min ;發(fā)酵培養(yǎng)過程中罐壓0.05?0.06MPa ；pH控制在 5 ?7 ;空氣流量:0 ?50h:150m3/h ；51 ?130h:200m3/h ；131h ?發(fā)酵結(jié)束:100m3/h ；發(fā)酵前50h內(nèi)，不控制溶氧；51?80h，溶氧控制在60%以上；81?130h，溶氧控制在30%以上；131?發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在40%以上。發(fā)酵培養(yǎng)140h終止發(fā)酵，菌體濃度35%、總糖7.6mg/100ml、氨基氮9.7mg/100ml、化學(xué)效價11621u/L、卷曲霉素I A+卷曲霉素I B含量 86.7%、ρΗ6.8。
[0089]實(shí)施例2
[0090]一級種子培養(yǎng):一級種子培養(yǎng)基體積Im3。
[0091]一級種子培養(yǎng)基組成:豆油3L、小麥麩皮13kg、麥芽糖9kg、麥芽糖酶3g、魚粉10kg、玉米楽13L、一浸豆柏粉8kg、硫酸錢0.6kg、輕質(zhì)碳酸|丐2kg。
[0092]首先將一級種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至16°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后一級種子培養(yǎng)基的質(zhì)量:氨基氮33mg/100ml、溶磷22ug/ml、總糖12.9mg/100ml、pH6.7。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的卷曲鏈霉菌母瓶發(fā)酵液0.13L接種量接入一級種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。一級種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?0.05MPa ;罐溫28?29°C ;空氣流量:0?15h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；16h?移種:25m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速65r/min。一級種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度22 %、pH值6.3、培養(yǎng)時間35h。
[0093]二級種子培養(yǎng):二級種子培養(yǎng)基體積10m3。
[0094]二級種子培養(yǎng)基祖成:豆油40L、小麥麩皮160kg、麥芽糖110kg、麥芽糖酶40g、魚粉130kg、蠶蛹粉50kg、一浸豆柏粉80kg、玉米蛋白粉110kg、硫酸錢3kg、輕質(zhì)碳酸|丐20kg ；首先將二級種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至16°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后的二級種子培養(yǎng)基的質(zhì)量:氨基氮37.5mg/100ml、溶磷32.lug/ml、總糖23mg/100ml、pH6.8。將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級種子培養(yǎng)基移入二級種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級種子培養(yǎng)，二級種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?0.05MPa ;罐溫28?30°C;空氣流量45m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速65r/min。至菌體濃度32%、pH值6.7、培養(yǎng)時間43h時移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0095]發(fā)酵培養(yǎng):發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
[0096]發(fā)酵培養(yǎng)基組成:豆油700L、小麥麩皮2200kg、麥芽糖2700kg、麥芽糖酶0.6kg、魚粉1700kg、蠶蛹粉1100kg、一浸豆柏粉1500kg、玉米蛋白粉1400kg、硫酸錢60kg、輕質(zhì)碳酸I丐400kg、磷酸二氫鉀20kg、氯化鈉0.3kg、硫酸鎂4kg、硫酸亞鐵20kg、氯化猛0.4kg，全氟化碳20kg、聚醚改性硅油40L。先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至16°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量為:氨基氮56mg/100ml、溶磷34ug/ml、總糖33mg/100ml、pH6.8。采用變溫控制工藝，O?50h:培養(yǎng)溫度27?28°C，51?130h:培養(yǎng)溫度29?30°C，13Ih?發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度27?28°C ;采用變頻攪拌控制工藝，O?80h:轉(zhuǎn)速控制在80r/min，81?130h:轉(zhuǎn)速控制在110r/min，131h?發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在80r/min ;發(fā)酵培養(yǎng)過程中罐壓 0.05 ?0.06MPa ;pH 控制在 5 ?7 ;空氣流量:0 ?50h:160m3/h ；51 ?130h:220m3/h ；131h?發(fā)酵結(jié)束:110m3/h ;發(fā)酵前50h內(nèi)，不控制溶氧；51?80h，溶氧控制在60%以上；81?130h，溶氧控制在30%以上；131?發(fā)酵結(jié)束:溶氧控制在40%以上。發(fā)酵培養(yǎng)143h終止發(fā)酵，菌體濃度38%、總糖7.lmg/100ml、氨基氮8.6mg/100ml、化學(xué)效價11973u/L、卷曲霉素I A+卷曲霉素I B含量87.2%、pH6.7。
[0097]實(shí)施例3
[0098]一級種子培養(yǎng):一級種子培養(yǎng)基體積Im3。
[0099]一級種子培養(yǎng)基組成:豆油4L、小麥麩皮14kg、麥芽糖10kg、麥芽糖酶4g、魚粉11kg、玉米楽14L、一浸豆柏粉9kg、硫酸錢0.7kg、輕質(zhì)碳酸|丐3kg。
[0100]首先將一級種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至17°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后一級種子培養(yǎng)基的質(zhì)量:氨基氮35mg/100ml、溶磷26ug/ml、總糖16mg/100ml、pH6.5。然后在火焰保護(hù)下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的卷曲鏈霉菌母瓶發(fā)酵液0.15L接種量接入一級種子培養(yǎng)基中進(jìn)行種子培養(yǎng)。一級種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?0.05MPa ;罐溫28?29°C;空氣流量:0?15h，采用空氣攪拌代替機(jī)械攪拌；16h?移種:30m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速70r/min。一級種子培養(yǎng)結(jié)束，菌體濃度25%、pH值6.6、培養(yǎng)時間40h。
[0101]二級種子培養(yǎng):二級種子培養(yǎng)基體積10m3。
[0102]二級種子培養(yǎng)基祖成:豆油50L、小麥麩皮170kg、麥芽糖120kg、麥芽糖酶50g、魚粉140kg、蠶蛹粉60kg、一浸豆柏粉90kg、玉米蛋白粉120kg、硫酸錢4kg、輕質(zhì)碳酸|丐30kg ；首先將二級種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至17°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后的二級種子培養(yǎng)基的質(zhì)量:氨基氮41mg/100ml、溶磷34.8ug/ml、總糖25mg/100ml、pH6.6。將已經(jīng)培養(yǎng)好的一級種子培養(yǎng)基移入二級種子培養(yǎng)基中進(jìn)行二級種子培養(yǎng)，二級種子培養(yǎng)條件為:罐壓0.03?0.05MPa ;罐溫28?30°C;空氣流量50m3/h ;攪拌轉(zhuǎn)速70r/min。至菌體濃度35%、pH值6.5、培養(yǎng)時間45h時移入發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0103]發(fā)酵培養(yǎng):發(fā)酵培養(yǎng)基體積100m3。
[0104]發(fā)酵培養(yǎng)基組成:豆油800L、小麥麩皮2300kg、麥芽糖2800kg、麥芽糖酶0.7kg、魚粉1800kg、蠶蛹粉1200kg、一浸豆柏粉1600kg、玉米蛋白粉1500kg、硫酸錢70kg、輕質(zhì)碳酸I丐500kg、磷酸二氫鉀30kg、氯化鈉0.4kg、硫酸鎂5kg、硫酸亞鐵30kg、氯化猛0.5kg，全氟化碳30kg、聚醚改性硅油50L。先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至18°C，并用無菌空氣保壓，滅菌后發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量為:氨基氮61mg/100ml、溶磷40ug/ml、總糖39mg/100ml、pH6.7。采用變溫控制工藝，O?50h:培養(yǎng)溫度27?28°C，51?130h:培養(yǎng)溫度29?30°C，13Ih?發(fā)酵結(jié)束:培養(yǎng)溫度27?28°C ;采用變頻攪拌控制工藝，O?80h:轉(zhuǎn)速控制在80r/min，81?130h:轉(zhuǎn)速控制在110r/min，131h?發(fā)酵結(jié)束:轉(zhuǎn)速控制在80r/min ;發(fā)酵培養(yǎng)過程中罐壓 0.05 ?0.06MPa ;pH 控制在 5 ?